检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库

特异性识别石斑鱼虹彩病毒sgiv感染的核酸适配体筛选与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

特异性识别石斑鱼虹彩病毒SGIV感染的核酸适配体筛选与应用

Integrated multi-omics analysis reveals liver metabolic reprogramming by fish iridovirus and antiviral function of alpha-linolenic acid

2016年中国水产学会学术年会

作者：李鹏飞周伶俐魏世娜秦启伟广西科学院广西近海海洋环境科学重点实验室中国科学院南海海洋研究所华南农业大学海洋学院

近年来爆发和流行的石斑鱼虹彩病毒（sgiv）严重制约着石斑鱼养殖业的可持续健康发展。指数富集的配基系统进化技术（SELEX）是一类新型的生物文库技术。由SELEX技术筛选得到的核酸适配体具有与单克隆抗体相当的高特异性和高亲和性,并... 详细信息

近年来爆发和流行的石斑鱼虹彩病毒（sgiv）严重制约着石斑鱼养殖业的可持续健康发展。指数富集的配基系统进化技术（SELEX）是一类新型的生物文库技术。由SELEX技术筛选得到的核酸适配体具有与单克隆抗体相当的高特异性和高亲和性,并且具有诸多优点,如没有免疫原性,温度变化引起的变性是可逆的,筛选时间短费用低,易于合成和后期修饰,目前已发展成为一种备受关注的新型检测和治疗工具。本研究以sgiv感染的细胞为筛选靶标,筛选获得的核酸适配体不但能够特异性识别sgiv感染,而且具有抑制病毒感染的能力;适配体还能够通过主动运输特异性地结合内吞进入病毒感染的细胞,因此可以将其作为药物运输载体,研发出低毒、高特异性的靶向治疗药物;基于筛选获得的适配体,首次研发出操作简便,可以快速准确检测sgiv感染的Apt-ELASA技术,为丰富和提高各领域的检测技术提供了新方法和新思路。

关键词：核酸适配体水产养殖 sgiv 抗病毒快速检测

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

Zoological Research 2024年第3期45卷 520-534页

作者： Lin Liu Ya Zhang Meng-Di Yuan Dong-Miao Xiao Wei-Hua Xu Qi Zheng Qi-Wei Qin You-Hua Huang Xiao-Hong Huang College of Marine Sciences South China Agricultural UniversityGuangdong Laboratory for Lingnan Modern AgricultureGuangzhouGuangdong 510642China Nansha-South China Agricultural University Fishery Research Institute GuangzhouGuangdong 511464China Southern Marine Science and Engineering Guangdong Laboratory ZhuhaiGuangdong 519082China

Iridovirus poses a substantial threat to global aquaculture due to its high mortality rate;however,the molecular mechanisms underpinning its pathogenesis are not well ***,a multi-omics approach was applied to groupers infected with Singapore grouper iridovirus(sgiv),focusing on the roles of key *** showed that sgiv induced obvious histopathological damage and changes in metabolic enzymes within the ***,sgiv significantly reduced the contents of lipid droplets,triglycerides,cholesterol,and *** analysis indicated that the altered metabolites were enriched in 19 pathways,with a notable down-regulation of lipid metabolites such as glycerophosphates and alpha-linolenic acid(ALA),consistent with disturbed lipid homeostasis in the *** of transcriptomic and metabolomic data revealed that the top enriched pathways were related to cell growth and death and nucleotide,carbohydrate,amino acid,and lipid metabolism,supporting the conclusion that sgiv infection induced liver metabolic *** integrative transcriptomic and proteomic analysis indicated that sgiv infection activated crucial molecular events in a phagosome-immune depression-metabolism dysregulation-necrosis signaling *** note,integrative multi-omics analysis demonstrated the consumption of ALA and linoleic acid(LA)metabolites,and the accumulation of L-glutamic acid(GA),accompanied by alterations in immune,inflammation,and cell death-related *** experimental data showed that ALA,but not GA,suppressed sgiv replication by activating antioxidant and anti-inflammatory responses in the ***,these findings provide a comprehensive resource for understanding host response dynamics during fish iridovirus infection and highlight the antiviral potential of ALA in the prevention and treatment of iridoviral diseases.

