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超声内镜联合智能分光比色内镜系统检查及septin9 DNA甲基化检测在低位直肠肿瘤诊断中的应用价值

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中国社区医师 2023年第21期39卷 90-92页

作者：程进伟罗程余志金惠州市中心人民医院消化内镜科广东惠州516001

目的:研究超声内镜(EUS)联合智能分光比色内镜系统(FICE)检查及septin9 DNA甲基化检测在低位直肠肿瘤诊断中的应用价值。方法:选取2020年5月—2021年3月惠州市中心人民医院收治的疑似低位直肠肿瘤患者50例作为研究组,选取同期50例健康... 详细信息

目的:研究超声内镜(EUS)联合智能分光比色内镜系统(FICE)检查及septin9 DNA甲基化检测在低位直肠肿瘤诊断中的应用价值。方法:选取2020年5月—2021年3月惠州市中心人民医院收治的疑似低位直肠肿瘤患者50例作为研究组,选取同期50例健康体检者作为对照组。研究组进行EUS、FICE检查,两组均行septin9 DNA甲基化检测,比较两组septin9阳性率,以手术病理诊断结果为“金标准”,分析EUS、FICE诊断结果、诊断效能。结果:研究组septin9阳性率高于对照组,差异有统计学意义(Pseptin9 DNA甲基化检测、EUS联合FICE检测,差异有统计学意义(Pseptin9 DNA甲基化检测能较为准确地诊断低位直肠肿瘤,联合诊断时需要综合多项诊断情况,对患者病灶进行准确判断。

关键词：超声内镜智能电子分光比色内镜系统 septin9 低位直肠肿瘤

普鲁卡因抑制人结肠癌细胞增殖与DNA甲基化

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安徽医科大学学报 2020年第11期55卷 1695-1700页

作者：朱波解爽张思莹陈渊胡漫辉温聪娜刘伟华问明张涛刘经纬李日恒河北大学附属医院胃肠外科保定071000

目的分析普鲁卡因(PCA)对septin9甲基化状态和表达水平的影响,探讨PCA抑制结肠癌DLD-1、HCT116细胞增殖的分子机制。方法不同浓度PCA对结肠癌细胞处理不同时间,MTS法检测细胞增殖活性;流式细胞术、Transwell实验检测PCA对细胞周期、凋... 详细信息

目的分析普鲁卡因(PCA)对septin9甲基化状态和表达水平的影响,探讨PCA抑制结肠癌DLD-1、HCT116细胞增殖的分子机制。方法不同浓度PCA对结肠癌细胞处理不同时间,MTS法检测细胞增殖活性;流式细胞术、Transwell实验检测PCA对细胞周期、凋亡和迁移能力的影响;BGS法、qRT-PCR检测PCA作用前后septin9甲基化状态和表达水平。结果PCA对结肠癌细胞增殖抑制呈浓度和时间依赖效应(Pseptin9甲基化程度下降,septin9 mRNA表达量上升,差异均有统计学意义(Pseptin9甲基化,抑制结肠癌细胞的增殖、迁移。

关键词：结肠癌普鲁卡因 septin9 DNA甲基化

结直肠癌中CIMP和MSI相关性分析及其临床病理学意义

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结直肠癌中CIMP和MSI相关性分析及其临床病理学意义

作者：李敏郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的随着发病率和死亡率的增加,癌症已成为中国的主要公共卫生问题之一,其中结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是最常见的消化道肿瘤之一,由于其早期临床特征的隐匿性导致大多数CRC被发现时已处于疾病的中晚期,患者预后一般较差,因... 详细信息

