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中国免疫学杂志 2022年第8期38卷 897-902页

作者：黄灵邹有瑞李琢琦岳芳倩马辉(指导) 宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏医科大学总医院神经外科银川750004

目的:探讨特异性AKT抑制剂sh-6联合慢病毒沉默CHKA基因在体内外对胶质瘤细胞系U87增殖、侵袭的影响及机制。方法:构建CHKA短发夹CHKA(shCHKA)慢病毒及对照慢病毒(shNC)感染U87细胞系并设置分组。分别采用CCK-8法检测胶质瘤细胞的增殖,... 详细信息

目的:探讨特异性AKT抑制剂sh-6联合慢病毒沉默CHKA基因在体内外对胶质瘤细胞系U87增殖、侵袭的影响及机制。方法:构建CHKA短发夹CHKA(shCHKA)慢病毒及对照慢病毒(shNC)感染U87细胞系并设置分组。分别采用CCK-8法检测胶质瘤细胞的增殖,流式细胞术检测胶质瘤细胞的周期、凋亡,Transwell实验观察胶质瘤细胞侵袭。胶质瘤动物模型实验评估联合治疗效果并记录肿瘤体积变化,采用免疫组化及Western blot检测胶质瘤细胞及肿瘤组织中CHKA、PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果:联合治疗能显著抑制胶质瘤细胞的增殖及侵袭,细胞周期主要停滞在G2期,细胞凋亡率显著增加,联合治疗能够使CHKA、PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达量降低。结论:sh-6联合慢病毒沉默CHKA在体内外能够显著抑制U87细胞的增殖及侵袭。本研究可能为脑胶质瘤的联合治疗提供新的抗肿瘤策略。

关键词：胆碱激酶α(CHKA) 裸鼠 U87 sh-6 增殖侵袭

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CHKα通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤细胞增殖及侵袭的影响及机制研究

CHKα通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤细胞增殖及侵袭的影响及机制...

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作者：黄灵宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的胶质瘤是最常见、最致命的脑部肿瘤之一,因较高发病率、侵袭性、致死率、复发率被科学界广泛关注。因胶质瘤的增殖不受免疫系统的调控且呈现浸润性生长,这就使胶质的手术治疗难度高、易复发、存活率低,胶质瘤患者的平均生存期约为1... 详细信息

