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Preparation and Identification of Transmembrane tnf-α(TM-tnf-α) specific Monoclonal Antibody

Preparation and Identification of Transmembrane TNF-α(TM-TN...

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2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专业委员会学术会议

作者： Mingxia Yu Lin Niu Hangjun Ke Jing Wang Bingjiao Yin Xiaodan Jiang Feng Wei Zhuoya Li (Department of Immunology,Tongji Medical College,Huazhong University of science and Technology 13 Hangkong Rd,Wuhan,Hubei,430030,P.R.China

Objective:To prepare TM-tnf-αspecific monoclonal antibody,identify their specificity and ***:Using antigen anticipation software,the TM-tnf-αsegment composing of 20 amino acids residues as antigenic peptide was determined,conjugated with carrier protein and immunized to Balb/c *** technique was used to prepare monoclonal ***,flow cytometry,and westernblot were performed to identify their quality and ***:ELIsA revealed that the titer of ascites from these 4 McAbs was 1:*** amount of ascites from the above 4 clones were prepared and purified,with the concentration 13.1 mg/ml,17.6 mg/ml,14.3 mg/ml and 15.2 mg/ml,*** titer of the ascites obtained from the above 4 clones was1:12800.A color zone of 52kD heavy chain and 27 kD light chain was observed by *** modal number of hybridoma cell was 98,indicating that the cell clones we obtained were hybridoma *** and subgroup type of McAb identification showed that the 4 clones of TM-tnf McAbs were all IgG1 (κtype).Affinity constant of Mab was detected by noncompetitive enzyme immunoassay and the potency were 2.58×109 mol/L,1.00×109 mol/L, 2.15×109 mol/L and 2.79×109 mol/L,*** epitope addition assay indicated that the 4 clones of Mabs recognized the same ***,4 McAbs against TM-tnf-αwere successfully *** results of ELIsA revealed that 4 monoclonal antibodies could all specifically interact with the peptide,but not cross-react with s-tnf-αand other *** was confirmed by using flow cytometry that 4 monoclonal antibodies could all combine to TM-tnfαon cell surface and could discriminate human TM-tnf-αfrom mouse TM-tnf-α.Furthermore, these 4 monoclonal antibodies were found by Westernblot to prefer interaction with 26kd TM-tnf-αrather than 17kd s-tnf-α.Conclusion:4 of hTM-tnf-αspecific monoclonal antibodies were successfully prepared and shown no interference with the binding of tnf-αand tnf receptor,which

关键词： Monoclonal antibody TM-tnf-α s-tnf-α

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TM-tnf-α单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的研究

TM-TNF-α单克隆抗体体内外抗肿瘤活性的研究

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2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专业委员会学术会议

作者：喻明霞牛麟王晶尹丙娇姜小丹冯玮李卓娅华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系

目的:研究TM-tnf-α单克隆抗体体内外抗肿瘤的效应。方法:在体外实验中,用FACs检测乳腺癌细胞株MDA-MD-231的TM-tnf的表达;用经典ADCC和CDC方法检测C1单克隆抗体抗肿瘤效应。在体内实验中,采用常规的观测方法来检测C1 mA b对MDA-MD- 23... 详细信息

目的:研究TM-tnf-α单克隆抗体体内外抗肿瘤的效应。方法:在体外实验中,用FACs检测乳腺癌细胞株MDA-MD-231的TM-tnf的表达;用经典ADCC和CDC方法检测C1单克隆抗体抗肿瘤效应。在体内实验中,采用常规的观测方法来检测C1 mA b对MDA-MD- 231乳腺癌细胞体内致瘤的影响。结果:在体外实验中,MDA-MD-231高表达TM-tnf-α达84.77%,C1 mAb可介导巨噬细胞对MDA-MD-231乳腺癌细胞产生明显的ADCC效应(Ptnf的MDA-MD-231乳腺癌细胞具有明显杀伤,而对HUVEC细胞无影响。在体内实验中,C1 mAb可明显抑制肿瘤的生长(Ps mAb,小鼠均在其背部可见转移肿瘤,转移率分别为:57.1%和42.8%。而C1 mAb治疗则未见肿瘤转移。结论:TM-tnf单抗C1 mAb在体外介导表达TM-tnf肿瘤细胞的杀伤效应,在体内不仅能抑制肿瘤的生长,而且还可能抑制肿瘤的转移。

关键词：单克隆抗体 TM-tnf-α s-tnf-α ADCC CDC 抗肿瘤活性

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