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smad7基因过表达对L02肝细胞株增殖的影响

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上海第二医科大学学报 2005年第2期25卷 103-106页

作者：陈颖伟陈源文王连升李定国上海第二医科大学新华医院消化内科上海200092

目的观察外源smad7基因对L0 2肝细胞株增殖活性的影响。方法分别以重组腺病毒Adsmad7和对照病毒AdGFP在体外感染L0 2肝细胞 ,以RT PCR和Western blot检测外源smad7基因表达情况 ,MTT法检测L0 2肝细胞增殖活性 ,流式细胞仪检测其细胞周... 详细信息

目的观察外源smad7基因对L0 2肝细胞株增殖活性的影响。方法分别以重组腺病毒Adsmad7和对照病毒AdGFP在体外感染L0 2肝细胞 ,以RT PCR和Western blot检测外源smad7基因表达情况 ,MTT法检测L0 2肝细胞增殖活性 ,流式细胞仪检测其细胞周期变化。结果Adsmad7体外感染L0 2肝细胞后 ,smad7mRNA和蛋白水平均显著上调。转化生长因子 β(TGFβ)可抑制L0 2细胞增殖 ,诱导其凋亡。导入外源smad7可拮抗TGFβ的作用。结论利用Adsmad7导入外源smad7基因可间接促进肝细胞增殖。

关键词： smad7基因肝细胞增殖增殖过表达体外感染凋亡 L02细胞外源蛋白水平利用

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smad7基因沉默对细胞增殖的影响

中华医学杂志 2004年第22期84卷 1909-1910页

作者：王莹霍艳英张开泰王莉项晓琼胡迎春徐勤枝李刚米粲吴德昌军事医学科学院放射医学研究所四室北京100850 重庆医科大学病理学教研室

TGF-β是一种多功能的细胞因子,可调节细胞的分化、增殖和凋亡.它对多种上皮细胞尤其是支气管上皮细胞的生长、增殖有很强的抑制作用[1].smad7作为TGF-β信号转导通路的抑制分子,可以抑制TGF-β信号在胞浆内的传导[2].我们以永生化人支... 详细信息

TGF-β是一种多功能的细胞因子,可调节细胞的分化、增殖和凋亡.它对多种上皮细胞尤其是支气管上皮细胞的生长、增殖有很强的抑制作用[1].smad7作为TGF-β信号转导通路的抑制分子,可以抑制TGF-β信号在胞浆内的传导[2].我们以永生化人支气管上皮细胞BEP2D,及恶性转化的BERP35T2细胞为基础所做的研究表明:smad7基因的表达随细胞恶性度增高而增高[3],smad7表达高的细胞增殖能力强,TGF-β对该细胞介导的生长抑制效应弱,说明smad7表达增高同BEP2D细胞恶性转化有关[4].国外研究还表明,smad7参与TGF-β1对前列腺癌细胞凋亡的调控[5].为了进一步调查在人支气管上皮细胞恶性转化过程中,smad7所起的作用,我们通过RNAi技术使smad7基因沉默后,检测细胞的增殖能力是否改变,TGF-β1对smad7基因沉默细胞的作用有无相应变化及细胞的凋亡率有无变化。

关键词： smad7基因 TGF—β 细胞增殖胞浆人支气管上皮细胞恶性转化信号转导通路节细胞分化永生化

转染smad7基因的大鼠肾系膜细胞uPA及PAI-1表达的改变

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复旦学报（医学版） 2004年第1期31卷 5-8页

作者：于鸿王小刚汪怡陈琦张秀荣郭慕依复旦大学上海医学院病理学系上海200032

目的通过对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MsC)转染smad7基因,观察转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达的改变,以进一步阐明smad7阻断组织纤维化过程的作用机制。方法经脂质体介导将含有smad7重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及RT... 详细信息

