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一株PEDV广东流行株s1基因遗传进化分析及其在昆虫细胞中的表达纯化

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肇庆学院学报 2024年第2期45卷 16-21页

作者：刘郁夫林晓慧谭银娟冯美莹肇庆学院生命科学学院广东肇庆526061 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司广东肇庆526238

为了解猪流行性腹泻病毒广东流行株的s1基因流行变异情况,制备相应的诊断试剂,试验采用RT-PCR从猪流行性腹泻疑似发病仔猪的肠道内容物中扩增获得s1基因,利用生物信息学软件构建s1基因的遗传进化树.将s1基因克隆至杆状病毒穿梭质粒pFast... 详细信息

为了解猪流行性腹泻病毒广东流行株的s1基因流行变异情况,制备相应的诊断试剂,试验采用RT-PCR从猪流行性腹泻疑似发病仔猪的肠道内容物中扩增获得s1基因,利用生物信息学软件构建s1基因的遗传进化树.将s1基因克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac1,转化至DH10Bac感受态细胞中,经抗生素筛选重组杆粒,把重组杆粒转染到昆虫细胞sf9,盲传3代后进行间接免疫荧光试验和Western blot鉴定.结果表明:该猪流行性腹泻病毒广东流行株分布于GII-b分支,与国内猪流行性腹泻病毒分离株(HN-HB1-2018、HBHA2015)的核苷酸相似性为98.0%~98.3%,而与猪流行性腹泻病毒经典毒株CV777、DR13的核苷酸相似性仅为89.9%~90.0%.且s1重组蛋白可在昆虫细胞sf9中以细胞培养分泌上清的形式表达.本研究可为猪流行性腹泻病毒的流行现状研究提供参考,以及后续猪流行性腹泻病毒诊断制品的研发提供前期基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒 s1基因遗传进化昆虫细胞

一株GI-19基因型禽传染性支气管炎病毒基因序列分析及致病性研究

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中国家禽 2024年

作者：武奇徐梦成魏邓乐张雪花李丁梅梅江苏省农业科学院动物免疫工程研究所扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心

为了解传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异及致病性，试验对江苏某鸡场发病鸡进行病原分离和鉴定，并对分离株s1基因进行同源性、遗传进化树、糖基化位点、s蛋白裂解位点和致病性分析。结果显示：从发病鸡肾脏组织中分离并鉴定到1株IB... 详细信息

为了解传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异及致病性，试验对江苏某鸡场发病鸡进行病原分离和鉴定，并对分离株s1基因进行同源性、遗传进化树、糖基化位点、s蛋白裂解位点和致病性分析。结果显示：从发病鸡肾脏组织中分离并鉴定到1株IBV，该分离株经sPF鸡胚盲传5代后，可引起典型的侏儒胚特征病变，其s1基因大小为1 620 bp，分离株被命名为CK/CH/WJ215;CK/CH/WJ215与GⅠ-19基因型毒株s1核苷酸序列相似性为94.3%，与流行优势基因型GⅠ-19属于同一分支；RDP4重组分析显示该分离株s1蛋白不存在重组事件；进一步糖基化位点分析表明，与常用疫苗株相比，CK/CH/WJ215 s1蛋白在第51、77、103、138、163、178、247、276、283、530位点出现变异，值得注意的是，与H120疫苗株和QXL87疫苗株相比，CK/CH/WJ215 s1蛋白分别在138和530位出现了新的糖基化位点；7日龄sPF鸡致病性试验显示，该分离株可导致sPF鸡100%(15/15)发病，66.7%(10/15)死亡，并且导致严重的肾脏病变；感染鸡从第2天开始持续排毒，直到第21天气管和泄殖腔排毒率仍为80%(4/5)和100%(5/5)。研究表明，从江苏某鸡场发病鸡群种分离的GⅠ-19基因型IBV对sPF雏鸡具有很强的致病性，结果为该地区传染性支气管炎流行病学及防控提供参考。

关键词：传染性支气管炎病毒 GⅠ-19基因型 s1基因致病性

传染性支气管炎病毒山西分离株的分离鉴定及其s1基因分子特征分析

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中国预防兽医学报 2022年第3期44卷 320-324页

作者：王旭贞程宇谭仕明马海利梁立滨山西省畜牧兽医学校山西太原030024 山西农业大学动物医学学院山西太谷030801

鸡传染性支气管炎(IB)是目前对养禽业造成严重危害的疫病之一,其病原为传染性支气管炎病毒(IBV)。IBV由于其基因组的特点而易于发生变异和重组,从而产生新的变异株。为了解山西地区IBV的流行及变异情况,本研究采集山西省晋中市疑似发生... 详细信息

