检索结果-南通市图书馆

畜牧与兽医 2022年第5期54卷 121-127页

作者：潘家良于有利刘梦婷单玉平汤芳任建鸾薛青红薛峰戴建君南京农业大学动物医学院江苏南京210095 连云港市畜牧兽医站江苏连云港222000 中国兽医药品监察所北京100081

为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌rv3403c、cFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PcR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-rv3403c-cFP10-ESAT6并转化至... 详细信息

为建立一种诊断牛结核病的间接ELISA方法,以牛分枝杆菌rv3403c、cFP10和ESAT6蛋白为靶标抗原,通过酶切连接和重叠延伸PcR方法,将3个抗原基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接,构建出pET-28a-rv3403c-cFP10-ESAT6并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并分析其反应原性。以纯化后的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示:通过SDSPAGE和Western blot鉴定分析,成功表达并纯化出包涵体蛋白rv3403c-cFP10-ESAT6,目的蛋白具有良好的反应原性;以融合蛋白为包被抗原建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与其他牛病原体阳性血清不发生交叉反应。临床结果显示,本方法与商品化试剂盒阳性符合率为66.7%,阴性符合率99.3%,总符合率为99.3%。研究表明,成功串联表达了具有良好反应原性的融合蛋白rv3403c-cFP10-ESAT6,并以此为包被抗原建立了一种牛分枝杆菌间接ELISA抗体检测方法,为检测和净化牛结核病提供了诊断工具。

关键词：牛分枝杆菌诊断抗原 rv3403c cFP10 ESAT6 融合表达间接ELISA

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