目的通过对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MsC)转染smad7基因,观察转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达的改变,以进一步阐明smad7阻断组织纤维化过程的作用机制。方法经脂质体介导将含有smad7重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及RT-PCR、Western blot法鉴定;又分别采用RT-PCR与Western blot法,检测转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达改变。结果成功建立高表达smad7的阳性MsC克隆(S-22、S-26),并证实其uPA mRNA及蛋白表达明显增加,而PAI-1 mRNA及其蛋白的表达显著下降。结论 smad7可能通过增强组织内uPA酶的生成和减少PAI-1的合成而减轻组织纤维化进展。

关键词：基因转染 smad7基因大鼠 uPA PAI-1 基因表达肾小球系膜细胞尿激酶型纤溶酶原激活物纤溶酶原激活物抑制因子-1

smad7基因非编码区遗传多态对云南汉族人群结直肠癌患病的影响

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SMAD7基因非编码区遗传多态对云南汉族人群结直肠癌患病的影响

作者：卢春燕云南大学

学位级别：硕士

背景：结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于肺癌和乳腺癌,且呈稳定增长趋势。目前结直肠癌的发病机理尚未完全阐明,但病因学研究表明,结直肠癌的发生是一个多阶段、多步骤、多基因参与的过程,环境因素和遗传因素的联合... 详细信息

背景：结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于肺癌和乳腺癌,且呈稳定增长趋势。目前结直肠癌的发病机理尚未完全阐明,但病因学研究表明,结直肠癌的发生是一个多阶段、多步骤、多基因参与的过程,环境因素和遗传因素的联合作用导致了结直肠癌的发生。smad7是转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路的抑制元件,可选择性抑制TGF-β信号转导通路。而TGF-β信号转导通路的异常同结肠直肠癌、胰腺癌、肺癌、皮肤癌等多种肿瘤的发生有关。因此,smad7也被认为是结肠直肠癌的一个候选基因。全基因组关联研究在smad7基因上识别了几个与结直肠癌相关的单核苷酸多态位点,但关于这些位点对结肠直肠癌发病的影响作用,来自不同研究小组的结果却不一致,表现出该基因遗传多态对结直肠癌易感影响的人群差异。但云南人群的相关研究数据尚缺乏。本研究即是期望对smad7基因的单核苷酸多态对云南汉族结直肠癌的影响进行初步评估。方法：本研究共纳入577例病例样本和584例正常对照样本,样本采自云南省第一人民医院,均为云南汉族人群。用酚-氯仿抽提法提取DNA,用PCR-RFLP方法对smad7基因非编码区的5个标签SNPs rs11874392、rs12953717、rs3736242、rs1316447和rs16950113(前4个在内含子区,第5个在3’UTR)位点进行基因型分型,用logistic回归分析检测遗传变异(等位基因,基因型和单倍型)与结直肠癌之间的关联性。结果：1.单位点的五种遗传模式分析得到基本一致的影响作用结果：内含子区rs11874392和rs3736242的A等位基因为结直肠癌患病的风险因素;同样是内含子区的rs12953717和rs1316447的T等位基因和3’UTR rs16950113的C等位基因为结直肠癌的保护因素。2.进行直肠癌和结肠癌分层分析,结果显示：rs11874392和rs3736242在不同遗传模型下基本都同样表现出增加直肠癌和结肠癌患病风险的关联性;rs1316447在不同遗传模型下都同样表现降低结肠癌和直肠癌发病作用的关联性,而rs12953717仅表现出对直肠癌风险降低的作用;rs16950113则在任何一种遗传模型下都与结肠癌或直肠癌无关联。3.按照rs16950113-rs11874392-rsl2953717-rs1316447-rs3736242的单倍型结构,无论是结直肠癌综合分析还是结肠癌和直肠癌分别分析,6种主单倍型均表现出与结直肠癌的关联：H1、H4和H6单倍型为结肠癌和直肠癌的保护单倍型,H2、H3和H5单倍型为结肠癌和直肠癌的风险单倍型。结论：我们的研究结果提示,smad7基因是一个重要的结直肠癌候选基因,其上非编码区的遗传多态对结直肠癌发病的影响值得进一步关注。

关键词：结直肠癌 smad7基因单核苷酸多态结肠癌直肠癌

smad6和smad7基因治疗对肾小管间质纤维化进程的影响

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中华肾脏病杂志 2004年第5期20卷 358-363页