鸡传染性支气管炎(IB)是目前对养禽业造成严重危害的疫病之一,其病原为传染性支气管炎病毒(IBV)。IBV由于其基因组的特点而易于发生变异和重组,从而产生新的变异株。为了解山西地区IBV的流行及变异情况,本研究采集山西省晋中市疑似发生呼吸道病毒感染的肉鸡组织病料样品,通过PCR鉴定、鸡胚接种及测序,分离鉴定到1株IBV,命名为CK/shanxi-01/2021。在该分离株s1基因测序的基础上,与NCBI数据库中不同基因型IBV代表株进行序列比对,并构建系统进化树。遗传演化分析结果显示本研究所分离到的IBV为GI-19基因型。将CK/shanxi-01/2021株的s1基因序列与IBV常用疫苗株H120、M41、H52、4/91及LDT3-A等进行序列比对分析,结果显示分离株与目前常用疫苗株核苷酸序列的同源性为78.1%~85.2%,氨基酸序列同源性为75.2%~78.4%,与以往GI-19基因型病毒株相比其s1蛋白高变区(HVR)出现了V68I、s120A、A271T、N282T、N291s等突变。由此可见,加强IBV流行病学监测,及时掌握目前流行的IBV基因型及其变异特点,对于IB疫情防控具有重要意义。本研究为山西省地区IB疫情防控提供了参考依据。

关键词：传染性支气管炎病毒分离鉴定 s1基因进化分析

2018-2020年中国部分省市猪流行性腹泻病毒s1基因的监测及遗传变异分析

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中国畜牧兽医 2022年第2期49卷 424-434页

作者：颜忠杨汉春中国农业大学动物医学院北京100193

【目的】调查中国规模化猪场猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行情况。【方法】利用RT-PCR检测方法对2018-2020年采集于全国11个省市318个规模化猪场的2391份样品进行PEDV核酸检测,对30份阳性样品进行s1全... 详细信息

【目的】调查中国规模化猪场猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的流行情况。【方法】利用RT-PCR检测方法对2018-2020年采集于全国11个省市318个规模化猪场的2391份样品进行PEDV核酸检测,对30份阳性样品进行s1全基因扩增与测序,并利用MegAlign、Mega 7.0等软件进行分析。【结果】2018-2020年,猪场PEDV核酸阳性率分别为48.57%、10.96%和4.72%,样品PEDV核酸阳性率分别为28.97%、8.27%和7.50%,猪场和样品PEDV核酸阳性率呈现逐年下降的趋势。s1基因相似性分析显示,获得的30株毒株全部为GⅡ基因型,其中17株毒株为GⅡa基因亚型、5株毒株为GⅡb亚型、8株毒株为GⅡc亚型,GⅡa基因亚型毒株为2018-2020年流行的主要毒株类型;30株毒株s1基因序列之间核苷酸相似性为93.0%~99.5%,氨基酸相似性为91.7%~100%,其中22株毒株与2017-2018年流行的GⅡ基因型毒株相比s1氨基酸序列表现出特征性插入和缺失。【结论】本研究结果为监测和分析中国PEDV的变异和演化提供了临床数据,为猪流行性腹泻防控和疫苗研制提供了参考。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) s1基因遗传变异分析

2株鸡传染性支气管炎病毒株的分离鉴定及其s1基因遗传进化分析

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福建农业学报 2022年第11期37卷 1388-1393页

作者：林裕胜刘维巍张龙江锦秀张靖鹏刘庆华胡奇林福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350013 福建农林大学动物科学学院福建福州350002

【目的】了解福建地区鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的流行及其s1基因变异情况。【方法】对2021年在福建地区鸡群中分离的2株病毒,通过鸡胚致病性试验、电子显微镜观察及RT-PCR方法进行鉴定。对2株分离株的s1... 详细信息