关键词： Iridovirus Liver damage Metabolic reprogramming sgiv Alpha-linolenic acid Antiinflammatory

维普期刊数据库

新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF086蛋白的原核表达、纯化及抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

上海海洋大学学报 2010年第1期19卷 1-6页

作者：夏立群张红莲梁海鹰刘森林广东海洋大学水产学院广东湛江524025 中山大学生命科学学院广东广州510275 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,sgiv)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,sgiv)ORF086基因的重组表达质粒载体pET32a-ORF086,将其转... 详细信息

新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,sgiv)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,sgiv)ORF086基因的重组表达质粒载体pET32a-ORF086,将其转化到大肠杆菌中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,证实重组大肠杆菌融合表达了sgiv ORF086蛋白。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isoprophl-thio-β-D-galactopyranoside,IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件的优化,确定在0.7 mmol/L IPTG、16℃诱导14 h时可溶性sgiv ORF086重组蛋白占重组蛋白的60%。经镍琼脂糖凝胶柱纯化重组蛋白,纯化度达95%以上。用纯化的sgiv ORF086蛋白免疫小鼠,获得了高效特异的sgiv ORF086抗血清。

关键词：新加坡石斑鱼虹彩病毒原核表达多克隆抗体 sgiv ORF086重组蛋白

维普期刊数据库

Functional genomic studies on an immune-and antiviral-related gene of MyD88 in orange-spotted grouper,Epinephelus coioides

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Science Bulletin 2012年第25期 3278-3288页

作者： YAN Yang 1,CUI HuaChun 2,WEI JingGuang 1,HUANG YouHua 1,HUANG XiaoHong 1 & QIN QiWei 1* 1 Key Laboratory of Marine Bio-resources Sustainable Utilization,South China Sea Institute of Oceanology,Chinese Academy of Sciences,Guangzhou 510301,China 2 State Key Laboratory of Biocontrol,School of Life Sciences,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510275,China

Myeloid differentiation factor 88(MyD88) is a universal adaptor protein involved in Toll-like receptors and in interleukin-1 receptor-induced nuclear factor-kappaB(NF-κB) *** this study,a new MyD88 gene(designated as Og-MyD88) was cloned from orange-spotted grouper,Epinephelus coioides,based on the expressed sequence tag(EST) obtained following Roche 454 GS-FLX *** full-length Og-MyD88 cDNA is composed of 1682 bp and encodes a deduced polypeptide of 289 amino acids with 86% homology to MyD88 of Siniperca *** deduced amino acid sequence of Og-MyD88 contains a typical death domain at the amino terminus and a conserved Toll/IL-1R(TIR) domain at the carboxyl terminus,as well as three highly conserved motifs(Box1,Box2 and Box3) within the C-terminal TIR *** healthy fish,Og-MyD88 was found to be strongly expressed in immune-related tissues,including the spleen,head kidney,kidney,liver,skin and intestine,with lower expression in heart,stomach,brain and *** of Og-MyD88 were found to be markedly up-regulated in fish spleen after challenge with Singapore grouper iridovirus(sgiv),a highly lethal viral pathogen to grouper ***,the full length Og-MyD88 and its N-terminal death domain were capable of inducing NF-κB activity in HEK-293 *** Og-MyD88 showed the ability to inhibit replication of sgiv in grouper spleen(GS) *** results suggest that Og-MyD88 is involved in the grouper immune response to invasion of viral pathogens and may share similar functions to those observed in higher vertebrates.

关键词： myeloid differentiation factor 88(MyD88) Epinephelus coioides expression analysis NF-B activation immune response sgiv

Ubiquitin-proteasome system is required for efficient replication of Singapore grouper iridovirus

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

Ubiquitin-proteasome system is required for efficient replic...

斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）NF-κB信号通路相关基因的分子克隆及其功能初步研究

中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会

作者： Youhua Huang Xiaohong Huang Zhengliang OuYang Jia Cai Shina Wei Ren Gao Qiwei Qin Key Laboratory of Marine Bio-resources Sustainable Utilization South China Sea Institute of OceanologyChinese Academy of Sciences State Key Laboratory Breeding Base for Sustainable Exploitation of Tropical Biotic Resources College of Marine ScienceHainan University

Ubiquitin-proteasome system not only played crucial roles in a variety of fundamentalcellular processes,but also was potentially involved in virus replication at different stage of viruslife ***,little information was disclosed on the underlying mechanism by which theubiquitin-proteasome system regulated fish virus *** grouper iridoviurs(sgiv),a large DNA virus which belonged to genus Ranvirus,family Iridovirade,always caused greateconomic losses in grouper *** this study,the roles of ubiquitin-proteasome system insgiv replication were *** demonstrated that different proteasome inhibitors,including MG132,lactacystin,and bortezomib,significantly reduced virus production,anddelayed sgiv induced cytopathic effect(CPE)progress and cell *** inhibition effect ofMG132 on sgiv replication mainly occurred at the early stage without affecting *** microscopy and electron microscopic observations showed thatMG132 strongly inhibited the formation of virus assembly sites,accompanied by the reduction ofviral gene transcription,protein synthesis and the transportation of viral structural ***,MG132 treatment altered the cell cycle induced by sgiv infection,and significantlysuppressed two transcription factors NF-κB and p53 activity evoked by *** addition,theaddition of an ubiquitin-activating enzyme(E1)inhibitor also showed a significant inhibition onvirus production,and the overexpression of grouper ubiquitin could partially counter theinhibitory effects of *** together,our results presented new insight into the roles ofubiquitin-proteasome system in fish virus infection wherein it was required for sgiv replicationthrough regulating the cell cycle induced by sgiv.

关键词： Iridovirus sgiv Viral replication Virus assembly Ubiquitin-proteasome system,cell cycle

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）NF-κB信号通路相关基因的分...

作者：高任海南大学

学位级别：硕士

石斑鱼是我国以及东南亚各国重要的海水养殖鱼类,经济价值极高。随着石斑鱼养殖密度的增加以及海水养殖环境的不断恶化,各种疾病的爆发对石斑鱼养殖业造成了巨大的经济损失。新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus, sgiv)... 详细信息

