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PIN1维持皮肤鳞状细胞癌氧化还原平衡的功能研究

PIN1维持皮肤鳞状细胞癌氧化还原平衡的功能研究

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作者：褚青松福建医科大学

学位级别：硕士

目的本课题研究发现PIN1在正常皮肤中的功能不是很重要,条件性敲除小鼠皮肤中的PIN1不会影响皮肤的发育及其保护屏障的功能。在皮肤鳞状细胞癌中,PIN1作为一个重要的调控者能促进皮肤癌的发生发展,但是其调控机制仍然没有被揭示。因此,... 详细信息

目的本课题研究发现PIN1在正常皮肤中的功能不是很重要,条件性敲除小鼠皮肤中的PIN1不会影响皮肤的发育及其保护屏障的功能。在皮肤鳞状细胞癌中,PIN1作为一个重要的调控者能促进皮肤癌的发生发展,但是其调控机制仍然没有被揭示。因此,厘清PIN1在皮肤癌中的功能很有必要,并且靶向PIN1可能是治疗皮肤鳞状细胞癌的一个很好手段,具有重要的临床意义。方法1,免疫荧光和免疫组化染色定位PIN1在皮肤组织中的表达位置。2,体外细胞水平检测PIN1敲减后对皮肤鳞状癌细胞A431增殖和迁移的影响。3,皮下致瘤检测PIN1敲减对皮肤鳞状癌细胞scc13成瘤能力影响。4,scc13细胞PIN1敲减后梯度稀释成瘤,研究PIN1对皮肤鳞状细胞癌干细胞的影响。5,HO处理研究PIN1对ROS应激的调节能力。6,Western blot方法筛选已知PIN1下游蛋白。7,GST-pull down,银染,Western blot和质谱筛选与PIN1相互作用的蛋白。结果1,正常皮肤中,PIN1主要在表皮基底层和毛囊干细胞中表达;在皮肤癌中,PIN1主要表达于肿瘤组织基底层。2,体外细胞水平,PIN1敲减几乎不影响A431细胞的增殖和迁移。3,体内水平,PIN1敲减后scc13瘤增殖能力降低,以及极限细胞稀释法皮下致瘤证明PIN1敲减后scc13细胞成瘤率降低。4,敲减PIN1后,A431细胞调节ROS应激的能力降低。5,通过Western blot广泛筛选,在scc中不能筛选到已知PIN1下游。6,GST-pull down和银染实验,筛选出PIN1的相互作用蛋白PGAM5,其可能调控皮肤鳞状细胞癌的发生发展。结论PIN1在正常皮肤组织和肿瘤组织中的表达分布,以及极限稀释成瘤实验,说明PIN1对干细胞具有重要的调控作用。体外细胞水平证明,HO处理后PIN1敲减组相对于对照组细胞死亡数显著增加,可能在体内肿瘤生长相对于对照显著减慢也是受到ROS胁迫导致,所以PIN1对平衡ROS应激有重要作用。质谱筛选出的PIN1相互作用蛋白PGAM5也在ROS应激中发挥重要功能。综上,我们认为PIN1可能维持皮肤鳞状癌细胞的氧化还原平衡。

关键词： PIN1 A431 scc13 活性氧干细胞 PGAM5

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