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果蝇肿瘤抑制基因scrib突变体表型的发育动态分析及蛋白质磷酸化的研究

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果蝇肿瘤抑制基因scrib突变体表型的发育动态分析及蛋白质磷酸化...

作者：陈励上海交通大学

学位级别：硕士

果蝇scrib基因作为nTSGs的一员,在细胞极性与增殖的调控中发挥重要的作用。scrib1是scrib的一种致死突变等位基因。已知其纯合子只能存活到三龄幼虫晚期,并且幼虫的整个生长周期都会延长,成虫盘增大融合,上皮单层细胞结构被破坏,细胞极... 详细信息

果蝇scrib基因作为nTSGs的一员,在细胞极性与增殖的调控中发挥重要的作用。scrib1是scrib的一种致死突变等位基因。已知其纯合子只能存活到三龄幼虫晚期,并且幼虫的整个生长周期都会延长,成虫盘增大融合,上皮单层细胞结构被破坏,细胞极性丧失。我们动态观察scrib纯合突变幼虫在发育过程中的形态变化,对其幼虫翅成虫盘组织进行细胞计数和免疫荧光染色,观测翅成虫盘整体结构变化和极性丧失,以及细胞形状和数量的改变,以此确定上皮细胞极性丧失与过度增殖在scrib突变体中发生的前后顺序以及可能的内在联系。另外我们在体外克隆表达了scrib截短序列,构建GST融合蛋白后进行了体外激酶试验,希望可以找到aPKC磷酸化位点,以研究scrib调控上皮极性的可能机制。

关键词： scrib 极性细胞增殖 aPKC 磷酸化

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极性蛋白scrib在原肠胚发生中作用研究

极性蛋白Scrib在原肠胚发生中作用研究

作者：徐涛广东药学院

学位级别：硕士

在胚胎发生过程中,从原肠期开始出现器官的发生和分化,神经管、体节、心脏、脑、原肠、血管等都是在这个阶段产生的,而这一切的开端始于囊胚期上胚层的细胞向中线运动形成原条产生中胚层(也叫EMT)。卵子及随后的发育过程中,在受精卵内... 详细信息

在胚胎发生过程中,从原肠期开始出现器官的发生和分化,神经管、体节、心脏、脑、原肠、血管等都是在这个阶段产生的,而这一切的开端始于囊胚期上胚层的细胞向中线运动形成原条产生中胚层(也叫EMT)。卵子及随后的发育过程中,在受精卵内众多因子参与到原条的细胞运动及后续器官发育中,而表达在上皮类细胞中的极性蛋白基因是重要的调控一族。果蝇中极性蛋白scrib的缺失使得果蝇上皮细胞的极性缺失,细胞过度增殖;在人类中scrib中作为肿瘤抑制基因发挥作用;同时scrib也在神经发育中对神经突触的功能的维持、内耳的发育也起到重要的作用。在我们前期的研究中在体外已经证实了scrib可以和Numb结合负调控Notch信号。这条信号通路在体内是否有功能及有何功能,还没有得到证实。本课题以鸡胚作为动物模型研究体内情况下scrib和Numb的异常表达对胚胎发育产生的影响及如何产生这种影响。我们通过原位杂交的方法分别检测了scrib、Numb的表达,探索两种基因在原肠期的表达规律,发现scrib表达开始于HH 4并在原条前端表达,表达集中,当到达HH 7时则呈弥散性表达;Numb的表达在早期和scrib相同,但后期主要表达在神经系统中。通过电转染的方法分别过表达scrib和Numb,发现过表达引起胚胎发育异常,过表达早期使得胚胎细胞迁移受阻,上胚层的细胞对中胚层的转变受到抑制;后期过表达引起神经管闭合缓慢,起到延缓发育的作用。我们用shRNA降调scrib的表达发现了相反的现象,降调后促进神经管的发育。同时也检测与神经管发育有关的基因Pax-7、Islet-1等等,发现Pax-7表达不受影响,但Islet-1表达受到抑制。综上所述,我们的结果发现Numb和scrib的过表达和降调对EMT的转变和神经管的发育具有相关性,这对于我们进一步探索scrib和Numb结合信号的功能及下游分子机制打下牢固的基础。结论:scrib和numb在原肠期鸡胚发育中起到重要作用,过表达scrib和Numb抑制EMT的转变和神经管的发育;降调scrib则促进神经管的发育。

关键词： scrib numb 原肠胚过表达神经管 EMT

Yap1与极性蛋白scrib在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达和相关性分析

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Yap1与极性蛋白Scrib在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达和相关性分析