石斑鱼是我国以及东南亚各国重要的海水养殖鱼类,经济价值极高。随着石斑鱼养殖密度的增加以及海水养殖环境的不断恶化,各种疾病的爆发对石斑鱼养殖业造成了巨大的经济损失。新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus, sgiv)是从养殖患病石斑鱼中分离到的一种高致病性病毒病原,可导致石斑鱼死亡率达90%以上。 NF-κB信号转导通路参与调节机体免疫和发育的多种生理活动,是联系机体天然免疫系统和特异性免疫系统的纽带。本研究以斜带石斑鱼为对象,成功克隆鉴定了三个与NF-κB信号转导相关的基因,分别编码石斑鱼NF-κB因子抑制蛋白IκBα两种亚型(命名为EcIκBαA和EcIκBαB)和抑制蛋白1κB激酶IKKα(命名为EcIKKα)。在此基础上,本文进一步分析了IκBα的两种亚型在sgiv感染中的功能,为探索鱼NF-κB信号通路的免疫调节功能奠定了理论基础。 EcIκBαA和EcIκBαB分别编码308和318个氨基酸,其中EcIκBαA和EcIκBαB与斑马鱼的IκBαA和IκBαB分别有59%和53%的同源性。氨基酸序列比对分析结果表明,EcIκBαA和EcIκBαB在N端都含有一个保守的降解序列DSGLDS,在C端都含有一个PEST序列。不同的是,EcIκBαA含有5个ANK重复序列,而EcIκBαB含有6个ANK重复序列。对EcIκBαA和EcIκBαB的基因组序列分析显示,两者都含有6个外显子和5个内含子。基因表达分布显示：EcIκBαA和EcIκBαB在组织中分布广泛,且在免疫相关组织中分布较多。LPS、sgiv和溶藻弧菌刺激鱼体均能诱导EcIκBαA和EcIκBαB基因的表达,表达水平在12小时内达到峰值。亚细胞定位结果显示：EcIκBαA呈全细胞分布,而EcIκBαB主要分布在细胞质中,推测两者的功能存在一定的差异。双荧光素酶报告基因实验结果表明：过表达EcIκBαA和EcIκBαB均能抑制石斑鱼NF-κB因子p65和c-Rel的活性,EcIκBαA的抑制作用强于EcIκBαB,且两者抑制效果具有质粒转染剂量的依赖性,说明EcIκBαA和EcIκBαB可能是石斑鱼NF-κB信号通路的天然抑制剂。此外,过表达EcIκBαA能抑制sgiv ORF019, ORF162和ORF072(MCP)基因的表达,推测EcIκBα可能在宿主抗病免疫反应中起重要作用。石斑鱼11(B激酶基因EcIκBα编码735个氨基酸,蛋白分子量大小为80.85kDa, PI为6.74。氨基酸序列分析发现EcIKKα含有一个激酶结构域(SKc)和一个IKKβ NEMO结合域。该基因和其他已知物种的IKKα基因序列高度同源,与罗非鱼的相似性高达90%,与氏朴丽鱼的相似性高达89%。EcIKKα在组织中分布广泛,且在免疫相关组织中的分布较多。polI:C刺激后不能诱导EcIKKα表达量上调,推测EcIKKα在机体内是一种组成型基因,也暗示EcIKKα发挥功能并不是依靠提高其在机体的表达量实现。本文研究结果表明,石斑鱼的NF-κB存在多种调控因子,其重要的调控因子IκBα存在不同的类型,它们在抵御病毒感染中可能发挥着不同的功能,而NF-κB抑制蛋白激酶IKKα也可能参与宿主NF-κB信号通路对病原微生物的免疫调控作用,这不仅在一定程度上丰富了鱼类免疫学,也为制定鱼类病毒病防控策略提供了一定的理论依据。

关键词：斜带石斑鱼 EcIκBαA和EcIκBαB EcIKKα NF-κB信号通路 sgiv

石斑鱼PPARs基因克隆、分子特征分析及抗病毒相关SNP位点筛选

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

石斑鱼PPARs基因克隆、分子特征分析及抗病毒相关SNP位点筛选

作者：王雨欣华南农业大学

学位级别：硕士

石斑鱼（Epinephelus spp.）是亚洲许多国家最重要的经济水产养殖品种之一。近年来,随着集约化、规模化养殖的快速发展,细菌性和病毒性传染病暴发的频率急剧增加,对石斑鱼养殖业造成了严重的危害。目前已报道的感染石斑鱼的致病性病毒... 详细信息

