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结核分枝杆菌rv0315重组蛋白ELISPOT辅助诊断活动性肺结核的应用价值

上海交通大学学报：医学版 2013年第7期33卷 970-974页

作者：周业成陈翠翠叶娟赵俊伟玄松花杨志荣张舒林四川大学生命科学学院成都610065 郑州大学第一附属医院郑州450001 河南中医学院分子生物学教研室郑州450008 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

目的用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评价结核分枝杆菌重组蛋白rv0315在活动性肺结核病诊断中的应用价值。方法选取初治肺结核病患者25例和健康体检者28名分别作为结核组和对照组,应用rv0315蛋白作为抗原对受试者外周血单核细胞进行ELISPO... 详细信息

目的用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)评价结核分枝杆菌重组蛋白rv0315在活动性肺结核病诊断中的应用价值。方法选取初治肺结核病患者25例和健康体检者28名分别作为结核组和对照组,应用rv0315蛋白作为抗原对受试者外周血单核细胞进行ELISPOT检测斑点形成细胞(SFCs)的数量,判断结核分枝杆菌感染情况,并与结核早期分泌靶向抗原(ESAT6)和培养滤液蛋白10(CFP10)抗原的检测结果进行比较。结果以rv0315、EAST6和CFP10作为抗原,用ELISPOT方法检测结核分枝杆菌感染的敏感度分别为84.0%(21/25)、80.0%(20/25)和92.0%(23/25),特异度分别为89.2%(25/28)、89.2%(25/28)和92.8%(26/28),其中rv0315的敏感度高于EAST6但低于CFP10。结论应用重组蛋白rv0315作为抗原建立的ELISPOT方法具有应用于活动性肺结核病辅助诊断的潜在价值。

关键词：结核分枝杆菌 rv0315 酶联免疫斑点技术细胞免疫

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复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315在活动性肺结核辅助诊断中的价值

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郑州大学学报（医学版） 2014年第2期49卷 211-214页

作者：陈翠翠叶娟赵俊伟张舒林孙战强汤兵祥郑州大学第一附属医院呼吸内科郑州450052 河南中医学院医学免疫学重点实验室郑州450008 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025 复旦大学生命科学学院上海200433 河南省胸科医院呼吸内科郑州450008

目的:评价结核分枝杆菌复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315在活动性肺结核诊断中的应用价值。方法:选取初治肺结核病患者70例和健康体检者34例作为结核组和健康对照组,分离PBMCs,分别用复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315、ESAT-6肽段库和CFP-10... 详细信息

目的:评价结核分枝杆菌复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315在活动性肺结核诊断中的应用价值。方法:选取初治肺结核病患者70例和健康体检者34例作为结核组和健康对照组,分离PBMCs,分别用复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315、ESAT-6肽段库和CFP-10肽段库作为抗原进行ELISPOT实验,检测斑点形成细胞数。结果:复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315、ESAT-6肽段库和CFP-10肽段库检测结核分枝杆菌感染的阳性率依次为85.7%(60/70)、77.1%(54/70)、72.9%(51/70),特异性依次为82.4%(28/34)、85.3%(29/34)、88.2%(30/34)。结论:复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315作为抗原建立的ELISPOT检测方法在活动性肺结核的辅助诊断中有较高的应用价值。

关键词：肺结核结核分枝杆菌 ESAT-6 CFP-10 rv0315

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结核分枝杆菌特异性抗原rv0315和rv2971的克隆、表达及初步应用研究

结核分枝杆菌特异性抗原Rv0315和Rv2971的克隆、表达及初步应用研...

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作者：陈翠翠郑州大学

学位级别：硕士

背景由于艾滋病的蔓延、多种耐药结核菌的增多、移民,不少国家和地区对结核病控制的不重视等诸多原因，无论在发达国家还是在发展中国家，全球结核病形势正在急剧恶化，结核病患者人数一直不断增加。而能够快速、准确地诊断结核分枝杆... 详细信息

