检索结果-南通市图书馆

作者：翁轶玮江苏大学

学位级别：硕士

目的伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi)通过III型分泌系统(T3SS)的作用在巨噬细胞内形成含沙门菌液泡(Salmonella-containing vacuole,scv),scv是伤寒沙门菌在巨噬细胞中生存和复制的重要场所。SopE作为伤寒沙门菌T3SS-1分泌的毒力蛋白,有研究发现它对细菌在巨噬细胞内形成的scv的稳定性存在影响,但是作用机制不明。当伤寒沙门菌感染巨噬细胞时,机体会引发自噬反应清除胞内菌,但是伤寒沙门菌也衍生出一些策略抵抗机体自噬。本课题组在前期研究中发现伤寒沙门菌能够动态地影响巨噬细胞自噬。本论文主要研究伤寒沙门菌SopE对细菌scv稳定性的影响,并探究SopE对巨噬细胞自噬的影响,以阐明SopE能否通过影响自噬来调节scv稳定性从而促进细菌在细胞内的生存和复制。方法1.相关菌株的构建(1)sopE基因缺陷变异株(ΔsopE)的构建:利用p GMB151自杀质粒,通过同源重组技术,制备sopE基因缺陷变异株(ΔsopE);(2)sopE基因缺陷变异回补株(C-ΔsopE)的构建:利用p BAD33蛋白表达载体质粒,将sopE基因的编码区克隆于该质粒构建重组质粒,将重组质粒电转入ΔsopE中,制备sopE基因缺陷变异回补株(C-ΔsopE)。同时,将野生菌株WT和ΔsopE中电转入p BAD33蛋白表达载体质粒的空载体以控制变量作为对照,分别为WT/p BAD33,ΔsopE/p BAD33;(3)绿色荧光蛋白表达菌株(WT/p BAD33::p ET28-sfGFP,ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP,C-ΔsopE::p ET28-sfGFP)的构建:将原核表达绿色蛋白质粒p ET28-sfGFP电转入WT/p BAD33,ΔsopE/p BAD33、C-ΔsopE中构建WT/p BAD33::p ET28-sfGFP,ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP,C-ΔsopE::p ET28-sfGFP并检测荧光蛋白表达情况。2.sopE基因生物学特性的研究(1)生长曲线的测定:通过对三种绿色荧光蛋白表达菌株(WT/p BAD33::p ET28-sfGFP、ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP和C-ΔsopE/p ET28-sfGFP)在LB和LPM液体培养基中37℃,250rpm培养条件下每隔相应时间在600nm波长吸光度的值的测定,绘制生存曲线图,分析sopE编码基因对细菌生长的影响;(2)生物膜的测定:将WT/p BAD33::p ET28-sfGFP、ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP和C-ΔsopE/p ET28-sfGFP在TSB培养基中37℃,250rpm培养至对数生长期,分别将其接种于96孔板中,正面朝上放置于30℃平板孵箱内静置培养4天(96h),通过对96孔板固定、染色、仪器测量后,分析sopE基因对细菌形成生物膜能力的影响。3.伤寒沙门菌SopE对巨噬细胞THP-1胞内生存能力的影响在LB液体培养基中37℃,250rpm培养并用L-阿拉伯糖诱导WT/p BAD33::p ET28-sfGFP、ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP和C-ΔsopE/p ET28-sfGFP,将细菌感染巨噬细胞THP-1后杀死胞外菌,将各组细胞用曲拉通裂解后涂于LB平板上计数生成菌落数,记为T0。接着将其余THP-1细胞继续培养2h、4h、6h、12h、24h,曲拉通裂解后涂于平板计数菌落数,记为T2、T4、T6、T12、T24。通过计算不同菌株不同时间段菌落数与T0比值的不同数值来比较各个菌株在不同时间段的巨噬细胞THP-1细胞内生存的能力。4.伤寒沙门菌SopE对其在巨噬细胞内形成的scv的影响细胞免疫荧光实验:将三种菌株(WT/p BAD33::p ET28-sfGFP、ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP、C-ΔsopE/p ET28-sfGFP)在LB液体培养基中37℃,250rpm培养并用L-阿拉伯糖诱导,接着感染巨噬细胞THP-1后杀死胞外菌,培养2h、4h、6h、12h、24h后固定,破膜,一抗和二抗孵育,在特定的波长下观察Gal-8和Lamp-1的荧光信号聚集强度,判断SopE在不同时间段对其在巨噬细胞内形成的scv稳定性的影响。5.伤寒沙门菌SopE对自噬的影响(1)实时荧光定量PCR(q RT-PCR)实验:分别获取WT/p BAD33::p ET28-sfGFP、ΔsopE/p BAD33::p ET28-sfGFP、C-ΔsopE/p ET28-sfGFP这三种菌株感染巨噬细胞6h和24h的总RNA,用q RT-PCR检测Lamp-1、Gal-8、Lc3b的m RNA表达水平;(2)蛋白质印迹法(Western bl