【目的】了解福建地区鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的流行及其s1基因变异情况。【方法】对2021年在福建地区鸡群中分离的2株病毒,通过鸡胚致病性试验、电子显微镜观察及RT-PCR方法进行鉴定。对2株分离株的s1基因进行克隆、测序并利用生物学软件进行分析。【结果】分离到的2株病毒均为IBV,分别命名为FJ-NP01和FJ-FZ01;FJ-NP01株和FJ-FZ01株的s1基因全长分别为1 629 nt和1 620 nt,编码543aa和540 aa。FJ-FZ01株的s1基因裂解位点为HRRRR,与基因型I分支所有参考毒株裂解位点一致;分离株FJNP01的s1基因裂解位点为HRRKR,与已报道的基因型ⅣIBV分离毒株的裂解位点不同,与基因型Ⅵ参考毒株TC07-2的裂解位点一致。FJ-NP01株和FJ-FZ01株之间的核苷酸和氨基酸同源性较低,分别为83.2%和79.6%;与中国使用的Mass型常规疫苗H120和H52核苷酸和氨基酸序列同源性仅为75.7%~76.3%和77.1%~83.5%。FJ-NP01株是由基因型Ⅳ毒株CK CH GD LZ12-4与基因型I毒株L-1 148在s1基因处发生重组而产生的新毒株,其核苷酸序列1 438~1 506 nt与推测的亲本毒株CK CH GD LZ12-4同源性达97%,其他s1基因核苷酸序列与推测的亲本毒株L-1148同源性达95.9%。【结论】以上结果表明福建地区IBV流行较为复杂,现有Mass型疫苗在福建省可能起不到良好的免疫保护作用。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定 s1基因序列分析

台湾型传染性支气管炎病毒重组株的分离鉴定及s1基因序列和血清型分析

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中国家禽 2022年第4期44卷 29-35页

作者：雍璐吕迪范文胜林丽婷唐金文张愉林子学韦平磨美兰广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

为了解传染性支气管炎病毒(IBV)在广西地区的遗传变异情况,研究对2020年广西某种鸡场疑似传染性支气管炎(IB)病鸡进行病原分离和鉴定,并对分离株进行s1基因序列同源性、系统进化树、糖基化位点、重组和血清型分析。结果显示:从发病鸡群... 详细信息

为了解传染性支气管炎病毒(IBV)在广西地区的遗传变异情况,研究对2020年广西某种鸡场疑似传染性支气管炎(IB)病鸡进行病原分离和鉴定,并对分离株进行s1基因序列同源性、系统进化树、糖基化位点、重组和血清型分析。结果显示:从发病鸡群中分离到一株IBV,该IBV分离株s1基因与常用疫苗株H120、4/91、LDT3-A以及QXL87的氨基酸相似性为76.0%~82.0%,且在氨基酸第17~20位之间缺失2个氨基酸,在第39~480位之间则存在11个氨基酸点突变;s蛋白裂解位点为RRFRR;分离株与参考株TW2575/98同属于Taiwan-Ⅰ亚型,与常用疫苗株亲源性较远。该分离株无潜在的O-糖基化位点,但含有18个潜在N-糖基化位点;与所有常用疫苗株相比,相同的N-糖基化位点只有1个,不同的有2个。重组分析表明该分离株来源于野毒株GX-NN130059(Taiwan-Ⅰ亚型,主亲本)与参考株sAIBK(CK/CH/LsC/99I型,次亲本)的重组。血清型分析表明分离株属于血清7型,与常用疫苗株及近年广西IBV流行株优势血清型均不相同。研究表明该株IBV来源于Taiwan-Ⅰ型病毒株重组,重组导致的变异以及血清型不同于常用疫苗株可能是造成该养殖场免疫失败的主要原因。研究首次从广西地方品种鸡分离到不同于常用疫苗株血清型的Taiwan-Ⅰ亚型IBV重组毒株,提示IB的防控仍然面临着严峻的挑战,有必要继续加强IBV的监控以及新型疫苗的研发。

关键词：鸡 IBV 分离鉴定基因型 s1基因重组

PEDV变异株的分离鉴定和s1基因序列分析

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中国兽医杂志 2022年第6期58卷 40-44页

作者：张江马晶晶高俊锋韩相敏吴汉宇李凯亮奉中花赖志上海农林职业技术学院上海松江201699 上海创宏生物科技有限公司上海松江201619

为了获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其s1基因进行序列分析,本试验从江苏2个猪场发病死亡仔猪的肠道组织分离病毒,接种至Vero细胞培养;通过实时荧光定量PCR方法鉴定PEDV、反转录PCR(RT-PCR)方法对PEDV s1基因进行扩增测序;并将10... 详细信息

