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微生物学报 2016年第12期56卷 1847-1855页

作者：赵东岳林莉莉温福利福建师范大学南方生物医学研究中心福建福州350117 南京军区福州总医院比较医学科福建福州350025

【目的】rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究对其是否具有黏附素特性进行了探索。【方法】对rv3194c进行原核表达,然后rv3194c蛋白分别与透明质酸、硫酸软骨素、Ι型胶原蛋白在不同温度(37、38、39、40°c)的缓冲液... 详细信息

【目的】rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究对其是否具有黏附素特性进行了探索。【方法】对rv3194c进行原核表达,然后rv3194c蛋白分别与透明质酸、硫酸软骨素、Ι型胶原蛋白在不同温度(37、38、39、40°c)的缓冲液中孵育过夜,然后用Western blot和ELISA分析其上清液中组分含量的变化。【结果】Western blot鉴定结果表明,His-rv3194c蛋白以可溶形式表达,蛋白质的分子质量大小为35 k Da。Western blot表明,39°c实验组的上清中His-rv3194c蛋白含量(***Pc);ELISA表明,39°c实验组的上清中透明质酸(HA)、硫酸软骨素(cS)、Ι型胶原蛋白(collagenΙ)的含量(***Pc)。【结论】首次证实了rv3194c蛋白具有黏附素特性,可成为研发新型抗结核药物的靶点蛋白。

关键词：结核分枝杆菌 rv3194c蛋白透明质酸、硫酸软骨素、Ι型胶原蛋白

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结核分枝杆菌rv3194c蛋白的亚细胞定位

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微生物学报 2019年第2期59卷 386-394页

作者：赵东岳王德民林丹枫福建师范大学生命科学学院福建省发育与神经生物学重点实验室福建福州350108

【目的】rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究探讨该蛋白的亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。【方法】从H37rv基因组中扩增出编码只含有PDZ结构域的trv3194c (rv3194c 1–234 aa)的基因片段,在3′端加T2A和... 详细信息

【目的】rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究探讨该蛋白的亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。【方法】从H37rv基因组中扩增出编码只含有PDZ结构域的trv3194c (rv3194c 1–234 aa)的基因片段,在3′端加T2A和EGFP序列,一并插入真核表达载体构建出pcDNA3.1-trv3194c-T2A-EGFP。将构建好的质粒瞬时转染L929细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光、流式细胞分选以及Western blotting检测融合蛋白的表达以及亚细胞定位。【结果】成功构建出真核表达载体pcDNA3.1-trv3194c-T2A-EGFP,瞬时转染L929细胞后融合蛋白trv3194c定位于线粒体膜上,且重组痘苗病毒vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。【结论】rv3194蛋白的PDZ结构域与线粒体外膜相关蛋白结合,为了解该蛋白在细胞内的致病机制提供重要线索。

关键词：结核分枝杆菌 rv3194c蛋白线粒体重组痘苗病毒重组质粒

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