关键词：伤寒沙门菌 SopE scv 自噬

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ssaJ、ssaV、ssaG基因对肠炎沙门菌在巨噬细胞内持续存在的影响

ssaJ、ssaV、ssaG基因对肠炎沙门菌在巨噬细胞内持续存在的影响

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作者：高冉扬州大学

学位级别：硕士

沙门菌是一种重要的人兽共患病病原菌,严重威胁动物和人类健康。该菌在宿主体内能免疫逃逸,进而能在体内持续存在,但此机制尚不清晰。巨噬细胞是沙门菌全身性感染的主要载体,沙门菌在巨噬细胞中持续存活是其在宿主体内持续存在的基础。... 详细信息

沙门菌是一种重要的人兽共患病病原菌,严重威胁动物和人类健康。该菌在宿主体内能免疫逃逸,进而能在体内持续存在,但此机制尚不清晰。巨噬细胞是沙门菌全身性感染的主要载体,沙门菌在巨噬细胞中持续存活是其在宿主体内持续存在的基础。沙门菌侵入巨噬细胞后,在沙门菌囊泡(scv)内生存复制,该特性受Ⅲ型分泌系统2(T3SS2)调控。T3SS2的针形复合体是沙门菌转运效应蛋白至宿主细胞胞浆的通道。然而目前关于T3SS2的针形复合体对沙门菌在巨噬细胞内持续存在的影响研究较少。前期研究中发现肠炎沙门菌C50041ΔspiC在巨噬细胞内持续增殖,进而诱导胞内高水平IL-10。本研究以C50041ΔspiC为参照,聚焦于T3SS2针形复合体内三个代表性基因ssaJ、ssaV和ssaG,研究 C50041ΔssaJ、C50041ΔssaV和 C50041ΔssaG 三株缺失株在巨噬细胞内的持续性,并分析三株缺失株在巨噬细胞内持续存在与scv完整性的关系,以阐述沙门菌在巨噬细胞内持续存在和T3SS2针形复合体的关联性。1.ssaJ、ssaV、ssaG缺失株的构建和生物学特性根据同源重组的原理,构建C50041ΔssaJ、C50041ΔssaV和C50041ΔssaG,并对这三株缺失株的生物学特性进行探究。与亲本株C50041相比,三株缺失株的生长生化特性没有发生改变,生物膜形成能力及运动能力也无显著差异。沙门菌感染巨噬细胞实验结果显示,与亲本株C50041相比,三株缺失株的黏附和侵袭能力没有显著差异;三株缺失株的胞内增殖能力显著增强,其感染巨噬细胞后在42 h仍具有较高的增殖潜能;同时诱导胞内高水平的IL-10,这一现象与spiC缺失株特性一致。qPCR检测结果显示,三株缺失株感染巨噬细胞,胞内促炎因子IFN-γ、iNOS和SOCS3的表达水平下调,抑炎因子IL-10和Arg-1的表达水平显著上调。LDH实验结果显示,与C50041相比三株缺失株感染巨噬细胞后第5h和8h细胞毒性均显著降低。胞外逃逸实验显示,与C50041相比,三株缺失株在巨噬细胞中逃逸能力显著下降。体内实验显示,与C50041相比,三株缺失株的LD上升超过1,500倍;体内动态分析显示,三株缺失株在脾脏和肝脏均不定殖;ELISA检测结果显示,与C50041相比,三株缺失株感染小鼠第14 d,小鼠血清中IL-10的表达水平上调,这表明三株缺失株毒性均显著降低。2.ssaJ、ssaV和ssaG缺失株感染巨噬细胞后对scv完整性的影响沙门菌侵入巨噬细胞后在scv内生存复制,scv完整性对沙门菌胞内持续很重要,SifA与scv的完整性密切相关,因此进一步分析SifA蛋白表达及scv完整性。TEM-1报告系统显示,ssaJ、ssaV和ssaG三株缺失株不影响效应蛋白SifA的转运。使用激光共聚焦显微镜观察三株缺失株与scv的共定位,结果显示与C50041相比,ssaJ、ssaV和ssaG三株缺失株与scv的共定位均更多。C50041与scv的共定位占12.75%,ssaJ、ssaV和ssaG三株缺失株与scv共定位比分别是36.70%、33.90%,26.73%。LLO能破坏scv膜,进一步构建LLO重组沙门菌。胞内菌载量分析显示,重组菌在5 h增殖能力高于缺失株,在20 h增殖能力显著低于缺失株。重组菌C50041ΔssaJ::LLO与scv的共定位显著少于C50041和C50041AssaJ与scv的共定位,重组菌与scv的共定位占比下调至5.88%。通过TEM-1报告系统和Western Blot分析ssaJ、ssaV和ssaG三株缺失株对效应蛋白SpiC在巨噬细胞内转运及在缺失株中表达的影响,结果显示SpiC不分泌至胞浆中,但可在缺失株中表达,表明这些基因缺失导致T3SS2针形复合体不完整,不能发挥转运T3SS2效应蛋白的功能。综上所述,本研究构肠炎沙门菌ssaJ、ssaV及ssaG三株缺失株,与野生株C50041相比,三株缺失株均能在巨噬细胞内持续存在,并诱导胞内高水平的IL-10,对小鼠毒力显著减弱。与野生株C50041相比,ssaJ、ssaV和ssaG三株缺失株与scv共定位更多,这三个缺失株不影响SifA胞浆内转运和表达,但影响SpiC不能转运至胞浆。这些结果表明,T3SS2针形复合体能够介导沙门菌胞内持续感染,沙门菌在胞内持续存在与scv完整性及SpiC的分泌密切相关。本研究拓宽了对T3SS2针形复合体的了解,为沙门菌的防控带来新思路。

