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PI3K-Akt-rho a通路在猪血凝性脑脊髓炎病毒入侵N2a细胞中的调控作用

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中国兽医学报 2022年第5期42卷 841-845页

作者：周倩宇吕晓玲王改丽李姿贺文琦吉林大学动物医学学院吉林长春130062 山西农业大学动物医学学院山西晋中030800 吉林省畜牧兽医科学研究院吉林长春130062

猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)为嗜神经性冠状病毒,主要侵害宿主中枢神经系统诱发神经变性损伤性疾病。神经细胞结构与功能的维持与细胞骨架重塑密切相关。本研究对细胞骨架相关分子进行检测,通过Western blot检测PHEV入侵N2a神经细胞后P... 详细信息

猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)为嗜神经性冠状病毒,主要侵害宿主中枢神经系统诱发神经变性损伤性疾病。神经细胞结构与功能的维持与细胞骨架重塑密切相关。本研究对细胞骨架相关分子进行检测,通过Western blot检测PHEV入侵N2a神经细胞后PI3K及其下游分子Akt的蛋白表达量,发现PHEV感染早期p-PI3K和p-Akt的蛋白表达量均增高,表明PI3K-Akt信号通路被激活。随后通过Western blot、RT-qPCR和IFA证明PI3K-Akt信号通路及该信号通路下游底物小G蛋白rho a参与调控肌动蛋白(F-actin)骨架的动态重塑,并促进病毒入侵N2a神经细胞。综上所述,PHEV入侵可劫持宿主PI3K-Akt-rho a信号通路并诱导F-actin细胞骨架重塑,这一分子机制的揭示可为抗病毒药物筛选提供新的靶标。

关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒 F-actin PI3K Akt rho a 病毒入侵

子痫前期患者子宫肌层rho a/Rock Ⅱ的表达及意义

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子痫前期患者子宫肌层Rho A/Rock Ⅱ的表达及意义

基于rho-ROCK信号转导通路研究竹沥对肝纤维化小鼠的作用

2015年泛长三角围产医学学术年会暨浙江省围产医学学术年会

作者：陆玮玮杭州市第一人民医院

目的:通过检测rho/ROCK信号通道蛋白中rho a、RockⅡ在正常妊娠和子痫前期患者子宫肌层组织中的定量表达,了解rho a、RockⅡ在子痫前期发病中的作用,从而为进一步研究rho/ROCK信号通路能否作为子痫前期新的治疗靶点提供关键的实验依据... 详细信息

目的:通过检测rho/ROCK信号通道蛋白中rho a、RockⅡ在正常妊娠和子痫前期患者子宫肌层组织中的定量表达,了解rho a、RockⅡ在子痫前期发病中的作用,从而为进一步研究rho/ROCK信号通路能否作为子痫前期新的治疗靶点提供关键的实验依据。方法:选择60例正常晚期妊娠、65例子痫前期(12例轻度子痫前期及53例重度子痫前期)患者的子宫平滑肌组织,通过Western Blot法检测rho a、RockⅡ在子宫平滑肌组织中的相对定量表达,从而研究rho a、RockⅡ在子痫前期和正常妊娠患者子宫平滑肌组织中的表达差异。结果:通过和Western Blot法检测到,rho a、RockⅡ在子痫前期组和正常妊娠组的子宫平滑肌组织中均有表达,rho a、RockⅡ蛋白在子痫前期组的表达高于正常妊娠组,在重度子痫前期组表达高于轻度子痫前期组,差异有显著性意义(Prho a、RockⅡ蛋白在重度子痫前期组的表达高于轻度子痫前期组,差异有显著性意义(Prho a、RockⅡ在子痫前期和晚期正常妊娠的子宫平滑肌中均有表达,且重度子痫前期组>轻度子痫前期组>正常妊娠组,说明rho a、RockⅡ在子痫前期子宫平滑肌组织中的高表达可能是参于子痫前期发病的病理过程。

关键词： rho a RockⅡ 子宫平滑肌子痫前期

来源： cnki会议评论

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中国肝脏病杂志（电子版） 2021年第4期13卷 38-45页

作者：王玖恒徐成军王晓宏张小冰刘青松王云中郑洋赵铁建段雪琳河北省承德市宽城满族自治县医院消化内科河北承德067600 广西中医药大学赛恩斯新医药学院南宁530222 广西中医药大学基础医学院生理教研室南宁530021 广西中医药大学壮医药学院南宁530021

目的探究竹沥对肝纤维化小鼠Ras同源基因-rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Ras homologousgene-rho-associatedcoiled-coilcontainingkinases,rho-ROCK)信号转导通路的作用,分析竹沥抗肝纤维化的分子机制。方法将40只KM小鼠随机分为空白组、模... 详细信息