背景由于艾滋病的蔓延、多种耐药结核菌的增多、移民,不少国家和地区对结核病控制的不重视等诸多原因，无论在发达国家还是在发展中国家，全球结核病形势正在急剧恶化，结核病患者人数一直不断增加。而能够快速、准确地诊断结核分枝杆菌感染，尤其是对菌阴肺结核和潜伏性感染的诊断，对结核病的控制工作具有非常重要的意义，诊断水平的提高也直接影响了对结核病的防控能力。由于目前临床上常用的检测方法存在涂片检出率低、培养周期长等诸多局限性，寻找新的快速准确的结核病诊断方法已成为当前国内外研究的热点。目的获得可以用于结核病诊断的新型标志物，克隆表达得到结核分枝杆菌特异性抗原rv0315、rv2971，评价单一抗原和复合抗原在体液免疫和细胞免疫诊断价值。方法分析结核分枝杆菌全基因序列，设计引物，通过分子克隆方法获得重组质粒pET21a-rv0315、pET32a-rv2971，转化后进行表达与纯化，得到重组蛋白rv0315、rv2971，采用Triton X-114相分离法去除内毒素，建立合适细胞和抗原浓度的ELISPOT方法，进行抗原组合，ELISA法评价rv0315、rv2971、ESAT-6、CFP-10、复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315在体液免疫诊断中的敏感性和特异性。分离外周血单个核细胞，用ELISPOT法评价rv2971、复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315在细胞免疫诊断中的价值。结果1．成功构建了重组质粒pET21a-rv0315、pET32a-rv2971，转化后进行表达纯化得到重组蛋白rv0315、rv2971，内毒素含量低于5EU/mg。***0315、复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315、ESAT-6、CFP-10、rv2971的ELISA法检测的敏感性依次为20.8%（10/48）、37.5%（18/48）、31.3%（15/48）、25%（12/48）、4.2%（2/48），特异性依次为93.8%（30/32）、87.5%（28/32）、87.5%（28/32）、90.6%（29/32）、90.6%（29/32）。***法评价rv0315、rv2971、EAST6肽段库和CFP10肽段库检测结核分枝杆菌感染的阳性率依次为58.3%（14/24）、16.7%（4/24）、75.0%（18/24）、66.7%（17/24），特异性依次为92.9%（13/14）、85.7%（12/14）、92.9%（13/14）、92.9%（13/14）;***0315与ESAT-6总体阳性率相比，校正χ2=0.900，P=0.344;与CFP-10总体阳性率相比，χ2=0.125，P=0.727。rv2971与ESAT-6总体阳性率相比，校正χ2=10.564，P=0.001;与CFP-10总体阳性率相比，χ2=6.667，P=0.007。复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315、EAST6肽段库和CFP10肽段库的敏感度依次为85.7%（60/70）、77.1%（54/70）、72.9%（51/70），特异性依次为82.4%（28/34）、85.3%（29/34）、88.2%（30/34）。复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315与ESAT-6总体阳性率相比，χ2=4.167，P=0.031;与CFP-10总体阳性率相比，χ2=7.111，P=0.004。复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315、EAST6肽段库和CFP10肽段库在菌阳肺结核组的阳性率依次为94.0%（47/50）、90.0%（45/50）、78.0%（39/50），在菌阴肺结核组的阳性率依次为65%（13/20）、45.0%（9/20）、60.0%（12/20）。结论1．采用Triton X-114相分离法能去除原核表达所产生的内毒素，内毒素含量符合免疫实验应用要求。2．结核分枝杆菌特异性抗原rv0315有望成为结核病诊断的候选抗原;3．结核分枝杆菌特异性抗原rv2971不具有较高的或潜在的免疫原性，不适用于作为结核病诊断的免疫学指标。4．复合抗原ESAT-6/CFP-10/rv0315有成为结核感染辅助诊断的潜力，值得进一步深入研究。

关键词：结核分枝杆菌 rv0315 rv2971 ESAT-6 CFP-10 肺结核体液免疫细胞免疫

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结核分枝杆菌蛋白rv0315克隆表达及其抗原性研究

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苏州医学 2012年第2期35卷 9-12页

作者：陈苏芳周业成赵静赵俊伟吴兴福孙战强玄松花张舒林苏州市第五人民医院江苏苏州215007 四川大学生命科学学院四川成都610065 上海交通大学基础医学院上海200025 河南中医学院河南郑州450008

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组rv0315蛋白，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平，并与结核分泌蛋白ESAT-... 详细信息

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组rv0315蛋白，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平，并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白rv0315，其在***21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达，分子量（30．3kDa）与预期相符，ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94．0％（45／48）和35．7％（30／84）。结论重组蛋白rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。

关键词：结核分枝杆菌 rv0315 克隆表达血清学诊断

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结核分枝杆菌蛋白rv0315的克隆表达及其抗原性研究

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中国热带医学 2012年第10期12卷 1172-1175页

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的... 详细信息

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白rv0315,其在*** BL21plysS(DE3)中主要以可溶性形式表达,分子量(30.3kDa)与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%(45/48)和35.7%(30/84)。结论重组蛋白rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。

关键词：结核分枝杆菌 rv0315 克隆表达血清学诊断

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