作者：黄云剑赵景宏张憬范晓棠张金海蔡文琴第三军医大学新桥医院肾内科全军肾脏病治疗中心重庆400037 第三军医大学神经生物教研室

目的观察腺相关病毒(rAAV)介导的smad6和smad7基因治疗对单侧输尿管梗阻性(UUO)肾小管间质纤维化进程的影响。方法构建产生表达smad6和smad7基因的无辅毒腺相关病毒载体,再将此病毒颗粒通过肾动脉途径转移到UUO模型。30只Wistar大鼠随... 详细信息

目的观察腺相关病毒(rAAV)介导的smad6和smad7基因治疗对单侧输尿管梗阻性(UUO)肾小管间质纤维化进程的影响。方法构建产生表达smad6和smad7基因的无辅毒腺相关病毒载体,再将此病毒颗粒通过肾动脉途径转移到UUO模型。30只Wistar大鼠随机分为假手术组、梗阻组、LacZAAV转染组、smad6AAV转染组和smad7AAV转染组(n=6),于术后第3周处死大鼠。采用β-半乳糖苷酶染色和免疫组化观察外源基因的定位,Western印迹法观察外源基因、胞内磷酸化smad2、PAI-1和α-SMA的表达;底物酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性,分光光度法测定肾组织羟脯氨酸含量。结果smad6和smad7成功地转染到外髓的肾小管间质区,定位在肾小管和集合管细胞,而血管细胞、肾小球或间质细胞均未见有AAV转移基因的表达。smad7基因治疗可显著降低肾组织PAI-1、α-SMA的表达和肾组织羟脯氨酸含量,增加MMP-2和MMP-9活性,这些作用与smad7阻断smad2磷酸化有关。相反,smad6没有这样的治疗作用。结论smad7基因转移能有效缓解单侧输尿管梗阻肾小管间质纤维化,AAV介导的smad7基因转移有望成为治疗肾小管间质纤维化的方法之一。

关键词： smad7基因肾小管间质纤维化治疗转染肾组织表达观察外源基因毒腺磷酸化

肝纤维化大鼠星状细胞smad3、smad7基因表达差异的研究

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华中科技大学学报（医学版） 2002年第1期31卷 33-35,59页

作者：张国王天才唐望先王颖李勤梁扩寰华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所武汉430030

通过检测肝纤维化大鼠原代肝星状细胞 (HSC)的 Sm ad3和 smad7编码基因的表达 ,探讨 HSC活化及转化机制。皮下注射四氯化碳 (CCl4)制备大鼠肝纤维化模型 ,于注射 CCl4后 1、 4、 8周分批分离 HSC并计算 HSC平均得率 ;RT- PCR检测其 Sm ... 详细信息

通过检测肝纤维化大鼠原代肝星状细胞 (HSC)的 Sm ad3和 smad7编码基因的表达 ,探讨 HSC活化及转化机制。皮下注射四氯化碳 (CCl4)制备大鼠肝纤维化模型 ,于注射 CCl4后 1、 4、 8周分批分离 HSC并计算 HSC平均得率 ;RT- PCR检测其 Sm ad3、smad7m RNA的表达变化。结果显示 :1CCl4注射后第 1、 4、 8周大鼠 HSC平均得率分别为 :(3.34± 0 .36 )× 10 7/只、 (4 .2 1± 0 .6 4)× 10 7/只、 (5 .88± 0 .79)× 10 7/只 ,均高于正常大鼠 HSC平均得率(2 .2 3± 0 .19)× 10 7/只 ,组间比较有显著性差异 ,P7m RNA较正常明显升高 ,Psmad7在肝纤维化发生、发展中对 HSC的活化及转化起不同的介导作用。

