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SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/rock1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

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华中科技大学学报（医学版） 2024年第2期53卷 161-167页

作者：向威吕磊郑福鑫章传华袁敬东武汉市第一医院泌尿外科武汉430022

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://***/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/rock1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P1)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P1);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P1)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P1)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合rock1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调rock1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中rock1 mRNA与蛋白的表达水平(P1);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/rock1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

关键词：肾透明细胞癌 SLC9A3-AS1 miR-148a-3p rock1

慢性心力衰竭合并心房颤动患者血清rock1、HDAC3的表达及其临床意义

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现代生物医学进展 2024年第10期24卷 1878-1882页

作者：何康丽王丽岳张驰阮国然朱学秀武汉科技大学附属普仁医院(武汉市普仁医院)心血管内科湖北武汉430081

目的:探讨慢性心力衰竭(CHF)合并心房颤动(AF)患者血清Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(rock1)、组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)的表达及其临床意义。方法:选取2021年1月~2022年9月武汉科技大学附属普仁医院收治的312例CHF患者,根据是否合并AF分... 详细信息

目的:探讨慢性心力衰竭(CHF)合并心房颤动(AF)患者血清Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(rock1)、组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)的表达及其临床意义。方法:选取2021年1月~2022年9月武汉科技大学附属普仁医院收治的312例CHF患者,根据是否合并AF分为AF组115例和非AF组197例,根据预后的不同将CHF合并AF患者分为预后不良组和预后良好组。比较AF组与非AF组血清rock1、HDAC3水平和心功能指标[左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心房内径(LAD)]。通过Pearson相关性分析CHF合并AF患者血清rock1、HDAC3水平与心功能指标的相关性,多因素Logistic回归分析CHF合并AF患者预后不良的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清rock1、HDAC3水平对CHF合并AF患者预后不良的预测价值。结果:与非AF组比较,AF组血清rock1、HDAC3水平和LVEDD、LAD升高,LVEF降低(Prock1、HDAC3水平与LVEF呈负相关,与LVEDD、LAD呈正相关(P115例AF患者预后不良发生率为26.96%。多因素Logistic回归分析显示,纽约心脏协会心功能分级≥Ⅲ级和N末端前体B型钠尿肽(NT-proBNP)、rock1、HDAC3升高为CHF合并AF患者预后不良的独立危险因素(Prock1、HDAC3水平联合预测CHF合并AF患者预后不良的曲线下面积为0.897,大于单一指标预测。结论:CHF合并AF患者血清rock1、HDAC3表达升高,与心功能和预后密切相关,血清rock1、HDAC3联合预测CHF合并AF患者预后不良的价值较高。

关键词：慢性心力衰竭心房颤动 rock1 HDAC3 预后

rock1 Inhibitor Abrogates Chronic Rejection in Rat Cardiac Model System

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Open Journal of Organ Transplant Surgery 2012年第4期2卷 46-51页

作者： Li Zhang Malgorzata Kloc Neelam Tejpal Junping You Andrea M. Cordero-Reyes Keith A. Youker Rafik M. Ghobrial Department of Surgery The Methodist Hospital The Methodist DeBakey Heart & Vascular Center Houston TX USA

Background: We have shown previously that the abrogation of acute and chronic rejection of rat cardiac allografts occurs through the down-regulation of RhoA pathway and involves the changes in RhoA kinase (rock)-dependent actin cytoskeleton and T cell motility. Here we studied the ability of the Y-27632, a highly selective inhibitor of Rho-associated protein kinase p160rock (rock1), to abrogate chronic rejection of the allograft and influence T cell infiltration. Methods: Heterotopic cardiac transplants were performed between donor Wistar Furth (WF) and ACI recipient rats. Controls received sub-therapeutic dose of cyclosporine (CsA, 10 mg/kg) for 3 days or 7 days therapeutic dose of cyclosporine. The experimental groups of ACI recipient received one preoperative dose of the Y-27632 inhibitor (2 mg/kg, gavage feed) in conjunction with the sub-therapeutic dose of CsA for 3 days or inhibitor alone for 7 days. The cardiac grafts were harvested at 100 days of post-transplantation for histological and immunohistochemical assessment of chronic rejection, vascular sclerosis, and infiltration by different T cell subtypes. Results: Cardiac allografts from recipients exposed to Y-27632 inhibitor in conjunction with sub-therapeutic dose of CsA showed drastically reduced vascular sclerosis, minimal myocardial total cellular infiltration, and were selectively infiltrated with Foxp3+ T regulatory (Treg) cells. Conclusions: Our novel finding that a single dose of the rock1 inhibitor Y-27632 attenuates chronic rejection in rat cardiac model system by promoting development of Treg cells warrants its potential as a novel therapeutic agent specific for the inhibition of chronic rejection.