背景与目的随着发病率和死亡率的增加,癌症已成为中国的主要公共卫生问题之一,其中结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是最常见的消化道肿瘤之一,由于其早期临床特征的隐匿性导致大多数CRC被发现时已处于疾病的中晚期,患者预后一般较差,因此,寻找有效、便捷的生物标记物对CRC进行筛查和预后判断是现在临床上亟待解决的一个问题。目前,对于CRC分子病理机制的研究主要集中在以下三方面:染色体不稳定(chromosomal instability,CIN)、CpG 岛甲基化表型(CpG island methylator phenotype,CIMP)以及微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)。其中MSI是指错配修复基因在CRC发生过程中发生突变,导致MMR功能缺陷,诱导细胞凋亡障碍最终形成肿瘤的过程。CIMP主要指DNA异常甲基化引起原癌基因异常激活及抑癌基因失活等改变,与肿瘤和某些遗传病的发生关系密切。为了探究上述途径在CRC进展过程中发挥的作用,本研究选择在CRC中发生CpG岛高甲基化改变的抑癌基因SEPT9、SFRP1的蛋白产物septin9、SFRP1。以及MSI过程中出现基因启动子甲基化沉默的MMR的蛋白产物MLH1和MSH2。本课题通过检测MMR蛋白、septin9及SFRP1蛋白在正常结肠上皮、腺瘤性息肉及CRC组织中的表达情况,分析上述蛋白在CRC发生、发展及预后中的价值。同时提高临床服务的有效性,尤其是对于农村或经济条件欠发达地区的人群,降低CRC的死亡率及家庭、社会的负担。材料与方法本研究为回顾性研究,选取郑州大学第二附属医院病理科2012年7月至2016年7月期间留存的138例CRC、48例高级别腺瘤和31例低级别腺瘤病理标本,以腺瘤或癌细胞旁的正常肠黏膜上皮作为内对照。采取免疫组织化学法检测细胞中septin9、SFRP1、MLH1和MSH2蛋白的表达情况,同时对入组患者进行随访,采用SPSS25.0软件进行统计学分析。结果1.甲基化标志物在CRC、腺瘤性息肉中的表达情况:①septin9蛋白在CRC组织中阴性表达率为64.49%(89/138);在高级别腺瘤组中阴性表达率为56.25%(27/48);在低级别腺瘤组中阴性表达率为38.71%(12/31)。②SFRP1蛋白在CRC组织中阴性表达率为58.68%(81/138);在高级别腺瘤组中阴性表达率为58.33%(28/48);在低级别腺瘤组中阴性表达率为35.48%(11/31)。2.甲基化标志物与CRC临床病理特征的关系:septin9蛋白阴性表达的患者更多见于高龄、肿瘤直径≥5cm、肿瘤分化较差的患者;SFRP1蛋白阴性表达的患者更多见于高龄、肿瘤直径≥5cm、肿瘤分化较差以及Duke分期较高的患者。***蛋白在CRC、腺瘤性息肉中的表达情况:①MLH1蛋白在CRC组中表达缺失率13.77%(19/138);在高级别腺瘤组中表达缺失率10.42%(5/48);在低级别腺瘤组中表达缺失率6.45%(2/31)。②MSH2蛋白在CRC组中表达缺失率5.80%(8/138);在高级别腺瘤组中表达缺失率4.17%(2/48);在低级别腺瘤组中表达缺失率6.45%(2/31)。***表达状态与CRC临床病理特征的关系:MLH1蛋白表达缺失的患者更多见于肿瘤位于近端结肠以及粘液腺癌的患者,而MSH2蛋白表达缺失的患者更多见于右半结肠癌的患者。***9、SFRP1、MLH1和MSH2蛋白表达情况与CRC患者预后的关系甲基化标志物septin9和SFRP1蛋白阴性表达者生存率明显低于阳性表达者,MMR蛋白表达缺失患者生存率与阳性表达者无明显差异。***9、SFRP1、MLH1和MSH2双阴性表达情况与CRC患者预后的关系septin9/SFRP1双阴性表达者生存率明显低于阳性表达者,septin9/MLH1、septin9/MSH2、SFRP1/MLH1、SFRP1/MSH2 及 MLH1/MSH2 双阴性表达者生存率与阳性表达者均无明显差异。结论1.在结直肠息肉发展至CRC过程中,septin9和SFRP1蛋白可以作为预测腺瘤癌变的早期指标,且与CRC生存率呈正相关。2.在CRC中MLH1及MSH2蛋白表达缺失对患者预后无明显影响。

关键词：结直肠癌 septin9 SFRP1 MLH1 MSH2

盐酸普鲁卡因抑制人结肠癌细胞增殖与DNA甲基化的机制研究

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盐酸普鲁卡因抑制人结肠癌细胞增殖与DNA甲基化的机制研究

作者：朱波河北大学

学位级别：硕士

目的:DNA甲基化是表观遗传学分子机制之一,在结直肠癌的发生、发展过程中起着重要的作用。肿瘤抑制基因启动子区域CpG岛高甲基化导致其转录沉默目前被认为是肿瘤发生的一个共同特征,由于DNA甲基化与经典遗传学改变不同,具有可逆性的特点... 详细信息

