检索结果-南通市图书馆

作者：李鹏涛河北北方学院

学位级别：硕士

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗各种神经退行性疾病在基础研究中已经得到证实。黄芪是我国传统补气中药的一种,其可以诱导BMSCs分化为神经细胞已经得到证实。黄芪甲苷Ⅳ是黄芪的主要有效成分中的一种... 详细信息

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗各种神经退行性疾病在基础研究中已经得到证实。黄芪是我国传统补气中药的一种,其可以诱导BMSCs分化为神经细胞已经得到证实。黄芪甲苷Ⅳ是黄芪的主要有效成分中的一种,其是否可以促进BMSCs向神经细胞分化目前没有实验证明。SAMR1小鼠是正常衰老小鼠,作为阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠SAMP8小鼠的对照小鼠。SAMR1小鼠BMSCs培养以及诱导分化研究较少,其是否可以体外诱导分化为神经细胞没有相关的报道。本实验将探讨黄芪甲苷Ⅳ诱导SAMR1小鼠的骨髓间充质干细胞分化为神经细胞的效果,以及作用机制。首先使用全骨髓贴壁培养法培养SAMR1小鼠的BMSCs,培养至3代备用。接着采用流式细胞技术检测培养细胞表面CD29,CD34,CD90的表达。我们以0,20,40,80,160mg/ml浓度黄芪甲苷Ⅳ对BMSCs进行诱导,分别在0h,1h,6h,12h,24h,48h,72h免疫荧光检测其NSE和Nestin的表达。之后采用Western blot检测诱导过程中Notch-1和β-catenin蛋白的表达。最后使用RT-qPCR检测诱导后Nestin、NSE、Notch-1、β-catenin mRNA的表达。结果显示,SAMR1小鼠BMSCs培养至第3代,细胞基本呈长梭形,细胞体积增大,基本纯化。流式细胞技术检测CD29(+),CD34(-),CD90(+),证实其为BMSCs。通过对不同浓度诱导效果统计分析得出,20,40,80mg/ml黄芪甲苷Ⅳ诱导组(T1,T2,T3)诱导后NSE和Nestin免疫荧光表达显著高于对照组(C)(P0.05),40mg/ml组诱导12h神经细胞表达量最高。经40mg/ml诱导12h后RT-qPCR结果显示,诱导后Nestin、NSE mRNA显著高于对照组(PSAMR1小鼠BMSCs体外分化为神经细胞,40mg/ml浓度诱导12h效果好。黄芪甲苷Ⅳ诱导分化过程中,通过提高β-catenin蛋白和mRNA的表达,抑制Notch1蛋白和mRNA的表达,促进了BMSCs分化为神经细胞。

关键词：黄芪甲苷Ⅳ SAMR1小鼠骨髓间充质干细胞神经分化

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miR-9和miR-9＊在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制

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中国医学科学院学报 2015年第3期37卷 253-258页

作者：刘伟刘畅阴彬彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院北京协和医学院人体解剖与组织胚胎学系北京100005 中国医学科学院北京协和医学院神经科学中心北京100005

目的探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(samr1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和... 详细信息

目的探讨miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠衰老中的功能及机制。方法选取4-、8-、12-月龄快速老化倾向小鼠(SAMP8)作为研究对象,并以同月龄快速老化抵制小鼠(samr1)为对照,每组3只,取脑,切片进行原位杂交检测miR-9和miR-9*的表达;分别以miR-9和miR-9*的模拟物和抑制物转染N2a细胞,采用流式细胞术检测过表达和敲低miRNA对细胞周期的影响;生物信息学预测miR-9和miR-9*靶基因并进行双荧光素酶报告基因实验验证。结果 miR-9和miR-9*在SAMP8小鼠海马区的表达低于SAMR1小鼠。敲低miR-9和miR-9*都可以增加N2a细胞G1期细胞在群体中的比例,减少S期细胞在群体中的比例,过表达则相反。生物信息学预测并通过文献筛选miR-9的靶基因有PSEN1、SCN2B、MAP3K3和BACE1,miR-9*的靶基因有CDKn1c。荧光素酶报告基因实验证实miR-9的靶基因是MAP3K3,miR-9*的靶基因是CDKn1c。结论 miR-9和miR-9*可能是分别通过其靶基因MAP3K3和CDKn1c在SAMP8小鼠衰老进程中发挥重要作用。

关键词： miR-9 miR-9＊衰老 SAMP8小鼠 SAMR1小鼠靶基因

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