石斑鱼（Epinephelus spp.）是亚洲许多国家最重要的经济水产养殖品种之一。近年来,随着集约化、规模化养殖的快速发展,细菌性和病毒性传染病暴发的频率急剧增加,对石斑鱼养殖业造成了严重的危害。目前已报道的感染石斑鱼的致病性病毒主要是虹彩病毒和神经坏死病毒。新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus,sgiv）和赤点石斑鱼神经坏死病毒（red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV）,对石斑鱼的成鱼以及幼鱼危害很大,严重时死亡率可达100%,对石斑鱼养殖造成巨大的经济损失,严重威胁到石斑鱼养殖产业的健康发展。然而到目前为止,sgiv的发病机制和病毒—宿主相互作用的分子机制仍未得到完整解析,开展石斑鱼免疫相关基因的研究将有助于进一步明确上述机制,为抗病毒防控策略的科学制定提供理论依据。此外,开展石斑鱼抗病品系的选育研究是也是解决石斑鱼病毒病害的重要途径之一,开发抗病相关分子标记,利用分子标记定向选育石斑鱼抗病品系,可以有效避免选育的盲目性,从而加快选育进程。其中,单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism,SNP）被认为是一种极具应用前景的分子标记技术。本实验室前期构建了石斑鱼对sgiv的抗感组和易感组群体的转录组数据库,KEGG分析结果表明,抗感组和易感组中的差异表达基因在PPAR信号通路中显著富集,而在该信号通路中,PPAR-α和PPAR-δ是关键的差异表达基因。因此我们猜测PPAR-α和PPAR-δ可能与石斑鱼虹彩病毒免疫反应相关联。本研究拟在上述研究的基础上,以病毒免疫反应中发挥重要作用的PPARs基因作为研究对象,进行基因克隆、分子特征分析和抗病相关SNP标记筛选。首先分析PPARs基因结构,探讨其在虹彩病毒免疫过程中发挥的作用;同时构建石斑鱼对神经坏死病毒的抗感和易感群体,基于上述群体挖掘PPARs的SNP位点,进行SNPs与神经坏死病毒抗性的关联分析。该研究有助于进一步阐明石斑鱼抗病毒免疫机制,同时为石斑鱼抗病品种的选育提供技术支持和理论依据,具体研究结果如下:1.石斑鱼PPAR-α基因的克隆及分子特征分析根据转录组数据设计特异性引物,扩增得到石斑鱼PPAR-α基因（Ec PPAR-α）的ORF全长,为1410 bp,编码469个氨基酸。氨基酸序列结构预测结果显示Ec PPAR-α含有一个DBD和一个LBD结构。序列同源性比对分析结果显示Ec PPAR-α与真鲷（Pagrus major）有97.7%的同源性。系统进化树结果表明鱼类PPAR-α基因聚集在一个主要分支,其中与Ec PPAR-α进化关系最密切相关的是白梭吻鲈（Sander lucioperca）和黄金鲈（Perca flavescens）。Ec PPAR-α组织表达谱分析结果表明Ec PPAR-α在所有检测的组织中均有分布且差异性表达,其中在肝、脑、脾中的表达量较高。亚细胞定位结果显示Ec PPAR-α在GS细胞中呈全细胞分布。过表达Ec PPAR-α通过下调干扰素和炎症反应促进sgiv复制。2.石斑鱼PPAR-δ基因的克隆及分子特征分析根据转录组数据设计特异性引物,扩增得到石斑鱼PPAR-δ基因（Ec PPAR-δ）的ORF全长,为1545 bp,编码514个氨基酸。氨基酸序列结构预测显示Ec PPAR-δ含有一个DBD和一个LBD结构。序列同源性比对分析结果显示Ec PPAR-δ与高体鰤（Seriola dumerili）有95.3%的同源性。系统进化树结果表明鱼类PPAR-δ基因聚集在一个主要分支,鸟类和哺乳动物PPAR-δ基因在另一个主要分支聚集,而非洲爪蟾（Xenopus laevi）PPAR-δ基因单独在一个分支,其中与Ec PPAR-δ进化关系最密切的是贝氏隆头鱼（Labrus bergylta）和大黄鱼（Larimichthys crocea）。Ec PPAR-δ在所有检测的组织均有分布且差异性表达,其中在肝脏中的表达量最高。Ec PPAR-δ编码一种位于细胞质和细胞核的蛋白质,其表达受sgiv感染诱导。过表达Ec PPAR-δ通过刺激宿主干扰素免疫应答体制显著抑制sgiv复制,RNAi的结果与之相反。此外,Ec PPAR-δ在GS细胞中发挥抗炎作用,这可能与其维持细胞稳态相关。3.石斑鱼PPAR-δ基因SNP位点的筛查及其与RGNNV抗性的关联分析利用直接测序法在石斑鱼PPAR-δ基因组序列中共筛查到8个SNP位点,其中SNP1位于外显子区域,其余SNPs均分布在内含子区。通过Sna Pshot分型法对SNPs进行基因分型并进行SNPs与RGNNV抗性的关联分析发现位点SNP5（g.2510C＞T）与石斑鱼RG

关键词：石斑鱼 PPAR基因 sgiv RGNNV 病毒复制 SNP

石斑鱼TRIM44L和TRIM21调控抗病毒免疫的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

石斑鱼TRIM44L和TRIM21调控抗病毒免疫的机制研究

作者：郑家颖华南农业大学

学位级别：硕士

石斑鱼(Epinephelus spp.)是我国重要的经济海水鱼类,目前在集约化大规模养殖的同时也遭遇到严重的病害威胁。其中,新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,sgiv)和赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous nec... 详细信息