作者：陈海铃南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景和研究目的慢性鼻窦炎伴鼻息肉（Chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）是耳鼻喉科最常见的炎性疾病之一,首选保守治疗,对于已出现并发症,或鼻息肉较大影响呼吸的情况则需要手术,且该病反复发作亦是较棘手的临床... 详细信息

研究背景和研究目的慢性鼻窦炎伴鼻息肉（Chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）是耳鼻喉科最常见的炎性疾病之一,首选保守治疗,对于已出现并发症,或鼻息肉较大影响呼吸的情况则需要手术,且该病反复发作亦是较棘手的临床挑战。既往研究提示,CRSwNP的发生发展机制尚未完全阐明,其病理表现主要为鼻黏膜上皮细胞增殖异常、排列紊乱,已知Yes相关蛋白（Yesl associated transcriptional regulator,Yap1）、上皮极性支架蛋白（scribble planar cell polarity protein,scrib）在维持上皮细胞增殖方面起着关键作用,它的失调与多种病理疾病有关。本研究拟从mRNA和蛋白水平探究Yap1、scrib对CRSwNP的鼻上皮细胞增殖的影响,通过检测Yap1、scrib在慢性鼻窦炎伴鼻息肉中的表达情况,从而为CRSwNP的发病机制研究提供新的理论依据,有利于开拓该疾病的治疗新思路。研究方法收集23例无鼻腔鼻窦炎症患者的下鼻甲（inferior turbinate,IT）作为对照组,23例鼻息肉（nasal polyp,NP）作为实验组。使用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR）和免疫荧光染色评估比较两组scrib和Yap1的表达情况,所有实验结果数据应用SPSS20.0软件进行统计学分析,采用Mann-Whitney检验,P＜0.05说明有统计学差异。结果1.与对照组相比,scrib与Yap1的mRNA表达在息肉组织中显著上调（P值分别为0.034、0.049）,且二者的相对表达水平存在强相关关系（rs=0.702,P＜0.001）***和Yap1蛋白在息肉组织中高表达,与对照组比较具有统计学差异（P＜0.001）。结论在基因、蛋白水平上,与健康对照者相比,scrib和Yap1在鼻息肉中均有高表达现象,scrib基因和Yap1基因二者之间存在强相关关系。表明scrib和Yap1的高表达与CRSwNP的发生发展密切相关,且二者可能相互联系,共同对CRSwNP的发生发挥作用。

关键词： scrib Yap1 Hippo通路慢性鼻窦炎伴鼻息肉

活血降糖饮对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的防治作用及对scrib蛋白表达的影响

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中国医药导报 2018年第33期15卷 4-7,12,181页

作者：刘德亮李惠林渠昕赵恒侠楚淑芳刘雪梅曾霖张学文广东省深圳市中医院内分泌科广东深圳518033 广州中医药大学第四临床医学院广东深圳518033 陕西中医药大学国医大师研究所陕西咸阳712046

目的研究活血降糖饮对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的防治作用及对scrib蛋白表达的影响。方法通过高脂高热卡饮食和小剂量链脲佐菌素尾静脉注射诱导建立2型糖尿病模型大鼠,应用SPSS软件将模型大鼠随机分为模型组、中药组、双胍组,另设... 详细信息

目的研究活血降糖饮对2型糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的防治作用及对scrib蛋白表达的影响。方法通过高脂高热卡饮食和小剂量链脲佐菌素尾静脉注射诱导建立2型糖尿病模型大鼠,应用SPSS软件将模型大鼠随机分为模型组、中药组、双胍组,另设正常组,每组各10只。药物干预后检测血脂、血糖及胰岛素,并应用原位末端标记法检测胰岛β细胞凋亡情况;分离纯化胰岛细胞后,通过免疫印迹方法检测各组大鼠胰岛细胞scrib蛋白表达。结果与模型组比较,中药组和双胍组大鼠空腹血糖、餐后2 h血糖、空腹胰岛素、餐后2 h胰岛素、胰岛素抵抗指数和总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇均明显下降,差异有统计学意义(P 0.05)。与模型组比较,中药组和双胍组大鼠胰岛β细胞凋亡指数亦明显降低(P scrib蛋白表达明显上调(P scrib蛋白表达有关。

关键词：活血降糖饮 2型糖尿病细胞凋亡 scrib Hippo通路

乳腺上皮细胞特异性敲除scrib基因杂合子小鼠的制作与鉴定

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中国比较医学杂志 2013年第6期23卷 28-32页

作者：何晓东李江超兰天亓翠玲章倩倩王丽京广东药学院血管生物学研究所广州510006

目的利用Cre-LoxP重组酶系统构建乳腺上皮细胞特异性敲除scrib基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在动物整体水平研究scrib基因在乳腺癌中的作用提供研究平台。方法将scrib条件敲除杂合子小鼠(scrib+/fl小鼠)进行繁殖并鉴定,然后将鉴... 详细信息