关键词： Chronic Rejection Transplantation rock1 RhoA T Cell

ShRNA对大鼠心肌细胞rock1和rock2表达的沉默作用

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第50期15卷 9441-9444页

作者：丁浩李菊香孙国芳洪葵程晓曙南昌大学第二附属医院心内科江西省南昌市330006

背景:已有研究发现,rock1和rock2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调rock1和rock2表达能抑制心肌细胞凋亡。目的:验证rock1-shRNA和rock2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内rock1和rock2基因的表达,并筛选沉默效率最高的shRNA。方法:... 详细信息

背景:已有研究发现,rock1和rock2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调rock1和rock2表达能抑制心肌细胞凋亡。目的:验证rock1-shRNA和rock2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内rock1和rock2基因的表达,并筛选沉默效率最高的shRNA。方法:以rock1和rock2为靶基因,分别构建了3个特异性shRNA重组质粒,转染这些shRNA后观察其对SD大鼠心肌细胞中rock1和rock2的沉默作用,并筛选出沉默效率最佳的shRNA。结果与结论:WesternBlot结果显示,与对照组相比,3个重组质粒rock1-shRNA和rock2-shRNA的转染均能明显降低SD大鼠心肌细胞中rock1和rock2的表达(Prock1-shRNA1和rock2-shRNA2的沉默效率最高(Prock1-shRNA和rock2-shRNA转染能有效沉默大鼠心肌细胞内rock1和rock2基因的表达,并筛选出了沉默效率最高的shRNA。

关键词：短发夹RNA rock1 rock2 大鼠心肌细胞转染

rock1在地塞米松抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用

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第三军医大学学报 2012年第18期34卷 1814-1817页

作者：刘冬熊仁平陈星云李平宁亚蕾彭艳赵艳杨楠周元国第三军医大学大坪医院野战外科研究所分子生物学中心创伤烧伤及复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探讨rock1在地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用。方法检测地塞米松和法舒地尔(Fasudil,Fas)抑制佛波脂(PMA)诱导的中性粒细胞释放超氧化物阴离子(O2-)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)以及U... 详细信息

目的探讨rock1在地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用。方法检测地塞米松和法舒地尔(Fasudil,Fas)抑制佛波脂(PMA)诱导的中性粒细胞释放超氧化物阴离子(O2-)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)以及U937单核细胞黏附的程度,并检测rock1和RhoA的表达和活性改变。此外观察糖皮质激素受体拮抗剂——米非司酮(mifepristone,M)和蛋白质合成抑制剂——放线菌酮(cycloheximide,C)对地塞米松这些作用的影响。实验分组:对照组、PMA组、PMA+Dex组、PMA+Dex+M组、PMA+Dex+C组和PMA+Fas组。结果地塞米松可以显著抑制中性粒细胞释放O2-和MPO[(1.25±0.10)vs(1.95±0.10);(1.07±0.06)vs(1.75±0.08),P0.05)。地塞米松和法舒地尔均可抑制U937细胞黏附[(0.09±0.01)vs(0.08±0.01)vs(0.28±0.06),P0.05)。结论地塞米松以非rock1依赖方式抑制中性粒细胞释放;以rock1依赖方式通过非基因组效应抑制U937单核细胞的黏附。

关键词：地塞米松非基因组效应 rock1

草鱼rock1基因全长克隆、生物信息学分析及组织差异表达

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基因组学与应用生物学 2018年第5期37卷 1868-1878页