石斑鱼(Epinephelus spp.)是我国重要的经济海水鱼类,目前在集约化大规模养殖的同时也遭遇到严重的病害威胁。其中,新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,sgiv)和赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)是两种重要的石斑鱼病害病毒性病原,近年来在石斑鱼养殖过程中频繁暴发,造成重大经济损失。然而,到目前为止,石斑鱼应对病毒侵染的防御分子机制研究尚不够深入。TRIM(Tripartite motif)蛋白是一类E3泛素连接酶,在信号转导、细胞周期调控、细胞凋亡方面有重要作用;同时,还参与蛋白质加工及运输、蛋白酶体介导的蛋白质降解以及机体对病毒的应答等重要的生命过程。为更好揭示石斑鱼免疫相关基因在病毒感染复制中的免疫调节作用,本论文开展了石斑鱼TRIM44L和TRIM21调控抗病毒免疫的机制研究;并针对赤点石斑鱼神经坏死病毒RGNNV,开展了生物载体口服疫苗的研究,取得以下创新研究结果。1.石斑鱼Ec TRIM44L在RGNNV病毒感染复制中的免疫调节作用机制。根据石斑鱼脾脏转录组EST序列信息,我们克隆了斜带石斑鱼TRIM44L基因(Ec TRIM44L)。序列分析表明,Ec TRIM44L编码一个393个氨基酸构成的多肽,与大黄鱼(Larimichthys crocea)和斑马鱼(Danio rerio)的序列同源性分别为81.44%和51.02%。Ec TRIM44L包含两个保守的结构域,分别是B-Box结构域和coiled-coil结构域。荧光定量PCR分析表明,RGNNV感染石斑鱼脾脏细胞(grouper spleen,GS)后,Ec TRIM44L的表达量显著上调,提示Ec TRIM44L参与了RGNNV感染。进一步研究表明,Ec TRIM44L体外过表达能明显增强RGNNV引起的细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE),并显著上调RGNNV外壳蛋白(coat protein,CP)和依赖RNA的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,Rd Rp)的表达量。同时,Ec TRIM44L过表达显著降低干扰素(IFN)信号关键分子和促炎性细胞因子的表达水平。此外,过表达Ec TRIM44L负调控黑色素瘤分化相关蛋白5(Melanoma differentiation associated gene5,MDA5)和线粒体抗病毒信号蛋白(Mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)诱导的干扰素刺激反应原件(interferon stimulation response element,ISRE)启动子活性。综上,研究结果首次揭示了Ec TRIM44L可通过负调控MDA5和MAVS诱导的干扰素免疫反应促进RGNNV感染与复制。2.石斑鱼Ec TRIM21在sgiv和RGNNV病毒感染中的调节作用机制。我们克隆了斜带石斑鱼TRIM21(Ec TRIM21)基因。序列分析表明,Ec TRIM21编码一个由557个氨基酸组成的多肽,与斑马鱼(Danio rerio)和人(Homo sapiens)同源性分别为38.92%和31.13%,且包含RING、B-Box、PRY和SPRY结构域。亚细胞定位分析表明,Ec TRIM21呈现胞质分布。荧光定量PCR分析表明,sgiv、RGNNV感染GS细胞后,Ec TRIM21的表达量均显著上调。体外过表达研究表明,Ec TRIM21可显著抑制sgiv和RGNNV病毒基因的转录,同时干扰Ec TRIM21的表达则显著促进sgiv和RGNNV病毒基因的转录。与此同时,过表达的Ec TRIM21显著促进干扰素信号相关分子和促炎性细胞因子的表达水平。综上,研究结果表明Ec TRIM21可通过正向调控干扰素和炎症反应抑制sgiv和RGNNV的感染与复制,从而发挥抗病毒效应。3.预防RGNNV的生物载体口服疫苗的制备和保护效果评价。通过病毒感染实验发现,RGNNV对东星斑(Plectropomus leopardus)半数致死剂量为8.5×10TCID50/0.05 m L。应用柔性Linker连接RGNNV的CP基因和石斑鱼防御素蛋白(defensin protein,DP)基因,并构建重组质粒p ET28a-CP-DP。在大肠杆菌中应用IPTG诱导表达后,将CP和DP基因共同表达在大肠杆菌中,收集细菌并作为食物投喂卤虫(Brine shrimp)。待卤虫体内富集一定量的融合蛋白后,作为开口饵料用于投喂东星斑幼鱼。结果表明,东星斑通过卤虫作为载体口服免疫CP-DP融合蛋白后,鱼