关键词：肝纤维化肝星状细胞 smad3基因 smad7基因基因表达

TGF-β1和smad4及smad7基因在体外培养的小鼠原代肾小管上皮细胞中表达情况的检测

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中国兽医科学 2007年第7期37卷 606-609页

作者：王彦英王典仁沈红张中文吴国娟北京农学院动物科学技术系北京102206

采用肾小管节段贴块法培养小鼠原代肾小管上皮细胞,用免疫细胞荧光染色法鉴定细胞种类,并用RT-PCR检测了原代肾小管上皮细胞中TGF-β1、smad4和smad7基因的表达情况。结果表明,TGF-β1、smad4和smad7基因在肾小管上皮细胞中均有表达。... 详细信息

采用肾小管节段贴块法培养小鼠原代肾小管上皮细胞,用免疫细胞荧光染色法鉴定细胞种类,并用RT-PCR检测了原代肾小管上皮细胞中TGF-β1、smad4和smad7基因的表达情况。结果表明,TGF-β1、smad4和smad7基因在肾小管上皮细胞中均有表达。这为探讨上述基因在肾间质纤维化中的作用奠定了基础。

关键词：肾小管上皮细胞 TGF-β1基因 smad4基因 smad7基因体外表达

外源smad7基因对原代肝星状细胞活性和基因表达调控的影响

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中华消化杂志 2005年第7期25卷 409-412页

作者：陈颖伟陈源文尤汉宁李定国上海第二医科大学附属新华医院消化内科 200092

目的研究外源smad7基因对原代肝星状细胞(HSC)活性和基因表达调控的影响。方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,并予转化生长因子β1(TGFβ1)刺激,同时分别以重组腺病毒Adsmad7和对照病毒AdGFP感染原代HSC,RTPCR... 详细信息

目的研究外源smad7基因对原代肝星状细胞(HSC)活性和基因表达调控的影响。方法采用胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,并予转化生长因子β1(TGFβ1)刺激,同时分别以重组腺病毒Adsmad7和对照病毒AdGFP感染原代HSC,RTPCR法检测TGFβ1、smad3mRNA、smad7mRNA在HSC中的表达,免疫细胞化学法检测HSC中α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和smad7表达。结果RTPCR显示,与TGFβ1对照组比较,Adsmad7组smad7mRNA表达显著上调(Psmad3mRNA表达差异无统计学意义。免疫细胞化学染色显示,与其他各组比较,Adsmad7组HSC胞质中smad7表达最高,αSMA表达则明显降低(Psmad7可在HSC中高效表达;外源smad7基因可阻断TGFβ1对HSC的活化作用,但对smad3和TGFβ1mRNA表达无明显影响。

关键词：腺病毒载体肝星状细胞转化生长因子 smad7基因基因表达调控细胞活性星状细胞(HSC) 外源 Adsmad7 mRNA表达

smad7基因的克隆、表达及对c-myc基因的调控

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生命科学研究 2004年第3期8卷 231-236页

作者：霍艳英胡迎春徐勤枝项晓琼段瑞峰李刚张开泰吴德昌军事医学科学院放射医学研究所四室中国北京100850

smad7是TGF-β家族信号转导通路的抑制分子,可反馈调节TGF-β/smads信号转导通路,从功能推测,smad7表达紊乱,可影响细胞对TGF-β的应答,从而促进细胞的恶性化进展,为了深入探讨smad7基因功能,通过设计引物,用Touchdown巢式-PCR法从人胎... 详细信息

smad7是TGF-β家族信号转导通路的抑制分子,可反馈调节TGF-β/smads信号转导通路,从功能推测,smad7表达紊乱,可影响细胞对TGF-β的应答,从而促进细胞的恶性化进展,为了深入探讨smad7基因功能,通过设计引物,用Touchdown巢式-PCR法从人胎脑文库中扩增smad7基因编码区全长,回收产物,克隆并构建真核表达载体,同融合有报告基因的c-myc顺式增强子元件共转染BEP2D细胞,结果表明:TGF-β可抑制c-myc报告基因的活性,smad7基因可正调控c-myc报告基因的表达,并拮抗TGF-β对该基因的抑制作用.由此得出结论:smad7基因通过拮抗TGF-β来调控c-myc基因.

关键词： smad7基因 c-myc基因克隆表达