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β-catenin特异性siRNA转染肾母细胞瘤细胞sk-nep-1对细胞增殖的影响

中华小儿外科杂志 2012年第2期33卷 139-143页

作者：陆良生李凯肖现民复旦大学附属儿科医院外科上海201102

目的采用RNAi技术抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin基因（CTNNB1）的表达,观察对肾母细胞瘤细胞株sk-nep-1细胞增殖的影响,并检测通路下游相关基因及β-catenin蛋白表达水平的变化及意义.方法将两种不同序列β-catenin特异性si... 详细信息

目的采用RNAi技术抑制Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin基因（CTNNB1）的表达,观察对肾母细胞瘤细胞株sk-nep-1细胞增殖的影响,并检测通路下游相关基因及β-catenin蛋白表达水平的变化及意义.方法将两种不同序列β-catenin特异性siRNA瞬时转染到sk-nep-1细胞中,实验分为4组：未转染组（UT）、阴性对照组（NS）、siRNA1组（S1）、siRNA2组（S2）,分别在转染后的0、24、48、72 h用CCK-8试剂盒检测比较各组光吸收度值（AV）；在转染24 h后检测各组中CTNNB1、CCND1、MYC基因的表达水平；转染48 h后免疫荧光法检测各组中β-catenin蛋白的表达水平.结果转染优化实验表明,100 nmol/L的β-catenin特异siRNA1和siRNA2均可获得有效抑制效应.瞬时转染24 h,UT组的AV值（0.62±0.03）分别是S1组（0.49±0.02）和S2组（0.50±0.02）的1.25倍和1.23倍（P＜0.01）,48 h后UT组的AV值（1.03±0.07）分别是S1组（0.69±0.04）和S2组（0.72±0.03）的1.48倍和1.43倍（P＜0.01）,转染组细胞增殖明显受到抑制.转染24h后S1和S2组CTNNB1的mRNA水平分别被敲减了67％和73％,S1、S2组与UT组比较,下游基因CC-ND1、MYC的mRNA表达水平也明显降低,CCND1组间比较P＜0.01；MYC组间比较P＜0.05,而UT组与NS组比较,CTNNB1、CCND1、MYC基因的P值均＞0.05.转染48 h后,积分光密度/面积（IOD/Area）值分析比较各组β-catenin荧光强度,S1组（0.50±0.36）、S2组（0.58±0.20）较UT组（2.06±0.30）、NS组（2.03±0.53）明显减少,P＜0.01.结论瞬时转染β-catenin特异性siRNA能抑制sk-N EP-1细胞的增殖,使细胞中β-catenin蛋白的表达降低,Wnt/β-catenin信号通路下游相关基因MYC及CCND1表达下调.β-catenin是肾母细胞瘤分子靶向治疗的一个潜在新靶点.

关键词： β-catenin siRNA sk-nep-1 肾母细胞瘤

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存活素选择性抑制剂YM155可诱导sk-nep-1肾母样肿瘤细胞的凋亡

存活素选择性抑制剂YM155可诱导SK-NEP-1肾母样肿瘤细胞的凋亡

引用

第十三届江浙沪儿科学术会议暨2016年浙江省医学会儿科...

作者：任俊丽陶燕芳杜薇薇李之珩李晓璐徐利晓肖佩芳胡绍燕潘健卢俊苏州大学附属儿童医院血液科

背景:存活素,作为凋亡蛋白抑制剂家族的一员,在有丝分裂和程序性细胞死亡中发挥关键调节作用。YM155是一种新的分子靶向药物,可抑制许多肿瘤类型中过度表达的生存素。本项研究的目的是确定YM155在sk-nep-1细胞中具有抗肿瘤活性。方法:... 详细信息

背景:存活素,作为凋亡蛋白抑制剂家族的一员,在有丝分裂和程序性细胞死亡中发挥关键调节作用。YM155是一种新的分子靶向药物,可抑制许多肿瘤类型中过度表达的生存素。本项研究的目的是确定YM155在sk-nep-1细胞中具有抗肿瘤活性。方法:在体外和体内,sk-nep-1细胞生长用MTT和裸鼠实验进行评估;采用流式细胞分析和膜联蛋白V/碘化丙啶染色来检测细胞凋亡;YM155处理的肿瘤细胞的基因表达图谱采实时定量PCR分析;然后,我们采用MEV(多实验视图)集群软件分析表达数据。来源于集群分析的改变了表达谱的数据集表达基因被导入到创新路径分析工具中。结果:YM155可以剂量依赖性地抑制sk-nep-1细胞的细胞增殖。膜联蛋白V测定、细胞周期和caspase-3的活化说明:YM155诱导sk-nep-1细胞的凋亡。与DMSO组(DMSO:3.70±2.4 cm3)或PBS组(PBS:3.78±2.20 cm3)相比,YM155(YM155 5 mg/kg:1.45±0.77 cm3;YM155 10 mg/kg:0.95±0.55 cm3)显著地抑制sk-nep-1异种移植的增长;与DMSO组(DMSO:2.06±0.38 g)或PBS组(PBS:2.36±0.43g)相比,YM155组(YM155 5 mg/kg:1.05±0.24 g;YM155 10 mg/kg:0.72±0.17g)可减少肿瘤的重量;实时荧光定量PCR分析发现:给予YM155后,试验组和对照组相比,有32个基因显著上调,54个基因显著下调。IPA分析表明:细胞死亡在关系网中占很大比例,具有65个重点分子,而显著得分是44。IPA分析表明:不同的表达基因可导致不同的的生物学机制,这些生物学机制包括细胞死亡、细胞功能的维持、细胞形态、碳水化合物的代谢和细胞生长和增殖。死亡受体信号(3.87E-19),TNFR1信号,诱导细胞凋亡的HIV-1,细胞凋亡信号和肿瘤分子机制是四大最显著的途径。IPA分析也表明高级分子上调包括BBC3,BIRC3,BIRC8,BNIP1,CASP7,CASP9,CD5,CDKN1A,CEBPG and COL4A3,高级分子下调有ZNF443,UTP1 1L,TP73,TNFSF10,TNFRSF1B,TNFRSF25,TIAF1,STK17A,SST and SPP1,上游调节有NR3C1,TP53,dexamethasone,TNF,Akt.结论:本研究表明,YM155可导致细胞凋亡和抑制sk-nep-1细胞的增殖。YM155在sk-nep-1裸鼠移植瘤治疗中作用显著,副作用小。实时荧光定量PCR分析第一次表明YM155处理后,基因表达谱增加。IPA分析也表明:YM155治疗的新分子机制,如NR3C1和地塞米松可能是YM155的新靶点。而我们的研究结果可为YM155诱导的细胞凋亡分子机制提供新的思路。

关键词： YM155 sk-nep-1 存活素凋亡实时定量PCR分析

来源： cnki会议评论

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