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细胞与分子免疫学杂志 2022年第1期38卷 78-83页

作者：许涛李敏英王楚彤常先友钱中清李柏青汪洪涛蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠市第五人民医院感染科安徽蚌埠233030

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法通过PcR从结核分枝杆菌H37rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE1... 详细信息

目的克隆、表达和纯化结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15)蛋白,制备并鉴定PPE15蛋白兔多克隆抗体。方法通过PcR从结核分枝杆菌H37rv株基因组扩增PPE15基因,利用同源重组克隆技术构建原核表达组氨酸标签PPE15蛋白的pET28a-PPE15载体。将pET28a-PPE15转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导PPE15蛋白表达,通过SDS-PAGE鉴定PPE15蛋白表达。用亲和层析法Ni-NTA柱纯化PPE15蛋白,用复性纯化后的PPE15蛋白免疫新西兰大白兔,制备和纯化多克隆抗体。Western blot法鉴定PPE15蛋白与人血清和多克隆抗体结合特异性,间接ELISA检测多克隆抗体效价。结果成功构建pET28a-PPE15重组表达载体,PPE15蛋白主要以包涵体形式存在,纯化后在相对分子质量(M;)38 000位置处有单一条带。纯化后PPE15蛋白与结核病患者和多克隆抗体发生特异性反应,多克隆抗体效价达1∶1 300 480以上。结论成功表达和纯化重组PPE15蛋白,并制备出高效价兔源性多克隆抗体,为进一步研究PPE15蛋白的功能提供了实验基础。

关键词：结核分枝杆菌脯氨酸-脯氨酸-谷氨酸15(PPE15) rv1040c 多克隆抗体

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H37rv结核分枝杆菌蛋白脯氨酸-谷氨酸8(PE8)的表达及其兔多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第6期36卷 549-554页

作者：许涛张丽钱中清李柏青汪洪涛蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学实验中心安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室感染与免疫安徽省重点实验室安徽蚌埠233030

目的克隆rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L... 详细信息

目的克隆rv1040c结核分枝杆菌脯氨酸-谷氨酸8(PE8)基因、构建pET28a-PE8重组载体和表达纯化PE8蛋白,制备抗PE8多克隆抗体。方法利用重组克隆技术,将PE8基因克隆至原核表达载体pET28a,测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3),用0.5 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达、稀释复性与纯化。用纯化PE8蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot法进行效价及特异性鉴定。结果成功构建pET28a-PE8原核表达载体,ITPG诱导后PE8蛋白在大肠杆菌主要以包涵体的形式表达,复性后纯化PE8蛋白纯度达90%,纯化多克隆抗体效价为1∶430080以上,能与PE8蛋白发生特异性反应。结论大肠杆菌表达的PE8重组蛋白免疫新西兰大白兔获得高效价的多克隆抗体。

关键词：结核分枝杆菌(MTB)脯氨酸-谷氨酸8(PE8)蛋白 rv1040c 多克隆抗体

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两对混合抗原在ELISA诊断结核分枝杆菌感染中的效果鉴定

两对混合抗原在ELISA诊断结核分枝杆菌感染中的效果鉴定

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作者：张曙光华中农业大学

学位级别：硕士

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)引起的传染病,严重危害人类健康。近年来结核病和HIV的共感染以及多重耐药结核菌株的出现,使得结核病的防治越来越严峻。结核病的早期诊断对结核病的防治意义重大。所以,找到... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)引起的传染病,严重危害人类健康。近年来结核病和HIV的共感染以及多重耐药结核菌株的出现,使得结核病的防治越来越严峻。结核病的早期诊断对结核病的防治意义重大。所以,找到能够特异性诊断结核病的抗原至关重要,但是单独抗原的效果往往不理想。因此,筛选混合抗原成为提升结核病诊断效果的很好选择。我们进行了ELISA实验,筛选能够提高诊断效果的混合抗原,得到了以下结果：(1)筛选到了混合抗原rv1040c+rv2309A和rv2309A+rv3872。本研究采集了86份血清(结核病人71份,健康人15份),分别用单独抗原rv1040c、rv2309A和rv3872以及混合抗原rv1040c+rv2309A和rv2309A+rv3872进行ELISA检测,结果表明两对混合抗原在灵敏度、特异性和精确性方面都优于单独抗原(rv1040c+rv2309A灵敏度80.28%,特异性100%,精确性83.72%;rv2309A+rv3872灵敏度74.65%,特异性100%,精确性79.07%)。(2)通过与商业试剂盒TB-DOT和TB-cHEcK-1进行对比,我们发现两对混合抗原在灵敏度、特异性和精确性方面都优于TB-DOT(灵敏度61.97%,特异性73.33%,精确性63.95%),在灵敏度和精确性方面都优于TB-cHEcK-1(灵敏度45.07%,精确性54.65%)。综上所述,本研究发现的两对混合抗原rv1040c+rv2309A和rv2309A+rv3872具有更好的结核病诊断能力,在诊断结核病方面有很好的应用前景。

关键词：结核分枝杆菌 ELISA 混合抗原 rv1040c rv2309A rv3872

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