关键词：肠炎沙门菌针形复合体 T3SS2 巨噬细胞内持续 scv

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scv蛇形换热管内超临界LNG传热特性数值模拟

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化工学报 2015年第12期66卷 4788-4795页

作者：张康韩昌亮任婧杰周一卉毕明树大连理工大学化工机械学院辽宁大连116024

LNG沉浸式汽化器在液化天然气接收站应用广泛,管内超临界LNG的传热特性对scv运行有重要影响,为此,建立了单根蛇形换热管内LNG流动传热过程的数值计算模型。分析了管程压力、热通量、入口速度及物性变化对管内流体温度与局部传热系数的... 详细信息

LNG沉浸式汽化器在液化天然气接收站应用广泛,管内超临界LNG的传热特性对scv运行有重要影响,为此,建立了单根蛇形换热管内LNG流动传热过程的数值计算模型。分析了管程压力、热通量、入口速度及物性变化对管内流体温度与局部传热系数的影响规律。计算结果表明,局部传热系数沿流动方向呈先增大后减小的趋势,并在准临界点附近达到峰值;由于二次流现象,传热系数在弯管处发生突变。在操作压力范围内,压力越大,局部传热系数峰值越小;热通量越大,局部传热系数峰值越早出现,峰值过后系数下降越快,出现传热恶化现象;而入口速度越大,局部传热系数越大,其峰值出现位置越靠后。该数值模拟结果可为LNG沉浸式汽化器的设计提供参考。

关键词：超临界流体液化天然气 scv 数值模拟传热蛇形换热管

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A Note on the Bloch Function in scv

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Chinese Quarterly Journal of Mathematics 1997年第2期12卷 33-35,页

作者：刘浩河南大学河南开封 475001

In this paper,Bloch function in several complex variables is discussed,and a new characteristation of Bloch function in scv is given.

