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华西口腔医学杂志 2016年第2期34卷 125-129页

作者：冯桂娟郑科宋冬惠吴森斌祝颂松胡静南通大学附属医院口腔科南通226001 口腔疾病研究国家重点实验室华西口腔医院正颌与关节外科(四川大学) 成都610041

目的探讨Runt相关基因2(Runx2)修饰的自体骨髓间充质干细胞(MSCs)促进兔下颌牵张成骨新骨形成的可行性。方法将48只成年雄性新西兰大白兔随机分为3组:A组为Runx2重组质粒组,B组为不含Runx2重组质粒组,C组为生理盐水对照组。建立兔下颌... 详细信息

目的探讨Runt相关基因2(Runx2)修饰的自体骨髓间充质干细胞(MSCs)促进兔下颌牵张成骨新骨形成的可行性。方法将48只成年雄性新西兰大白兔随机分为3组:A组为Runx2重组质粒组,B组为不含Runx2重组质粒组,C组为生理盐水对照组。建立兔下颌牵张成骨模型;于牵张的第5天,A组兔牵张间隙内注射转染重组质粒adv-h Runx2-gfp的自体骨髓MSCs;B组注射转染adv-gfp质粒的自体骨髓MSCs;C组注射同体积生理盐水。在牵张结束后第8周处死所有动物,进行大体、影像学、组织学观察和三点弯曲测试。结果 CT平扫及组织学结果表明,A组牵张间隙内新骨形成和骨痂密度均明显高于B、C组;双能X线及三点弯曲测试表明,A组牵张间隙内新生骨组织密度、新生骨矿物质含量及最大载荷均高于B、C组(P2体外基因治疗可有效地促进牵张成骨新骨形成,从而缩短固定期,为临床颅颌面骨缺损的重建提供一个极具价值的修复策略。

关键词： Runt相关基因2 间充质干细胞下颌骨牵张成骨

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环状RNA CDR1as促进小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化和成血管相关基因表达

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口腔疾病防治 2022年第6期30卷 390-397页

作者：杨玮哲韩祥祯郑美洁周琦琪何惠宇新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔修复科新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区口腔医学研究所新疆维吾尔自治区乌鲁木齐830011

目的探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1的反义转录物(antisense to the cerebellar degeneration-related protein 1 transcript,CDR1as)在Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中过表达与低表达后对其成骨和成血管相关基因的影响。方法体外培养及鉴定BMSCs,将含过表达与沉默circRNA CDR1as基因的慢病毒(lentiviruses,LV)载体及对照组慢病毒分别转染至小鼠BMSCs并筛选稳定的细胞株,分为circRNA CDR1as过表达组、过表达对照组、circRNA CDR1as低表达组和低表达对照组。各组成骨诱导14、21 d后分别进行茜素红染色和碱性磷酸酶染色;qRT-PCR检测目的基因circRNA CDR1as、成骨分化特异标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相关基因2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥素(osteopontin,OPN)、锌指结构转录因子(osterix,OSX)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen-I,COL-1),以及成血管特异标志物血管内皮生长因子(vascular endothelial grown factor,VEGF)、血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)的mRNA表达水平。结果茜素红和ALP染色均显示:过表达实验组钙沉淀和ALP染色区域多于过表达对照组;而低表达实验组钙沉淀和ALP染色区域少于低表达对照组,随着成骨诱导天数的增加,各组的钙沉淀和ALP染色面积也增大。qRT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中circRNA CDR1as、ALP、RUNX2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的mRNA表达水平显著升高(P基因可促进BMSCs的成骨分化及血管生成的能力;低表达circRNA CDR1as基因可抑制BMSCs的成骨分化及血管生成的能力。

关键词：骨环状RNA CDR1as 基因沉默小鼠骨髓间充质干细胞 Runt相关基因2 Ⅰ型胶原蛋白血管内皮生长因子成骨分化骨组织工程

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环状RNA CDR1as对小鼠骨髓间充质干细胞成骨及成血管性能的影响研究

环状RNA CDR1as对小鼠骨髓间充质干细胞成骨及成血管性能的影响研...