目的:DNA甲基化是表观遗传学分子机制之一,在结直肠癌的发生、发展过程中起着重要的作用。肿瘤抑制基因启动子区域CpG岛高甲基化导致其转录沉默目前被认为是肿瘤发生的一个共同特征,由于DNA甲基化与经典遗传学改变不同,具有可逆性的特点,因此可以通过应用DNA甲基转移酶抑制剂逆转DNA甲基化的过程,使沉默的肿瘤抑制基因重新被激活,从而发挥抑制肿瘤生长的作用,这对于肿瘤的治疗来说是十分有意义的。地西他滨在几种核苷类抑制剂中具有最强去甲基化作用,并被用于初治及难治复发性骨髓增生异常综合征等恶性血液病患者的治疗,但由于常导致患者出现严重胃肠道反应和表现出骨髓毒性而限制了其广泛的临床应用。盐酸普鲁卡因(procaine hydrochloride,PCA)作为临床常用的局部麻醉药物,近年来也被发现是一种DNA去甲基化剂,在人乳腺癌MCF-7细胞、胃癌SGC-7901细胞中具有生长抑制作用。然而,盐酸普鲁卡因对结肠癌细胞DNA甲基化的调节以及生物学功能的影响鲜见报道。本课题组以人结肠癌DLD-1、HCT116细胞为模型,分析盐酸普鲁卡因处理对肿瘤抑制基因septin9甲基化状态和表达水平的影响,探讨盐酸普鲁卡因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制,为盐酸普鲁卡因应用于结直肠癌的临床治疗提供理论基础及实验依据。方法:(1)不同浓度(1.0、1.5、2.0和2.5mmol/L)的盐酸普鲁卡因作用于结肠癌DLD-1、HCT116细胞24、48和72小时,MTS检测盐酸普鲁卡因对结肠癌DLD-1、HCT116细胞的增殖抑制作用。(2)通过倒置显微镜观察盐酸普鲁卡因处理前后结肠癌DLD-1、HCT116细胞形态学改变。(3)通过流式细胞术检测盐酸普鲁卡因对结肠癌DLD-1、HCT116细胞凋亡和细胞周期的影响。(4)通过Transwell实验检测盐酸普鲁卡因对结肠癌DLD-1、HCT116细胞迁移能力的影响。(5)通过亚硫酸氢钠测序法(bisulfite genomic sequencing,BGS),在盐酸普鲁卡因作用于结肠癌DLD-1、HCT116细胞前后,检测septin9基因的甲基化状态。(6)通过实时荧光定量聚合酶链式反应(realtime PCR,RT-PCR)检测盐酸普鲁卡因处理结肠癌DLD-1、HCT116细胞前后,septin9基因mRNA的表达水平。结果:(1)盐酸普鲁卡因能够抑制结肠癌DLD-1、HCT116细胞的增殖,并且对其生长抑制具有浓度依赖效应和时间依赖效应。(2)盐酸普鲁卡因处理后,DLD-1细胞体积缩小,生长密度降低;HCT116细胞皱缩成团,出现空泡现象并从它们生长的表面回缩。(3)与空白对照组相比,盐酸普鲁卡因处理后可以显著诱导DLD-1、HCT116细胞的凋亡,并且将DLD-1、HCT116细胞的生长阻滞于G/M期,比较差异均有统计学意义(Pseptin9基因启动子区域CpG岛甲基化程度下降,而septin9基因mRNA表达水平明显上升,处理前后比较差异均有统计学意义(Pseptin9基因去甲基化,上调septin9 mRNA的表达水平,从而抑制结肠癌DLD-1、HCT116细胞的增殖。这提示盐酸普鲁卡因有望成为基于表观遗传学的结直肠癌治疗的安全候选药物。

关键词：结直肠癌盐酸普鲁卡因 DNA甲基化 septin9 细胞增殖

包头地区结直肠癌患者血浆mSEPT9检测分析

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包头医学院学报 2022年第3期38卷 1-4页

作者：虞飞白雪峰李姝岳林冯立文武小燕张学明包头市肿瘤医院内蒙古包头014010 包头医学院

目的:探讨血浆septin9基因甲基化检测在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)患者中的意义及临床价值。方法:选取2018年1月至2020年12月在包头市肿瘤医院接受检查的人员为研究对象,共90例;其中经肠镜检查为正常者(无息肉和肿瘤)20例,经肠镜... 详细信息

目的:探讨血浆septin9基因甲基化检测在结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)患者中的意义及临床价值。方法:选取2018年1月至2020年12月在包头市肿瘤医院接受检查的人员为研究对象,共90例;其中经肠镜检查为正常者(无息肉和肿瘤)20例,经肠镜及病理检查结果为息肉者20例,结直肠癌患者50例;分别采静脉血进行mSEPT9检测和septin9 mRNA表达分析,取粪便进行FOBT试验。结果:CRC患者的septin9基因甲基化与年龄、性别、民族及癌症的分期均无相关性(P>0.05),与肿瘤的部位和分化程度有关(P9方法比FOBT检出率高(P0.05);RT-qPCR检测各组全血标本中septin 9表达,正常组高于CRC组(4.28±0.036 vs 3.25±0.062 vs 1.01±0.075)(Pseptin9 mRNA表达与mSEPT9呈负相关。结论:mSEPT9检测能提高包头地区CRC早期诊断的准确率,可作为CRC早期筛查和诊断的新肿瘤标志物;septin9基因核苷酸发生甲基化能抑制septin9 mRNA表达,从而导致抑癌功能丧失,使细胞易发生癌变。

关键词：结直肠癌 septin9 基因甲基化 mRNA