关键词：多复数BloCk函数 scv 双曲线距离

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scv点火故障原因解析

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仪器仪表标准化与计量 2022年第3期 25-27页

作者：李宵国家管网集团天津液化天然气有限责任公司天津市300451

分析了scv常见的点火故障原因,并针对各种点火故障提出了处理方法,为快速排查scv点火故障提供宝贵经验。

关键词： scv 点火故障阀位反馈点火线圈配比

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超跑灵魂——兰博基尼URUS PERFORMANTE “ESSENZA scv12”限量版

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世界汽车 2023年第7期 40-45页

作者：赫炎不详

“2023年5月16日,兰博基尼在Sant' Agata Bolognese推出Urus Performante特别版。该车专为Essenza scv12设计,仅为40辆纯赛道超级跑车车主保留。限量版超级SUV的设计由兰博基尼的AD Personam高级个性化定制部门负责,让每个Essenza scv1... 详细信息

“2023年5月16日,兰博基尼在Sant' Agata Bolognese推出Urus Performante特别版。该车专为Essenza scv12设计,仅为40辆纯赛道超级跑车车主保留。限量版超级SUV的设计由兰博基尼的AD Personam高级个性化定制部门负责,让每个Essenza scv12客户都能按照自身的个性配置自己的Urus Performante,拥有专门的设计和赛车风格细节,可最大化体现其运动个性。”

关键词：兰博基尼超级跑车限量版个性化定制 SUV scv 赛车

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网络流量测量中相关参数的自回归预测分析

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计算机工程 2006年第6期32卷 130-133页

作者：肖雪峰王建新陈建二中南大学信息科学与工程学院长沙410083

具体分析了两个参数的自回归预测模型。通过分析数据源NLANR给出的真实网络流量数据,比较scv和分组数的预测效果,以及对网络流量估计的影响。通过大量模拟实验和数据分析得出了文献[1]预测模型中相关参数结果,对于在网络流量测量中真正... 详细信息

具体分析了两个参数的自回归预测模型。通过分析数据源NLANR给出的真实网络流量数据,比较scv和分组数的预测效果,以及对网络流量估计的影响。通过大量模拟实验和数据分析得出了文献[1]预测模型中相关参数结果,对于在网络流量测量中真正应用该模型提供了重要依据。

关键词： scv 分组数自回归预测采样

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浸没燃烧式气化器scv优化研究

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中国石油和化工标准与质量 2023年第22期43卷 117-119,123页

作者：冯志明王之恒深圳华安液化石油气有限公司广东深圳518000

本文以华安LNG调峰库浸没燃烧式气化器scv部件老化、频繁点火失败、点火棒点火能量不足、环境温度低无法启动等问题进行研究分析,通过现场实验模拟,分析设备故障原因,提出scv优化改造方案,提升点火成功率,缩短调峰库高压外输开启时间,... 详细信息

本文以华安LNG调峰库浸没燃烧式气化器scv部件老化、频繁点火失败、点火棒点火能量不足、环境温度低无法启动等问题进行研究分析,通过现场实验模拟,分析设备故障原因,提出scv优化改造方案,提升点火成功率,缩短调峰库高压外输开启时间,提高设备稳定性。同时针对scv能耗过高进行优化,调整一二次鼓风控制阀、燃料控制阀在scv不同载荷时的配比,稳定火焰燃烧状态,通过检测NOx与CO的排放,分析燃烧情况,减少燃料气消耗,降低scv使用成本。

关键词： scv 改造升级能耗优化

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基于scv的MIPS指令集指令随机生成工具

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计算机应用 2007年第8期27卷 1991-1993页

作者：尚利宏田冰北京航空航天大学计算机学院北京100083

介绍了在SystemC的系统级建模与验证环境中,使用scv实现用于M IPS指令集指令随机生成的工具。该随机指令生成工具包括静态生成与动态生成两种工作模式。并针对随机指令生成中会遇到的数据访问越界、分支/跳转地址越界等问题提出了解决... 详细信息

介绍了在SystemC的系统级建模与验证环境中,使用scv实现用于M IPS指令集指令随机生成的工具。该随机指令生成工具包括静态生成与动态生成两种工作模式。并针对随机指令生成中会遇到的数据访问越界、分支/跳转地址越界等问题提出了解决办法。此外还研究了针对流水线冲突进行验证的方法。

关键词：随机指令生成验证 SystemC scv MIPS

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scv及其在SoC验证中的应用

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武汉大学学报（工学版） 2004年第5期37卷 116-119页

作者：王锦程李德识曹阳武汉大学电子信息学院湖北武汉430072

片上系统(System on Chip,SoC)是集成电路设计发展的趋势,验证在整个SoC设计中工作量巨大且至关重要.应用验证领域的最新成果scv(SystemCVerification),提出了通过设计用户定义的事务接口(Transactor),对RTL(RegisterTransferLevel)级... 详细信息

关键词： SoC scv SystemC 事务级验证

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