目的胶质瘤是最常见、最致命的脑部肿瘤之一,因较高发病率、侵袭性、致死率、复发率被科学界广泛关注。因胶质瘤的增殖不受免疫系统的调控且呈现浸润性生长,这就使胶质的手术治疗难度高、易复发、存活率低,胶质瘤患者的平均生存期约为14.5个月。这些因素使胶质瘤患者的预后极其不理想。近几十年以来,随着医疗技术的迅速的发展,胶质瘤的治疗方式并没有发生根本性的改变,其主要的治疗方式仍然是以手术后辅助放化疗为主。但显然这一治疗方式并不能从根本上解决胶质瘤的复发及发病的问题。以现有的理论体系认为,肿瘤的发生发展是因为癌基因的激活及与之相关的上下游信号通路的过度激活和代谢失控密切相关。与之相关信号通路的调控机制近年来成为该领域的研究热点,但目前具体的作用机制未明。因此更加全面彻底的探讨胶质瘤的发病分子机制及与上下游的相关过度激活的信号通路对胶质瘤的治疗及预后均有及极其重要的潜在价值。本研究立足于临床胶质瘤组织样本,使用GO富集分析及KEGG分析等相关的技术确定CHKα与PI3K/Akt信号通路在胶质中存在一定的相关性,但具体是什么相关性不清,今进一步证明二者是何种相关性及他们之间的相互作用关系。我们通过使用慢病毒感染胶质瘤细胞的方法敲低胶质瘤细胞中CHKα表达,在体内外探究在该条件下对PI3K/Akt信号通路的影响及二者之间可能的相互作用关系,研究胆碱激酶α在胶质瘤中的致病机制及相关的信号通路,为今后脑胶质瘤的临床治疗提供了必要的理论基础。方法1通过GO和KEGG技术检测并分析CHKα在胶质瘤组织中的基因的表达水平及可能的发挥作用途径。方法2使用免疫组化方法（IHC）检测CHKα及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白的表达并结合临床病例资料进行随访分析,判断CHKα的预后意义。方法3使用慢病毒感染U87、U251胶质瘤细胞系,构建稳定CHKα基因低表达及其对照细胞系,并运用Western-blot及RT-PCR检验慢病毒转染效率。方法4观察并分析CHKα在低表达的条件并联合使用PI3K/Akt信号通路抑制剂sh-6或（和）LY294006在胶质瘤细胞系U87、U251中CHKα与PI3K/Akt信号通路的相互作用;方法5运用Western-blot方法检测CHKα、AKT、P-AKT、PI3K、P-PI3K表达情况,应用PCR检测CHKα目的基因表达情况。通过Matrigel侵袭实验、流式细胞术、CCK-8实验、Transwell TM等实验检测胶质瘤细胞系U87、U251细胞的迁移、侵袭、增殖、凋亡周期变化。方法6使用CHKα低表达、对照组细胞及未感染慢病毒的U87和U251细胞构建裸鼠皮下成瘤动物模型。使用游标卡尺测量异体移植于裸鼠皮下的胶质瘤体积、各组裸鼠的平均体重。以胆碱激酶α的低表达并联合体内使用PI3K/Akt通路抑制剂sh-6或（和）LY294002探究对胶质瘤生长的影响。方法7运用Western-blot（免疫印迹）和免疫组织化学染色两种方法探究裸鼠皮下胶质瘤中CHKα与AKT、P-AKT、PI3K、P-PI3K表达量的变化情况并进行相关性分析。结果1利用GO富集分析和KEGG分析技术检测并分析后得知CHKα在胶质瘤组织中呈普遍高表达,其发挥作用的途径可能是PI3K/Akt信号通路。结果2运用Western-blot（免疫印迹）和免疫组织化学染色两种方法检测CHKα及PI3K/Akt相关蛋白后发现,CHKα与P-AKT、P-PI3K在高级别组织中呈现高表达且CHKα与PI3K/Akt通路中关键蛋白的表达呈同步升高且显著影响患者的预后。结果3在U87和U251细胞系在CHKα低表达联合使用PI3K/Akt信号通路抑制剂后,胶质瘤细胞的周期主要阻滞在G2/M期,增殖明显受抑制,凋亡率明显增加,迁徙能力显著弱于其他对照组。结果4 CHKα低表达后,通过Western-blot实验检测胶质瘤细胞中的CHKα与P-AKT、P-PI3K蛋白表达明显相关性,但PI3K、AKT蛋白的表达无明显改变。在体内外使用PI3K/Akt信号通路抑制剂sh-6或LY294002时,CHKα蛋白的表达并显著改变。结果5在裸鼠皮下荷载实验中CHKα低表达组肿瘤体积及生长速度明显低于其他几个对照组。结果6 Western-blot、免疫组织化学结果提示:CHKα与P-PI3K、P-AKT蛋白结果在体内外实验一致。均是CHKα在低表达的情况下,能够显著的抑制P-PI3K、P-AKT蛋白的表达;结论本研究首先从临床胶质瘤患者的病理组织及患者的生存情况分析入手,分析CHKα及PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达。发现胶质瘤组织中CHKα的表达量与PI3K/Akt通路中相关蛋白的显著增加并与患者的预后呈明显正相关。在使用变慢病毒干扰降低CHKα的表达,研究CHKα对胶质瘤细胞生物学的作用机制并进一步探讨与CHKα发挥作用的具体的信号通路及相互作用关系。研究结果显示:CHK

关键词：胆碱激酶α（CHKα,CHKA） PI3K/Akt通路胶质瘤增殖侵袭 sh-6

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sh-6联合LY294002对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制探究

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宁夏医学杂志 2022年第12期44卷 1057-1060页

作者：邹有瑞李嘉麟黄灵马悦马辉宁夏医科大学总医院神经外科宁夏银川750004 宁夏医科大学宁夏银川750004

目的探究磷脂酰肌醇磷酸类似物sh-6联合PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法使用sh-6及LY294002处理胶质瘤细胞,并设置分组,分为对照组、DMSO组、联合组,使用Western-Blot检测p-PI3K、PI3K、... 详细信息

目的探究磷脂酰肌醇磷酸类似物sh-6联合PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法使用sh-6及LY294002处理胶质瘤细胞,并设置分组,分为对照组、DMSO组、联合组,使用Western-Blot检测p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白的表达水平。分别运用流式细胞实验、CCK-8实验、划痕实验、Transwell等方法观察在不同实验条件下胶质瘤细胞周期、增殖、凋亡、侵袭及转移功能变化情况。结果 Western-Blot检测到联合组的胶质瘤细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白的表达量均降低(Psh-6联合LY294002能够调节PI3K/AKT信号通路中PI3K和AKT蛋白修饰的磷酸化,进而影响胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学功能。

关键词：胶质瘤 sh-6 LY294002 侵袭 PI3K AKT

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