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作者：杨玮哲新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:通过使用过表达与沉默后的环状RNA小脑变性相关蛋白1的反义转录物(circ RNA CDR1as)对Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行干预,分析成骨分化和血管化相关因子的表达变化,探讨其在体外实验中成骨及成血管影响机制。方法:Balb/C... 详细信息

目的:通过使用过表达与沉默后的环状RNA小脑变性相关蛋白1的反义转录物(circ RNA CDR1as)对Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行干预,分析成骨分化和血管化相关因子的表达变化,探讨其在体外实验中成骨及成血管影响机制。方法:Balb/C小鼠体外获取BMSCs,验证BMSCs表型抗原及多向分化能力,预实验确定慢病毒(LV)转染BMSCs最佳滴度,分别将适宜滴度的过表达与低表达的circ RNA CDR1as慢病毒(LV)转染至小鼠骨髓间充质干细胞并筛选稳定的细胞株。实验分组:将细胞分为circ RNA CDR1as过表达组、过表达对照组、circ RNA CDR1as低表达组和低表达对照组。通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测慢病毒转染效率;CCK-8法检验慢病毒感染BMSCs后的细胞增殖活性。4组细胞成骨诱导14d、21d,分别进行茜素红和碱性磷酸酶染色;RT-PCR检测目的基因circ RNA CDR1as、成骨分化及成血管特异标志物ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF、Ang-1的m RNA表达水平。结果:(1)流式细胞术鉴定小鼠BMSCs表面标原CD29阳性表达(93.1%),CD31阳性表达(2.4%);(2)流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测显示,慢病毒转染后绿色荧光蛋白(EGFP)表达无明显差异;(3)CCK-8结果显示,过表达对照组细胞增殖活性小于circ RNA CDR1as过表达组,而circ RNA CDR1as低表达实验组细胞增殖活性小于其对照组;(4)茜素红碱性和磷酸酶染色显示,过表达实验组钙盐沉积区域大于过表达对照组与低表达实验组,随着成骨诱导天数的增加,各组钙盐沉积区域也增大。(5)RT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中circ RNA CDR1as、ALP、Runx2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m RNA表达水平显著升高(P基因可调控BMSCs的成骨分化及血管化的能力。

关键词：环状RNA CDR1as 小鼠骨髓间充质干细胞 Runt相关基因2 血管内皮生长因子成骨分化

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环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控转化生长因子β1对人根尖牙乳头干细胞分化的作用

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口腔疾病防治 2018年第7期26卷 428-433页

作者：顾雪凝权家苗郭雨晴李颂安徽医科大学口腔医学院.附属口腔医院牙体牙髓科安徽省口腔疾病研究中心实验室安徽合肥230032

目的观察过表达第二信使环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP-responsive element-binding protein,CREB)调控转化生长因子β1(transforming growth factor-beta,TGF-β1)对人根尖牙乳头干细胞(human stem cells from the apical papilla,hSCAPs)分化的作用。方法通过采用酶消化法培养hSCAPs,实验分成4组:(1)Control组,即正常矿化诱导液(α-MEM、10%FBS、10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μg/ml维生素C、10 nmol/L地塞米松);(2)TGF-β1组,加入正常矿化诱导液后,加入5μg/m L TGF-β1;(3)TGF-β1+LV-empty组,除正常矿化诱导液外,加入转染空病毒载体和TGF-β1,TGF-β1浓度为5μg/m L;(4)TGF-β1+ov-CREB组,除正常矿化诱导液外,加入转染过表达CREB病毒载体和TGF-β1,TGF-β1浓度为5μg/m L。矿化培养2周后,通过茜素红染色观察各组矿化结节形成情况,实时荧光定量PCR法检测各组矿化相关基因,Runt相关基因2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)m RNA的表达。结果 TGF-β1作用SCAPs后,与Control组(1.12±0.11)相比,抑制矿化结节的形成(0.67±0.12)(P基因RUNX2(0.60±0.03)、DSPP(0.43±0.12)、ALP(0.69±0.05)的m RNA表达(P<0.05)。过表达CREB后逆转TGF-β1对SCAPs分化的抑制作用,与TGF-β1组相比,促进矿化结节的形成(1.27±0.10)(P<0.01)并上调RUNX2(1.33±0.07)、DSPP(1.32±0.11)和ALP(1.26±0.03)m RNA的表达(P<0.05)。结论过表达转录因子CREB能够逆转TGF-β1对hSCAPs分化的抑制作用,促进其分化。

关键词：环磷酸腺苷反应元件结合蛋白转化生长因子β1 根尖牙乳头干细胞成牙本质细胞分化矿化 Runt相关基因2

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