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sip1基因在先天性巨结肠症中的表达研究

中华小儿外科杂志 2012年第2期33卷 92-96页

作者：伍美弭杰高红中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的研究sip1 （smad-interacting protein 1）基因在先天性巨结肠症（Hirschsprung Disease,HD）中的表达情况,探讨sip1与HD发病的关系.方法利用荧光实时定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）、蛋白印迹（Western blot）和免疫组化方法检测30例HD狭窄段（无神经节细胞）和正常段（神经节细胞）肠管组织患儿sip1的表达,并对其表达进行定量与比较分析.结果 sip1在HD狭窄段肠管中mRNA表达为19.19±0.23,均高于正常段肠管中的表达11.06±1.12,差异有统计学意义（P＜0.05）.Western Blot结果显示,sip1在HD狭窄段肠管中蛋白相对含量为53.73±0.49,明显高于正常段肠管蛋白含量18.32±1.54,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组化结果显示,sip1在HD狭窄段肠管中高表达,呈棕黄色；正常段肠管低表达,无色或淡黄色.结论 sip1 mRNA与蛋白在HD狭窄段肠管中高表达,提示sip1与HD的发生有密切关系,可能在先天性消化道畸形的肠道发育中具有重要作用.

关键词：先天性巨结肠 sip1基因蛋白印迹免疫组织化学

pFGC5941的改造及拟南芥NAC1和sip1双基因反义表达载体的构建和遗传转化

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植物分类与资源学报 2012年第4期34卷 403-408页

作者：梁鹏孔祥翔王春涛查向东胡向阳安徽大学生命科学学院安徽合肥230031 中国科学院昆明植物研究所云南昆明650201

拟南芥中的sip1基因编码的蛋白与拟南芥盐胁迫应答中的关键蛋白SOS2存在互作关系,而NAC1为拟南芥中介导生长素信号促进其侧根发生的蛋白。本研究中我们将sip1基因和NAC1正义基因以及sip1基因和NAC1反义基因分别整合到一个经改造的具有2... 详细信息

拟南芥中的sip1基因编码的蛋白与拟南芥盐胁迫应答中的关键蛋白SOS2存在互作关系,而NAC1为拟南芥中介导生长素信号促进其侧根发生的蛋白。本研究中我们将sip1基因和NAC1正义基因以及sip1基因和NAC1反义基因分别整合到一个经改造的具有2个35S启动子的可用于双基因表达的载体pF-GC5941S中,构建了两个双基因表达载体pFGC5941S-sip1-NAC1-sense和pFGC5941S-sip1-NAC1-anti。并将这两个载体通过农杆菌介导的方法转化到野生型拟南芥中,共获得15株转基因植株。对这些转基因植株进行盐胁迫实验发现,在含75mmol·L-1NaCl的MS培养基上,相比于野生型,pFGC5941S-sip1-NAC1-sense转基因植株主根增长,侧根数量明显增多,而pFGC5941S-sip1-NAC1-anti转基因植株长势与野生型苗相似。由此我们推测可能只有当sip1和NAC1同时过表达时,才会促进盐胁迫下拟南芥侧根的发育。

关键词： NAC1基因 sip1基因反义表达载体双基因表达载体拟南芥转化表型

sip1单核苷酸多态性rs41292293和rs34961586与先天性巨结肠的关系

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中华小儿外科杂志 2009年第9期30卷 604-608页

作者：高红张娟吕良英张志波王维林中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳110004

目的探讨sip1基因单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）rs41292293和rs34961586与先天性巨结肠病（Hirschsprung disease，HSCR）关系，为评估HSCR患病风险奠定基础。方法提取病例组（HSCR患儿）和对照组（正常健康人）各180例外周血基因组DNA，聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）法扩增sip1基因2个外显子（exon5-rs41292293和exon6-rs34961586），PCR产物用限制性内切酶HhaI和RsaI消化与测序，以进一步确定基因突变位点，应用X^2检验统计分析病例组和对照组等位基因频率、基因型频率及其患病风险。结果HSCR组与对照组SJP1 rs41292293 GA和GG基因型频率及A和G等位基因频率差异显著（P〈0.05），AA基因型高于GG基因型，AG在HSCR组中存在多态性，对照组与HSCRSNPs基因型分布GA、AA和GG分别为48．89％、35．00％和16．11％与37．78％、49．44％和12．78％，比较发现A（68．33％）和G（31．67％）等位基因频率有显著性差异（P〈0．05）；HSCR组与对照组sipI rs34961586 GC和GG基因型频率及C和G等位基因频率差异显著（P〈0．05）,GG基因型显著高于CC基因型，GC在HSCR组中存在多态性，对照组与HSCRSNPs基因型分布GC、GG和CC分别为34．44％、56．11％和9．45％与46．11％、39．44％和14．45％，比较发现G（65．83％）和C（34．17％）等位基因频率有显著性差异（P〈0．05）。测序rs41292293第268和256位密码子核苷酸CCC→CGA和TGG→TGT杂合突变；rs3496i586第135位密码子核苷酸CCA—CAC、TGC→TTC和TGC—TGG杂合突变。结论sip1 rs41292293和rs34961586与HSCR的发生有密切关系。为进一步研究该基因SNPs与其生理功能和疾病的关系提供基础资料。

关键词： Hirschsprung病 sip1基因多态性单核苷酸等位基因

双向等位基因特异性PCR快速区分纯合子和杂合子SNP分型的新方法

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医学分子生物学杂志 2008年第6期5卷 524-528页

作者：高红张志波王维林张娟吕良英黄英中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳市110004 中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳市110004 辽宁省锦州市妇婴医院小儿外科辽宁省锦州市121000

目的建立一种基于单碱基改变基因分型的快速检测等位基因特异性双向PCR原理的改良SNP分型新方法:双向等位基因特异性PCR(Bi-PASA)在一次PCR反应中区分纯合子和杂合子的方法。方法以SNP位点rs11293201和rs57148397为例,设计两个外部引物(... 详细信息

目的建立一种基于单碱基改变基因分型的快速检测等位基因特异性双向PCR原理的改良SNP分型新方法:双向等位基因特异性PCR(Bi-PASA)在一次PCR反应中区分纯合子和杂合子的方法。方法以SNP位点rs11293201和rs57148397为例,设计两个外部引物(F与R)和两个内部等位基因特异性引物(P与Q)。同时与测序方法对比检测突变。结果两个内部引物(P和Q)包含一个相对短的完全匹配区域和一个富含GC的10核苷酸5′尾。当基因组DNA被先期扩增出的模板DNA取代时内引物完成从低效扩增到高效扩增的转变,其结果与直接测序完全一致。利用Bi-PASA参数的优化在人类sip1基因常见突变的外显子中详细研究先天性巨结肠病,3种额外的Bi-PASA分析被快速优化。结论Bi-PASA是一种简单快速而有效的SNP分型新方法,是在一个PCR反应中检测已知突变的方法。

关键词：单核苷酸多态性双向等位基因特异性PCR sip1基因先天性巨结肠病