检索结果-南通市图书馆

罗非鱼源无乳链球菌s-核糖基高半胱氨酸酶基因(luxs)的克隆及其推导蛋白的三维结构预测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

南方水产科学 2013年第1期9卷 43-47页

作者：马艳平李嘉彬郝乐刘振兴冯国清周结珊柯浩广东省农业科学院兽医研究所广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640

利用PCR技术对罗非鱼源无乳链球菌(streptococcus agalactiae)s-核糖基高半胱氨酸酶(luxs)基因全长DNA进行了扩增、克隆和序列测定,采用ExPAsy软件包预测了推导蛋白的特性,利用swiss-Model服务器建立了luxs三维结构,利用swiss-PDBviewe... 详细信息

利用PCR技术对罗非鱼源无乳链球菌(streptococcus agalactiae)s-核糖基高半胱氨酸酶(luxs)基因全长DNA进行了扩增、克隆和序列测定,采用ExPAsy软件包预测了推导蛋白的特性,利用swiss-Model服务器建立了luxs三维结构,利用swiss-PDBviewer软件进行了蛋白质三维结构的分析。预测结果显示,罗非鱼源无乳链球菌luxs推导蛋白包括保守的酶活性中心和锌结合位点,具有影响生物被膜形成、毒力因子调控等特性功能;经拉氏构象图(Ramachandran plot)分析,所构建的luxs的空间结构合理。

关键词：罗非鱼无乳链球菌 s-核糖基高半胱氨酸酶三维结构

一种s-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶活性的检测方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

高等学校化学学报 2012年第3期33卷 521-525页

作者：谷劲松谭晓军济南大学医学与生命科学学院济南250022 山东省医学科学院医学与生命科学学院济南250062

通过PCR扩增获得了s-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(sAHN)和s-核糖基高半胱氨酸酶(sRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于sAHN和sRHH重组酶建立了一种酶偶联分析s-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依... 详细信息

通过PCR扩增获得了s-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶(sAHN)和s-核糖基高半胱氨酸酶(sRHH)的基因序列,克隆入表达载体,转化宿主细胞,表达纯化得到带有组氨酸标签的重组蛋白,基于sAHN和sRHH重组酶建立了一种酶偶联分析s-腺苷甲硫氨酸(AdoMet)依赖的甲基转移酶活性的检测方法.甲基转移酶的共同产物s-腺苷-L-高半胱氨酸(AdoHcy)首先被sAHN酶水解生成腺嘌呤和s-核苷高半胱氨酸,后者进一步被sRHH酶裂解生成高半胱氨酸,最后高半胱氨酸与Ellman’s试剂反应生成5-硫代-2-硝基苯甲酸(TNB).实验结果表明,重组表达获取的2种酶蛋白均具有良好的催化活性,酶偶联反应生成的TNB与初始AdoHcy浓度呈现显著的线性正相关.该检测方法克服了s-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基转移酶的共同产物AdoHcy的反馈抑制,使甲基化反应进行完全,从而保证了对甲基转移酶活性准确有效的定量分析.

关键词： s-腺苷-L-高半胱氨酸 s-腺苷-L-高半胱氨酸核苷酶 s-核糖基高半胱氨酸酶 s-腺苷甲硫氨酸依赖甲基转移酶酶偶联分析

重组大肠杆菌sAHN和Luxs蛋白表达及群感效应分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

济南大学学报（自然科学版） 2016年第6期30卷 447-451页

作者：李超张玉贺盛谷劲松济南大学生物科学与技术学院山东济南250022 华侨大学生物医学学院福建厦门361021

为研究大肠杆菌细胞内s-腺苷高半胱氨酸核苷酶(s-adenosylhomocysteine nucleosidase,sAHN)与s-核糖基高半胱氨酸酶(s-ribosylhomocysteinase,Lux s)的活性对菌体群感效应的影响,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增sahn与lux s目的基因,构建p ET-28a-sAHN与p ET-28a-Lux s重组表达载体,转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达;以哈氏弧菌BB170为报告菌株,通过测定诱导前后的荧光强度检测信号分子AI-2相对量;通过96孔板生物膜实验,对构建菌株在诱导前后的生物膜生成量进行测定。结果表明:sAHN与Lux s酶蛋白在诱导后的大肠杆菌AI-2的表达量分别为诱导前的3.93、3.89倍,生物膜致密度分别为诱导前的1.8、1.6倍;大肠杆菌经诱导后,表达过量的sAHN酶蛋白对菌体的生长分裂及群感效应的影响更大。

关键词： s-腺苷高半胱氨酸核苷酶 s-核糖基高半胱氨酸酶重组表达群感效应生物膜

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

荧光定量PCR检测原料乳中粘质沙雷氏菌

中国奶牛 2019年第5期 48-51页

作者：姜鸿瑞韩紫音夏海磊王梦琦冀德君毛永江杨章平张慧敏扬州大学动物科学技术学院扬州225009

为建立检测原料乳中粘质沙雷氏菌(***)定性定量的检测方法,本研究利用s. marcescens s-核糖基高半胱氨酸酶(luxs)基因片段设计1对特异性引物,设计并建立了s. marcescens luxs基因的sYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法。结果显示,该... 详细信息

为建立检测原料乳中粘质沙雷氏菌(***)定性定量的检测方法,本研究利用s. marcescens s-核糖基高半胱氨酸酶(luxs)基因片段设计1对特异性引物,设计并建立了s. marcescens luxs基因的sYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的检测方法。结果显示,该方法可特异性检测粘质沙雷氏菌的存在,检测的最低限为6.9×10~2cfu/mL。与其他原料乳中常见的微生物均无交叉反应,比常规PCR的检测限(6.9×10~3cfu/mL)要广。对2015年11月~2016年1月长江下游地区8个牧场的原料乳进行检验,结果表明本检测方法具有较好的敏感性、特异性和实用性。

关键词：原料乳粘质沙雷氏菌荧光定量PCR s-核糖基高半胱氨酸酶