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sch9蛋白激酶调控酵母细胞全蛋白的泛素化

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应用与环境生物学报 2012年第3期18卷 364-368页

作者：郄蓓蓓闾磊黄鹏刘科杜林方四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

为探讨蛋白激酶sch9是否影响细胞蛋白质稳态水平及其在热胁迫时的响应,以野生型、sch9基因缺失突变体、转sch9基因Δsch9(sch9-3HA)酵母为材料,利用特异的泛素抗体,检测长期培养时全蛋白泛素化水平变化.结果表明,sch9缺失引起细胞全蛋... 详细信息

为探讨蛋白激酶sch9是否影响细胞蛋白质稳态水平及其在热胁迫时的响应,以野生型、sch9基因缺失突变体、转sch9基因Δsch9(sch9-3HA)酵母为材料,利用特异的泛素抗体,检测长期培养时全蛋白泛素化水平变化.结果表明,sch9缺失引起细胞全蛋白泛素化水平降低,转sch9基因可以使细胞全蛋白泛素化水平恢复.55℃热胁迫30 min处理,突变体Δsch9全蛋白泛素化水平降低,转sch9基因Δsch9(sch9-3HA)全蛋白泛素化水平不变,回到正常生长温度时,蛋白泛素化水平也没有改变.外加蛋白酶体抑制剂MG132时,突变体Δsch9蛋白泛素化水平不受影响,而转sch9基因△sch9(sch9-3HA)全蛋白泛素化水平显著增加,表明前者是自噬途径降解,而增加部分是通过蛋白酶体途径降解.蛋白激酶sch9调控细胞全蛋白泛素化水平,以及2个不同的降解途径.

关键词：酵母 sch9 泛素化蛋白酶体自噬热胁迫

sch9通过Cdc34调控酵母细胞的寿命和胁迫应答

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四川大学学报（自然科学版） 2015年第5期52卷 1145-1150,1135页

作者：郄蓓蓓闾磊吕舟杜林方刘科四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

为研究sch9激酶的生理功能,本文首先通过同步细胞周期的方法发现sch9的PDK1位点的磷酸化随细胞周期变化.接下来在酵母中过表达Cdc34显示Cdc34的组成性表达可以进一步延长s ch9△突变体的寿命并且增强其对氧化胁迫及热胁迫的抗性.我们的... 详细信息

为研究sch9激酶的生理功能,本文首先通过同步细胞周期的方法发现sch9的PDK1位点的磷酸化随细胞周期变化.接下来在酵母中过表达Cdc34显示Cdc34的组成性表达可以进一步延长s ch9△突变体的寿命并且增强其对氧化胁迫及热胁迫的抗性.我们的研究结果首次表明Cdc34作为sch9的底物参与细胞胁迫应答和衰老的调控.

关键词： sch9 Cdc34 磷酸化 PDK1位点寿命胁迫

酵母(Saccharomyces cerevisiae)蛋白激酶sch9激活环磷酸化调控胁迫应答

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四川大学学报（自然科学版） 2010年第1期47卷 185-191页

作者：刘军闾磊朱德燕苗敏曹红平钟彦刘科四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610065

通过比较野生型、△sch9和△sch9(sch9-3HA)三种酵母菌种在葡萄糖、半乳糖、蔗糖和麦芽糖作碳源培养基上的生长表型研究sch9是否参与酵母不同碳源代谢利用调控.结果显示,△sch9细胞菌落大小较野生型细胞小且有明显的生长缺陷,但这种生... 详细信息

通过比较野生型、△sch9和△sch9(sch9-3HA)三种酵母菌种在葡萄糖、半乳糖、蔗糖和麦芽糖作碳源培养基上的生长表型研究sch9是否参与酵母不同碳源代谢利用调控.结果显示,△sch9细胞菌落大小较野生型细胞小且有明显的生长缺陷,但这种生长缺陷在重新获得sch-3HA基因后得到恢复.通过比较野生型、△sch9和△sch9(sch9-3HA)三种酵母菌种在渗透压胁迫和热胁迫条件下的生长表型发现sch9可能参与了酵母胁迫应答.利用抗sch9570位磷酸化苏氨酸特异性抗体(anti-T570-P),通过变性免疫沉淀和免疫印迹方法,研究了生理条件下的△sch9(sch9-3HA)细胞裂解液中sch9激活环的磷酸化状态.结果显示,在生理条件下sch9激活环T570位点发生了明显磷酸化.进一步研究了渗透压胁迫条件下sch9激活环T570位点的磷酸化水平.结果表明,渗透压胁迫条件下sch9激活环T570位点磷酸化水平较生理条件下显著增强.结果显示sch9可能通过增强激活环磷酸化水平来参与调控酵母不同碳源代谢和胁迫应答.