目的利用Cre-LoxP重组酶系统构建乳腺上皮细胞特异性敲除scrib基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在动物整体水平研究scrib基因在乳腺癌中的作用提供研究平台。方法将scrib条件敲除杂合子小鼠(scrib+/fl小鼠)进行繁殖并鉴定,然后将鉴定结果为阳性的子代scrib+/fl小鼠与乳腺上皮细胞特异性表达Cre重组酶的MMTV-Cre纯合子小鼠进行杂交,鉴定其子代小鼠的基因型。结果成功繁育scrib条件敲除小鼠和MMTV-Cre小鼠,并通过鉴定得到scrib+/fl小鼠,与MMTV-Cre小鼠杂交并繁殖,获得基因型为scrib+/fl;MMTV-Cre+/-小鼠5只。结论本研究利用Cre-LoxP重组酶系统成功构建了乳腺上皮细胞特异性敲除scrib基因杂合子小鼠,为进一步研究极性蛋白scrib表达下调在乳腺癌发生中的作用提供了良好的动物模型。

关键词：小鼠 Cre LoxP 条件敲除极性蛋白 scrib 小鼠乳腺瘤病毒

Dynamic expression of the LAP family of genes during early development of Xenopus tropicalis

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Science China(Life Sciences) 2011年第10期54卷 897-903页

作者： YANG QiuTan LV XiaoYan KONG QingHua LI ChaoCui ZHOU Qin MAO BingYu Core Facility of Genetically Engineered Mice State Key Laboratory of Biotheropy West China Hospital Sichuan University Chengdu 610041 China CAS-Max Planck Junior Scientist Group State Key Laboratory of Genetic Resources and Evolution Kunming Institute of Zoology Chinese Academy of Sciences Kunming 650223 China

The leucine-rich repeats and PDZ (LAP) family of genes are crucial for the maintenance of cell polarity as well as for epithelial homeostasis and tumor suppression in both vertebrates and *** members of this gene family are known:densin,erbin,scribble and ***,we identified the four members of the LAP gene family in Xenopus tropicalis and studied their expression patterns during embryonic *** Xenopus LAP proteins show a conserved domain structure that is similar to their homologs in other *** Xenopus embryos,these genes were detected in animal cap cells at the early gastrula *** later stages of development,they were widely expressed in epithelial tissues that are highly polar in nature,including the neural epithelia,optic and otic vesicles,and in the *** data suggest that the roles of the Xenopus LAP genes in the control of cell polarity and morphogenesis are conserved during early *** and lano show similar expression patterns in the developing head,suggesting potential functional interactions between the two molecules in vivo.

关键词： Xenopus tropicalis LAP gene family Densin Erbin scrib Lano expression pattern

热带爪蛙LAP家族基因在胚胎早期发育中的表达图式

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中国科学：生命科学 2011年第9期41卷 692-698页

作者：杨秋潭吕小岩孔清华李朝翠周钦毛炳宇四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室基因工程小鼠中心成都610041 中国科学院昆明动物研究所遗传资源与进化国家重点实验室中国科学院-马普青年科学家小组昆明650223

LAP家族蛋白含有特征性的富含亮氨酸的重复序列和PDZ结构域.在脊椎动物和无脊椎动物中,LAP家族基因在细胞极性、上皮组织的动态平衡与肿瘤抑制等的调控中具有重要作用.在脊椎动物中,这一家族基因包括4个成员:densin,erbin,scribble和la... 详细信息

LAP家族蛋白含有特征性的富含亮氨酸的重复序列和PDZ结构域.在脊椎动物和无脊椎动物中,LAP家族基因在细胞极性、上皮组织的动态平衡与肿瘤抑制等的调控中具有重要作用.在脊椎动物中,这一家族基因包括4个成员:densin,erbin,scribble和lano.本研究根据热带爪蟾(Xenopus tropicalis)的基因组与EST序列,推测了其LAP家族的4个基因,克隆了其基因片段并研究了它们在胚胎发育中的表达图式.爪蛙的LAP蛋白在结构上与其他脊椎动物中的同源蛋白相似.这4个基因均有母源性表达,在卵裂期胚胎动物极细胞中表达较强,到原肠胚期在动物帽细胞中可检测到.在胚胎发育晚期,这些基因在上皮细胞中表达较广,包括神经上皮、耳泡、视泡和前肾.上述结果表明,LAP基因可能参与调控爪蛙早期发育中的上皮细胞极性和形态发生.在爪蛙胚胎头部,erbin和lano具有相似的时空表达图式,这表明二者在体内的功能可能是相关的.

关键词：热带爪蛙 Xt-LAP 基因家族 Densin Erbin scrib Lano 表达图式