为了获得猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株,并对其s1基因进行序列分析,本试验从江苏2个猪场发病死亡仔猪的肠道组织分离病毒,接种至Vero细胞培养;通过实时荧光定量PCR方法鉴定PEDV、反转录PCR(RT-PCR)方法对PEDV s1基因进行扩增测序;并将10^(7.0)TCID_(50)/mL的分离毒株口服接种5头哺乳仔猪(2 mL/头),观察临床症状,统计发病率和死亡率。结果显示,经鉴定获得的2株分离株均为PEDV,分别命名为DJCY株和DJYJ株。分离毒株能在Vero上产生典型细胞病变,传代至F10代时病毒滴度分别为10^(7.80)TCID_(50)/mL和10^(8.16)TCID_(50)/mL。RT-PCR鉴别诊断s1基因测序和分析显示,2株PEDV均为变异株。接种分离株的哺乳仔猪发病率为100%,接种DJCY株的死亡率为80%,接种DJYJ株的死亡率为100%。体外和体内试验证实,2株分离毒株均为PEDV变异株,且毒力较强。

关键词：猪流行性腹泻病毒分离鉴定 s1基因变异株

新疆1株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及s1基因序列分析

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畜牧与兽医 2022年第4期54卷 80-86页

作者：刘建华马彩红加尔肯胡月孙文程阿里木江·喀迪尔苏战强冉多良新疆农业大学动物医学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆沙雅县草原工作站新疆沙雅832200

为了解乌鲁木齐市鸡传染性支气管炎(IB)的流行特征,本研究利用鸡胚培养、RT-PCR、新城疫病毒(NDV)干扰及鸡胚半数感染量(EID_(50))测定等多种方法分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),将其命名为IBV/CK/CH(XJ)/01/2020。对其s1基因进... 详细信息

为了解乌鲁木齐市鸡传染性支气管炎(IB)的流行特征,本研究利用鸡胚培养、RT-PCR、新城疫病毒(NDV)干扰及鸡胚半数感染量(EID_(50))测定等多种方法分离到一株鸡传染性支气管炎病毒(IBV),将其命名为IBV/CK/CH(XJ)/01/2020。对其s1基因进行序列测定及比对分析发现,该分离株在鸡胚上连传5代出现侏儒胚现象,并且可以抑制NDV在鸡胚中的增殖,经计算其EID_(50)为10^(-4.58)/0.1 mL,为中等毒力毒株,攻毒组与正常组比较,雏鸡气管内有大量黏液且肺脏肿大,表现为呼吸型毒株特征,且其s蛋白裂解位点序列为HRRKR,与TC07-2、GX-NN0903等毒株形成一个独立的发育进化群,均属于TC07-2/GVI-1型IBV;与国内常用的H120、H52、M41等疫苗株的同源性仅为59%-65%。本研究为新疆地区IB的流行病学提供参考,也为当地IB的防控提供了理论依据。

关键词：传染性支气管炎病毒分离鉴定 s1基因

1株QX型鸡传染性支气管炎病毒的s1基因序列分析及致病性研究

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畜牧与兽医 2022年第4期54卷 61-66页

作者：穆晓惠陈启稳陈建涂敏孟婷江苏农牧科技职业学院江苏泰州225300

为跟踪鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及致病特性,2020年从安徽某蛋鸡场采集的发病鸡气管和肾脏组织中分离到1株病毒,对其进行生物学特性鉴定及致病性分析,确定该毒株为IBV,并命名为CK/CH/LAH/20-6。分离毒株可引起鸡胚发育受阻,呈现... 详细信息

为跟踪鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行及致病特性,2020年从安徽某蛋鸡场采集的发病鸡气管和肾脏组织中分离到1株病毒,对其进行生物学特性鉴定及致病性分析,确定该毒株为IBV,并命名为CK/CH/LAH/20-6。分离毒株可引起鸡胚发育受阻,呈现侏儒胚、蜷缩胚等特征性病变;s1基因检测及遗传演化分析表明,s1基因大小为1 620 bp,属于QX型毒株,与华南地区CK/CH/sHD/GM17-1分离株s1基因同源性高达99.9%;14日龄sPF雏鸡致病性试验结果表明,分离毒株可致雏鸡100%(20/20)发病,20%(4/20)死亡,同时可致气管和肾脏出现不同程度的病理损伤;排毒检测结果表明,攻毒鸡第3天气管及泄殖腔排毒检测率分别为95%(19/20)和85%(17/20),第21天排毒检测率仍达81.25%(13/16)和75%(12/16)。本研究为鸡传染性支气管炎的防控提供了新的流行病学数据,丰富了IBV的生物信息数据库。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒 s1基因序列分析致病性