作者：潘雯倩汪军鹏甘甜胡静魏静土志涵冷向军李小勤上海海洋大学水产与生命学院上海201306 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海市水产养殖工程技术研究中心上海201306 上海高校知识服务平台、水产动物遗传育种中心上海市协同创新中心上海201306

rock1是rock（即Rho激酶）家族的成员之一,rock家族是小G蛋白Rho的下游效应因子,被Rho蛋白激活后rock1作用于下游效应分子,对其介导的信号通路进行调节,参与细胞增殖、迁移、形态改变等。rock1与组织纤维化、癌症、心血管等疾病的发生... 详细信息

rock1是rock（即Rho激酶）家族的成员之一,rock家族是小G蛋白Rho的下游效应因子,被Rho蛋白激活后rock1作用于下游效应分子,对其介导的信号通路进行调节,参与细胞增殖、迁移、形态改变等。rock1与组织纤维化、癌症、心血管等疾病的发生密切相关。本实验采用c DNA末端快速扩增法克隆草鱼rock1基因全长序列,预测并分析其编码的蛋白,采用实时荧光定量PCR法检测草鱼rock1基因的组织差异表达。实验首次克隆获得了草鱼rock1基因全序列,长4 604 bp,编码1 361个氨基酸;草鱼rock1氨基酸序列与金线鲃、斑马鱼、鲤鱼rock1的氨基酸序列同源性分别达95%、94%、94%,同源性较高;草鱼rock1蛋白分子量158 035.73,理论等电点5.69,为亲水性非分泌蛋白,无信号肽;其二级结构包括α-螺旋（α-helix）、β-重叠（β-strand）和环（loop）。组织差异表达显示草鱼rock1基因在各组织中均有表达,其中在脑和血液中表达量最高（p〈0.05）,其次为鳃、心脏、肾脏、脾脏和前肠组织,肌肉和肝脏组织表达量较低,皮肤组织表达量最低,所得结果将为后续研究草鱼组织纤维化奠定基础。

关键词： rock1 草鱼 RACE 基因克隆组织差异表达

电针刺激对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质rock1与rock2表达的影响

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第二军医大学学报 2014年第3期35卷 329-332页

作者：李凤吕凯龚标代恩泽龙飞汪莹曾志华重庆医科大学中医药学院中医药实验室重庆401331

目的观察电针刺激对局灶性脑梗死大鼠神经功能及梗死灶周围皮质rock1和rock2表达的影响,初步探讨其对大脑缺血组织的保护机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针穴位组,每组10只。用改良Longa法制作大脑中... 详细信息

目的观察电针刺激对局灶性脑梗死大鼠神经功能及梗死灶周围皮质rock1和rock2表达的影响,初步探讨其对大脑缺血组织的保护机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针穴位组,每组10只。用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在大鼠麻醉苏醒后90min对电针穴位组大鼠进行电针刺激,每天1次,连续14d。分别在术后1、3、7、14d时对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS)。术后14d时,用免疫组化和蛋白质印迹法检测缺血侧大脑皮质中rock1、rock2蛋白的表达情况。结果正常组和假手术组未出现神经功能缺损表现。术后7、14d,电针穴位组mNSS评分较模型组下降(Prock1和rock2蛋白表达上调,电针穴位组rock1和rock2蛋白表达较模型组减少(Prock1和rock2蛋白表达有关。

关键词：脑梗死电针 rock1 rock2

苦参碱对p-eNOS/eNOS和RhoA/rock1的调控及对异丙肾上腺素致大鼠慢性心力衰竭的保护作用

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中国医院药学杂志 2014年第8期34卷 595-599页

作者：杨文成付岩魏世杰戴贵东张文萍郑婕高华党宏万宁夏医科大学药学院宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院药剂科宁夏银川750004 凯里学院化学与材料工程学院贵州凯里556011

目的:研究苦参碱对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠慢性心力衰竭的保护作用及其对p-eNOS/eNOS和RhoA/rock1的调控作用。方法:SD雄性大鼠皮下注射ISO(5 mg·kg-1·d-1)共7 d,建立慢性心力衰竭模型。苦参碱(50,100,200 mg·kg-1)于ISO注射前1 h... 详细信息