关键词：石斑鱼 RGNNV sgiv EcTRIM44L EcTRIM21 口服疫苗

石斑鱼MKK4/6和miR-122在细胞凋亡中的功能研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

石斑鱼MKK4/6和miR-122在细胞凋亡中的功能研究

作者：苏钰玲华南农业大学

学位级别：硕士

石斑鱼已成为中国南方沿海和东南亚地区的重要经济海水鱼类。新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus,sgiv）和溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）是海水鱼高致病的病原,可引起石斑鱼大量死亡。本文以石斑鱼为研究对象,分... 详细信息

石斑鱼已成为中国南方沿海和东南亚地区的重要经济海水鱼类。新加坡石斑鱼虹彩病毒（Singapore grouper iridovirus,sgiv）和溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）是海水鱼高致病的病原,可引起石斑鱼大量死亡。本文以石斑鱼为研究对象,分析石斑鱼MKK4/6基因和miR-122在sgiv/***刺激后表达特征,对AP-1/NF-κB激活情况,探讨其对病毒诱导的细胞凋亡的影响,结果如下:1.从斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）中克隆Ec MKK4基因和Ec MKK6基因,即Ec MKK4-1、Ec MKK4-2、Ec MKK4-3和Ec MKK6。保守结构域预测,发现Ec MKK4均含S＿TKc结构域和两个ATP结合基序;Ec MKK6含有S＿TKc结构域、酪氨酸激酶结构域和DVD结构域。同源性比较和进化树分析表明,Ec MKK4均与大黄鱼（Larimichthys crocea）相似度高,分别达到97.15%、98.12%和97.53%;Ec MKK6与尖吻鲈（Laters calcarifer）的相似性最高,达到98%。*** MKK4/6在石斑鱼的11个组织中均有分布,Ec MKK4在肠道组织中的表达水平较高,Ec MKK6在头肾的表达水平较高。sgiv和溶藻弧菌感染石斑鱼后,Ec MKK4和Ec MKK6呈现差异表达。通过双荧光素酶报告基因结果显示,Ec MKK4/6显著抑制AP-1活性。最后通过流式细胞仪检测到Ec MKK4/6抑制sgiv感染诱导的细胞凋亡,以上结果表明,Ec MKK4/6参与了石斑鱼抗病毒/细菌刺激反应。3.石斑鱼miR-122与哺乳动物和其他鱼类的miR-122相似度极高。sgiv感染可诱导石斑鱼细胞miR-122持续表达。miR-122通过抑制AP-1和NF-κB转录因子的活性和促凋亡因子的表达,进一步抑制caspase-3活性和sgiv诱导的细胞凋亡;此外miR-122促进病毒在细胞中的复制与增殖,表现为miR-122增强了sgiv诱导的CPE进程,增加病毒基因的转录表达水平,上调MCP蛋白表达水平和增强子代病毒产生。综上所述:本文克隆得到石斑鱼Ec MKK4和Ec MKK6,且在物种间的进化是高度保守的;sgiv和溶藻弧菌刺激后,Ec MKK4/6呈现差异表达;并抑制sgiv诱导的细胞凋亡,推测Ec MKK4/6参与石斑鱼的先天免疫应答。sgiv感染过程中miR-122通过下调免疫信号和炎症因子表达,调节诱导的细胞凋亡,从而促进病毒复制。

关键词： MKK4 MKK6 miR-122 sgiv 细胞凋亡