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中国乳品工业 2010年第8期38卷 8-10,31页

作者：双杰包秋华永胜王艳霞张和平格日勒图青海大学医学院病原生物学教研室西宁810018 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特010018

从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(*** ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-layers pro-te... 详细信息

从内蒙古传统发酵乳制品中分离的几种乳酸菌,包括干酪乳杆菌、乳酸乳球菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、双歧乳杆菌和嗜酸乳杆菌标准株(*** ATCC4356)等为实验材料,应用SDS-PAGE方法和PCR方法分别进行S-层蛋白(S-layers pro-tein,slp)的普查和slp基因的检测。结果表明:在各种乳酸菌中,经SDS-PAGE电泳方法检测,只有植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和其标准菌株的样品中出现膜外蛋白的可疑条带,大小为44～66ku之间,与文献报道的slp基因表达产物大小范围是一致;经PCR方法检测,只有嗜酸乳杆菌和其标准菌株*** ATCC4356中扩增出slp基因可疑条带,其大小约为1 300 bp。并对嗜酸乳杆菌slp基因进行克隆、基因序列测序和分析。

关键词：嗜酸乳杆菌 S-层蛋白 slp基因克隆与序列分析

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乳杆菌表层蛋白对菌株表面特性和益生特性的影响

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现代食品科技 2021年第11期37卷 43-49,33页

作者：李佳珣张秋香王瑞赵建新江南大学食品学院江苏无锡214122

为评估乳杆菌表层蛋白对菌株特性的影响,该研究通过序列比对筛选出含slp基因的乳杆菌,之后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其中部分菌的slp基因表达情况进行鉴定,并测定了表层蛋白去除前后菌体生长的吸光度值、自聚集... 详细信息

为评估乳杆菌表层蛋白对菌株特性的影响,该研究通过序列比对筛选出含slp基因的乳杆菌,之后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其中部分菌的slp基因表达情况进行鉴定,并测定了表层蛋白去除前后菌体生长的吸光度值、自聚集率、自成膜量、与致病菌共聚集率等特性。结果表明,4株嗜酸乳杆菌、30株卷曲乳杆菌、3株瑞士乳杆菌、30株鼠李糖乳杆菌都含有slp基因,经过SDS-PAGE鉴定了四种菌的部分菌株均表达表层蛋白,且其表层蛋白与菌株的特性密切相关。比如,在生长方面,瑞士乳杆菌去除表层蛋白前后生长能力差异很大,但氯化锂溶液和蛋白酶K两种溶液处理的吸光度值差距较小,差值仅在0.2以内;在与致病菌共聚集方面,大部分菌株在不同处理过程中没有较大差异,有趣的是,本身自聚能力弱的鼠李糖乳杆菌3-1表现出来的与致病菌极强的共聚能力,这株菌的在口腔方面的防龋潜力值得进一步探究。该研究丰富了人们对乳杆菌表层蛋白的了解,为深入探究表层蛋白的功能和应用奠定理论基础。

关键词：乳杆菌表层蛋白表面特性序列比对 slp基因

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短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析

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中国畜牧兽医 2012年第8期39卷 26-30页

作者：兰丽魏建民王艳霞王敏满达格日勒图内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010018

S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法... 详细信息

S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法克隆出***的slp基因,对该slp基因进行测序及序列分析。试验结果表明,SDS-PAGE电泳结果显示***样品在44～55 ku之间出现目的条带,与文献报道的S-层蛋白大小范围一致;PCR方法正确扩增出大小约为1300 bp的slp基因,经DNAStar软件遗传分析发现该基因与鸡乳酸杆菌株(GenBank登录号:AY597266.1)的亲缘关系和遗传距离最近,与其他种类乳酸菌遗传距离也非常相近;经Genetyx生物软件推导出的S-层蛋白大小理论值约为47 ku,具有显著的外膜蛋白的特性。本试验为后续遗传改造等研究工作奠定基础。

关键词：短小乳杆菌 S-层蛋白 slp基因克隆与序列分析

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G-CSF促进子宫内膜增殖的机理研究

G-CSF促进子宫内膜增殖的机理研究

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作者：孙亚喃河北医科大学

学位级别：硕士

目的:对人子宫内膜细胞进行体外培养,应用不同浓度G-CSF作用于细胞,观察其对人子宫内膜细胞增殖情况的影响并研究其作用机制。方法:1采用胶原酶I消化和离心法在体外分离和培养原代人子宫内膜上皮细胞和基质细胞并传代,采用光学显微镜、... 详细信息

目的:对人子宫内膜细胞进行体外培养,应用不同浓度G-CSF作用于细胞,观察其对人子宫内膜细胞增殖情况的影响并研究其作用机制。方法:1采用胶原酶I消化和离心法在体外分离和培养原代人子宫内膜上皮细胞和基质细胞并传代,采用光学显微镜、倒置相差显微镜观察人子宫内膜细胞的形态和结构;用免疫细胞化学方法鉴定人子宫内膜上皮细胞和基质细胞;2用MTT法观察不同浓度(0pg/mL、50pg/mL、100pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、800pg/ml、1000pg/mL)G-CSF对上皮细胞和基质细胞分别作用24h、48h、72h的影响,挑选最适浓度和时间作为后续实验组;3用免疫荧光和免疫细胞化学方法鉴定细胞的G-CSF受体;4采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative RT-PCR))方法检测实验组与对照组PCNA基因和slp基因mRNA表达水平,并比较两组间的差异;5应用Western-blot检测实验组与对照组β-catenin蛋白的表达水平,并比较两组间的差异。结果:1.经0.2%I型胶原酶消化并离心后的子宫内膜上皮细胞和基质细胞的分离成功率均分别>90%。经免疫细胞化学染色后,上皮细胞胞质对角蛋白抗体呈阳性反应,基质细胞胞质对波形蛋白抗体呈阳性反应。***实验显示人子宫内膜上皮细胞在G-CSF>500pg/ml的浓度下体外培养48小时,细胞存活率最高。子宫内膜基质细胞在G-CSF为500pg/ml的浓度下体外培养72小时,细胞存活率最高。3.采用免疫荧光检测G-CSF受体显示上皮细胞呈阳性反应—红色荧光,基质细胞呈阳性反应—绿色荧光。免疫细胞化学方法显示上皮细胞和基质细胞均呈棕黄色。说明上皮细胞和基质细胞中都存在G-CSF受体。4.采用RT-PCR检测到实验组上皮细胞和基质细胞的PCNA和slp mRNA相对表达量均较对照组升高。5.采用Western-blot检测到实验组上皮细胞和基质细胞的β-catenin基因蛋白相对表达量均较对照组升高。结论:1.人子宫内膜上皮细胞在G-CSF>500pg/ml的浓度下体外培养48小时,细胞存活率最高。子宫内膜基质细胞在G-CSF为500pg/ml的浓度下体外培养72小时,细胞存活率最高。2.子宫内膜上皮细胞和基质细胞中均存在G-CSF受体,G-CSF是通过促进上皮细胞和基质细胞中PCNA基因和slp基因的表达、调高Wnt信号通路上β-catenin蛋白的表达从而促进内膜细胞增殖的。

关键词：人粒细胞集落刺激因子(G-CSF) 子宫内膜细胞子宫内膜增殖 PCNA基因 slp基因 Wnt信号通路

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