目的:研究苦参碱对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠慢性心力衰竭的保护作用及其对p-eNOS/eNOS和RhoA/rock1的调控作用。方法:SD雄性大鼠皮下注射ISO(5 mg·kg-1·d-1)共7 d,建立慢性心力衰竭模型。苦参碱(50,100,200 mg·kg-1)于ISO注射前1 h灌胃给药,共7d。观察不同剂量苦参碱对ISO致心肌组织病理损伤的抑制作用,以及其对左心室p-eNOS、eNOS、RhoA和rock1蛋白表达的影响。结果:苦参碱(100,200 mg·kg-1)可减轻ISO致大鼠慢性心力衰竭性细胞坏死、炎细胞浸润及心肌组织间质水肿程度等心肌病理学结构的异常变化,增加左心室p-eNOS(Ser1177)和eNOS蛋白表达,并降低RhoA和rock1蛋白表达。苦参碱(50 mg·kg-1)对ISO致慢性心力衰竭大鼠的心肌p-eNOS(Ser1177)/eNOS和RhoA蛋白表达无显著影响;单用苦参碱(200 mg·kg-1)对正常大鼠心肌结构及左心室p-eNOS(Ser1177)/eNOS和RhoA/rock1蛋白表达无影响。结论:苦参碱对ISO致大鼠慢性心力衰竭具有保护作用,其机制与调控p-eNOS/eNOS和RhoA/rock1有关。

关键词：苦参碱慢性心力衰竭异丙肾上腺素 p-eNOS eNOS RhoA rock1

宫颈脱落细胞microRNA-508-3p、rock1的表达及其对宫颈癌的诊断价值研究

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中国现代医学杂志 2021年第16期31卷 28-35页

作者：何立群袁婧张舒云诸暨市人民医院病理科浙江诸暨311800

目的探究宫颈脱落细胞microRNA-508-3p(miR-508-3p)、rock1的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法选取2016年2月—2019年9月诸暨市人民医院收集的宫颈脱落细胞标本172例,其中正常组70例、宫颈上皮内瘤变组54例、宫颈癌组48例。通过qRT-PC... 详细信息

目的探究宫颈脱落细胞microRNA-508-3p(miR-508-3p)、rock1的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法选取2016年2月—2019年9月诸暨市人民医院收集的宫颈脱落细胞标本172例,其中正常组70例、宫颈上皮内瘤变组54例、宫颈癌组48例。通过qRT-PCR、免疫组织化学、Western blotting检测各组细胞miR-508-3p、rock1的表达,荧光素酶报告实验验证宫颈病变脱落细胞miR-508-3p与rock1的相关性,观察宫颈癌脱落细胞miR-508-3p、rock1表达与宫颈癌患者临床资料的关系,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估宫颈病变脱落细胞miR-508-3p、rock1表达对宫颈病变的诊断价值。结果与正常组比较,宫颈癌组和宫颈上皮内瘤变组miR-508-3p降低(Prock1 mRNA、rock1 mRNA阳性率、rock1蛋白相对表达量升高(Prock1 mRNA、rock1 mRNA阳性率、rock1蛋白相对表达量升高(Prock1 mRNA呈负相关(r=-0.6678和-0.5234,均P=0.000),rock1是miR-508-3p的直接靶基因。miR-508-3p、rock1水平与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移有关(P0.05)。在诊断宫颈癌和宫颈上皮内瘤变时,miR-508-3p的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.946(95%CI:0.899,0.993)和0.851(95%CI:0.782,0.921),敏感性为87.1%(95%CI:0.776,1.654)和84.3%(95%CI:0.746,1.589),特异性为100.0%(95%CI:1.000,2.000)和79.6%(95%CI:0.702,1.497);rock1的AUC分别为0.949(95%CI:0.892,1.000)和0.905(95%CI:0.852,0.958),敏感性为89.6%(95%CI:0.810,1.706)和77.8(95%CI:0.667,1.445),特异性为100.0%(95%CI:1.000,2.000)和88.6%(95%CI:0.812,1.698)。随访1年后,48例宫颈癌患者中生存42例,死亡6例。生存组miR-508-3p高于死亡组(Prock1 mRNA相对表达量低于死亡组(Prock1在宫颈癌患者中表达异常,其中miR-508-3p下调,rock1上调,两者呈靶向负调控关系,并与宫颈癌患者FIGO分期及淋巴结转移密切相关,具有一定的宫颈癌诊断价值,可作为早期宫颈癌筛查的潜在生物学指标。

关键词：宫颈脱落细胞 miR-508-3p rock1 宫颈癌诊断价值