关键词：酵母 sch9 胁迫蛋白激酶 PDK1位点信号传导

酵母(Saccharomyces cerevisiae)sch9蛋白激酶PDK1位点体内磷酸化的研究

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四川大学学报（自然科学版） 2009年第4期46卷 1125-1129页

作者：朱德燕刘军黄新河薛薇刘科四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

根据 sch9氨基酸序列中激活区570位苏氨酸(T570)位点,也被称为 PDK1位点附近的氨基酸序列设计了一段磷酸化多肽,并获得了570位磷酸化苏氨酸特异性抗体.实验表明该抗体可有效区别 sch9 PDK1位点的磷酸化和非磷酸化.使用该抗体检测生理条... 详细信息

根据 sch9氨基酸序列中激活区570位苏氨酸(T570)位点,也被称为 PDK1位点附近的氨基酸序列设计了一段磷酸化多肽,并获得了570位磷酸化苏氨酸特异性抗体.实验表明该抗体可有效区别 sch9 PDK1位点的磷酸化和非磷酸化.使用该抗体检测生理条件下表达的 sch9蛋白,发现 sch9的 PDK1位点在生理条件下发生了明显的磷酸化.

关键词：酵母 sch9 蛋白激酶 PDKl 位点信号传导

酿酒酵母蛋白激酶sch9的PDK1位点调控C末端磷酸化状态

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四川大学学报（自然科学版） 2016年第3期53卷 639-644页

作者：吕舟郄蓓蓓闾磊刘科四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

利用酿酒酵母蛋白激酶sch9(哺乳动物p70S6k1的同源物)PDK1和PDK2位点点突变的两种突变体,分别进行生长、寿命表型检测及免疫印迹分析实验,发现PDK1位点的磷酸化水平对于sch9活性起着主导性作用,并且PDK1位点发生去磷酸化会促进C末端高... 详细信息

利用酿酒酵母蛋白激酶sch9(哺乳动物p70S6k1的同源物)PDK1和PDK2位点点突变的两种突变体,分别进行生长、寿命表型检测及免疫印迹分析实验,发现PDK1位点的磷酸化水平对于sch9活性起着主导性作用,并且PDK1位点发生去磷酸化会促进C末端高度磷酸化,而PDK1发生磷酸化会抑制C末端的磷酸化.由此说明sch9上PDK1和PDK2位点是否发生磷酸化除了受到各自上游激酶的调节外,两者之间还存在着一种负调控机制.

关键词： sch9 酵母磷酸化 PDK1位点 PDK2位点

酵母蛋白激酶sch9激活环磷酸化状态参与热胁迫应答调控

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应用与环境生物学报 2012年第3期18卷 369-372页

作者：闾磊郄蓓蓓黄鹏刘科杜林方四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室成都610064

在酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,蛋白激酶sch9已经被证明与细胞大小、胁迫应答、自噬以及寿命的调控有关.通过不同基因型酵母在固体培养基上的热敏感性研究,发现sch9的激酶功能与热胁迫相关,进一步通过sch9特异磷酸化位点抗体的免... 详细信息

在酵母(Saccharomyces cerevisiae)中,蛋白激酶sch9已经被证明与细胞大小、胁迫应答、自噬以及寿命的调控有关.通过不同基因型酵母在固体培养基上的热敏感性研究,发现sch9的激酶功能与热胁迫相关,进一步通过sch9特异磷酸化位点抗体的免疫印迹,检测了细胞内sch9关键的激活环T570位点(PDK1位点)在热胁迫条下的磷酸化状态,发现半乳糖诱导表达的sch9在热胁迫条件下T570位点去磷酸化,首次证明了sch9通过调控激酶活性参与细胞热胁迫应答.研究结果揭示了sch9在胁迫应答中的部分功能,并为生理条件下sch9调控功能的研究提供了生物化学证据.

关键词： sch9 热胁迫磷酸化 PDK1位点酵母

禾谷镰刀菌丝/苏氨酸蛋白激酶sch9基因的功能研究

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禾谷镰刀菌丝/苏氨酸蛋白激酶SCH9基因的功能研究

作者：王玉林西北农林科技大学

学位级别：硕士

禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum schw.)是一类重要的植物病原真菌,有关禾谷镰刀菌的研究一直是国内外的一个热点。禾谷镰刀菌能引起多种作物发病造成经济损失,并且能够产生多种单端孢霉烯族毒素( Trichothecenes)可使人、畜中毒,严重... 详细信息

禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum schw.)是一类重要的植物病原真菌,有关禾谷镰刀菌的研究一直是国内外的一个热点。禾谷镰刀菌能引起多种作物发病造成经济损失,并且能够产生多种单端孢霉烯族毒素( Trichothecenes)可使人、畜中毒,严重影响了小麦的品质及商业价值。自2003年禾谷镰刀菌野生型菌株PH-1的全基因组序列公布以来,其功能基因组学研究发展迅速,各种研究基因功能的方法被广泛用于禾谷镰刀菌的研究,其中基于遗传转化的体内同源重组的基因敲除技术在禾谷镰刀菌基因功能研究方面表现出优越性。禾谷镰刀菌PH-1菌株基因组大小为36.1 Mb,分布在4条染色体上。其中,激酶是一类从高能供体分子(如ATP)转移磷酸基团到特定靶分子(底物)的酶,这一过程谓之磷酸化。生物体内普遍存在的信息转导调节方式是蛋白激酶(protein kinase,pk)和蛋白磷酸酶(protein phosphatase)催化蛋白质磷酸化与去磷酸化,这一过程几乎涉及所有的生理过程。目前赤霉菌中预测的蛋白激酶基因约有120多个。sch9作为蛋白激酶基因之一发挥着重要的作用。sch9是酵母中TORC1的底物, AGC型蛋白激酶sch9 C末端的六个氨基酸能够直接被TORC1磷酸化,而在雷帕霉素处理、碳氮饥饿、短暂的渗透胁迫、氧化胁迫和热胁迫下,sch9发生去磷酸化,通过磷酸化和去磷酸化,sch9能够调节核蛋白体的产生,翻译起始,细胞G0期的进入等过程。本研究借助潮霉素抗性基因hph,通过Split PCR,采用PEG介导的原生质体转化方法,对转化子进行PCR检测和southern验证,获得了禾谷镰刀菌sch9缺失突变体。我们对该突变体进行了系统的生物学研究,包括菌落形态观察、生长速度测量,分生孢子形态观察、产孢量统计,孢子萌发观察,胡萝卜培养基有性杂交, H2O2等4种压力筛选下的表型变化以及接种小麦穗和玉米秆、玉米须的侵染试验以及接种后小麦籽粒的产毒能力,。结果表明,突变体菌落气生菌丝较疏,生长速率下降,孢子形态没有改变但产孢量下降,孢子萌发的菌丝变短,在胡萝卜培养基上突变体能通过有性生殖产生正常的子囊和子囊孢子,在压力筛选下突变体表现出明显的不耐压。对小麦品种小偃22和玉米杆、玉米须的致病性明显下降,而且籽粒毒素含量也明显下降。推测sch9是赤霉菌正常生长代谢所必需的基因,与致病性,抗逆能力有关。

关键词：禾谷镰刀菌 sch9 激酶表型分析功能验证小麦赤霉病

长引物PCR法构建白念珠菌sch9-MYC融合菌

同方学位论文库评论

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同方学位论文库

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中国真菌学杂志 2015年第3期10卷 129-133页

作者：徐秋荣吕权真隋雪王晓娟阎澜姜远英福建中医药大学药学院中药学教研室福州350108 第二军医大学药学院新药研究中心上海200433 沈阳药科大学生命科学与生物制药学院沈阳110016 中国药科大学药学院南京210009

目的构建白念珠菌sch9-MYC融合菌。方法运用长引物PCR扩增含有MYC标签和ARG4筛选标记的质粒序列,采用醋酸锂转染法将质粒序列同源重组到白念珠菌SN152的sch9基因开放阅读框的C末端,在SC-Leu-选择性培养基上筛选阳性克隆,抽取阳性克隆基... 详细信息

目的构建白念珠菌sch9-MYC融合菌。方法运用长引物PCR扩增含有MYC标签和ARG4筛选标记的质粒序列,采用醋酸锂转染法将质粒序列同源重组到白念珠菌SN152的sch9基因开放阅读框的C末端,在SC-Leu-选择性培养基上筛选阳性克隆,抽取阳性克隆基因组进行PCR验证,将验证为阳性的转染子进行生长曲线测定、spot assay、菌丝诱导实验,进一步筛选出表型正常的融合菌。结果通过PCR验证鉴定出3株融合菌构建正确,通过生长曲线测定、spot assay、菌丝诱导实验筛选出两株表型正常的融合菌菌株。结论运用长引物PCR扩增方法同源重组可以正确构建白念珠菌sch9-MYC融合菌菌株。

关键词：白念珠菌 MYC sch9 长引物

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sch9调控酵母泛素化的分子机制研究

成都医学院学报 2022年第2期17卷 137-141页

作者：韩云蕾郄蓓蓓童小丽杜小静陈雪唐志哲成都医学院基础医学院成都610500 成都体育学院运动医学与健康学院成都610041 成都市石室天府中学生物教研组成都610041 成都市玉林中学生物教研组成都610041

目的探究sch9对酵母寿命的调控作用与泛素化水平之间的相关性。方法通过荧光染色的方法检测酵母细胞的活性氧(ROS)水平,采用超氧化物诱导剂及雷帕霉素靶蛋白复合物1(TORC1)抑制剂处理细胞,并利用蛋白质印迹技术检测细胞泛素化蛋白的表... 详细信息

目的探究sch9对酵母寿命的调控作用与泛素化水平之间的相关性。方法通过荧光染色的方法检测酵母细胞的活性氧(ROS)水平,采用超氧化物诱导剂及雷帕霉素靶蛋白复合物1(TORC1)抑制剂处理细胞,并利用蛋白质印迹技术检测细胞泛素化蛋白的表达水平。结果荧光染色显示,对数期sch9Δ突变体具有较高的超氧阴离子(Psch9Δ突变体的泛素化水平(Psch9的信号通路有关,为酵母细胞蛋白质量控制和寿命调控提供新的分子理论基础。

关键词：酵母 sch9 雷帕霉素泛素化活性氧