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猪德尔塔冠状病毒s基因序列分析与全长cDNA克隆的构建

猪德尔塔冠状病毒S基因序列分析与全长cDNA克隆的构建

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作者：王连顺中国农业科学院

学位级别：硕士

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来出现的一种猪的新型肠道冠状病毒。2012年首次于中国香港被报道,2014年美国俄亥俄州暴发了PDCoV疫情,随后该病在中国、加拿大、日本、韩国、泰国、墨西哥等多个国家和地区相... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年来出现的一种猪的新型肠道冠状病毒。2012年首次于中国香港被报道,2014年美国俄亥俄州暴发了PDCoV疫情,随后该病在中国、加拿大、日本、韩国、泰国、墨西哥等多个国家和地区相继被报道。PDCoV可感染不同日龄的猪,新生仔猪更为易感,其临床症状主要表现为腹泻、呕吐和脱水,严重时出现死亡,对于新生仔猪可造成30%-40%的致死率。但目前对于PDCoV的致病机制尚不十分清楚,并且缺乏有效的疫苗进行防控,给养猪业带来了巨大的经济损失。因此,尽快建立PDCoV反向遗传操作平台,对于后续深入研究病毒基因组的结构与功能、致病机制以及新型疫苗的研发等都十分必要。本研究中以实验室前期分离、保存的PDCoV流行毒株CH/XJYN/2016为亲本毒株,对不同代次的细胞毒s基因序列进行了测序及分析,明确了不同代次细胞毒s基因突变位点,为后续利用反向遗传技术研究PDCoV胰酶依赖性以及致病性减弱的分子机制提供了具体操作位点。进一步地,通过体外连接的构建策略,将全长基因组划分为5个片段,并将得到的5个目的片段通过T4连接酶进行体外连接,成功得到基因组全长cDNA克隆以及全长体外转录本。综上所述,本研究中成功获得了PDCoV CH/XJYN/2016毒株P10代细胞毒全长基因组序列以及不同代次细胞毒s基因序列信息,且进一步通过体外连接技术获得了PDCoV基因组全长cDNA克隆及体外转录本,为后续反向遗传学操作平台的建立及PDCoV致病机制的研究奠定了重要基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒 s基因分析 cDNA克隆

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