目的探究竹沥对肝纤维化小鼠Ras同源基因-rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(Ras homologousgene-rho-associatedcoiled-coilcontainingkinases,rho-ROCK)信号转导通路的作用,分析竹沥抗肝纤维化的分子机制。方法将40只KM小鼠随机分为空白组、模型组、竹沥组和丹参酚酸B组,每组10只,模型组、竹沥组和丹参酚酸B组小鼠给予40%CCl4花生油混合液(剂量2μl/g),空白组给予等量生理盐水,腹腔注射,2次/周,连续8周。模型构建成功后,竹沥组以竹沥灌胃,每日1次,每次30 ml/100 g;丹参酚酸B组以丹参酚酸B溶液灌胃,每日1次,每次用量0.25 mg/100 g;其余2组给予等量生理盐水灌胃,持续4周。末次给药后对小鼠眼球取血并处死,采用HE染色观察肝组织病理并进行Ishak评分,采用γ放射免疫全自动双探头计数器检测肝纤维化指标,包括透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原和Ⅳ型胶原,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测rho a和ROCK2m RNA的相对表达量,采用Western blot检测rho a和ROCK2蛋白的相对表达量。结果空白组、模型组、竹沥组和丹参酚酸B组小鼠Ishak评分分别为(0.40±0.05)分、(4.80±0.84)分、(3.20±0.45)分和(2.80±0.83)分,差异有统计学意义(F=34.807,P0.05)。空白组rho a和ROCK2m RNA相对表达量均显著低于模型组、竹沥组和丹参酚酸B组(rho a m RNA:1.05±0.18 vs 2.61±0.37 vs 1.62±0.21 vs 1.50±0.14,ROCK2 m RNA:1.04±0.17vs2.32±0.29vs1.46±0.08vs1.45±0.09;P均rho a和ROCK2m RNA相对表达量均显著高于竹沥组和丹参酚酸B组(P均0.05)。空白组rho a和ROCK2蛋白相对表达量均显著低于模型组、竹沥组和丹参酚酸B组(rho a蛋白:0.14±0.03 vs 0.43±0.05 vs 0.26±0.02 vs 0.30±0.15;ROCK2蛋白:0.28±0.03 vs 0.76±0.09 vs 0.38±0.04 vs 0.49±0.03;P均rho a和ROCK2蛋白相对表达量均显著高于竹沥组和丹参酚酸B组(P均0.05)。结论竹沥可抑制rho-ROCK信号转导通路的活动,可能是其抗肝纤维化的作用机制。

关键词：肝纤维化竹沥 rho a ROCK2

rhoA、Snail、VEGF基因及蛋白在SACC中表达及临床意义

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RhoA、Snail、VEGF基因及蛋白在SACC中表达及临床意义

作者：胡瑞利河北北方学院

学位级别：硕士

本研究旨在探讨rho a、Snail、VEGF三种mRNA及蛋白在涎腺腺样囊性癌(Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)组织及癌旁组织(对照组)中的表达情况及临床意义;探讨rho a、Snail、VEGF三种mRNA及蛋白在SACC组织中的表达情况及与患者临... 详细信息

本研究旨在探讨rho a、Snail、VEGF三种mRNA及蛋白在涎腺腺样囊性癌(Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)组织及癌旁组织(对照组)中的表达情况及临床意义;探讨rho a、Snail、VEGF三种mRNA及蛋白在SACC组织中的表达情况及与患者临床病理特征的关系;探讨rho a、Snail、VEGFmRNA及蛋白在不同组织类型、TNM分期、有无淋巴结转移间表达的相关性;进一步探讨SACC血性转移的分子信号通路rho a/ROCK/PKD1/NF-κB/Snail机制,为SACC的浸润和转移提供一定的理论依据和治疗靶点。选取1997年9月013年9月河北北方学院附属第一医院病理科存档病理资料齐全组织蜡块55例(SACC),癌旁组织20例,年龄为170岁,平均年龄48.36岁,涎腺肿瘤病理类型按WHO(2005)所规定进行分型:其中20例为筛状型组织、有管状型组织共为19例和16例实体型组织;按TNM分期法(UICC)进行临床分期:Ⅰ+Ⅱ期37例、Ⅲ+Ⅳ期18例。在rho a、Snail、VEGFmRNA及蛋白在SACC及癌旁组织中的表达方法中以采用HE染色技术、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)技术和原位分子杂交(In situ hybridization,ISH)技术进行检测,收集统计临床病理参数特征,分析各指标表达与性别、年龄、组织大小的关系,各指标表达与不同组织类型、TNM分期和有无淋巴结转移的关系。应用统计学方法SPSS17.0软件包进行统计,卡方检验应用于两组间的比较,数据间的相关性采用Spearman等级相关检验,所得出的结果以Prho a、Snail、VEGFmRNA及蛋白在涎腺腺样囊性癌组织及癌旁组织中均有表达,其中rho a的阳性物质主要定位于肿瘤细胞的上皮细胞膜,部分表达于细胞质,呈线性棕黄色;Snail的阳性物质主要定位于肿瘤细胞的细胞核中,呈棕黄色或棕褐色颗粒;VEGF的阳性物质主要定位于肿瘤细胞的细胞浆中,棕黄色或棕褐色颗粒。rho a、Snail、VEGFmRNA及蛋白在55例SACC组织中表达的阳性率分别为:65.4%(36/55)、63.6%(35/55)、67.3%(37/55)和69.1%(38/55)、72.7%(40/55)、76.4%(42/55);在20例癌旁组织中的阳性表达率分别为5%(1/20)、5%(1/20)、10%(2/20)和5%(1/20)、10%(2/20)、15%(3/20)。三者在SACC组阳性表达率均高于癌旁组,差异具有统计学意义(Prho a、Snail、VEGFmRNA及蛋白在SACC组织中的高表达与患者的性别、年龄、组织大小及体积均无关(P>0.05),rho a、SnailmRNA及蛋白的表达与其组织类型、病理分级、淋巴结有无远处转移有关(P0.05),与病理分级、淋巴结有无远处转移有关(Prho a,Snail,VEGF基因和蛋白的阳性表达例数为:rho a基因为36例、Snail基因为35例、VEGF基因为37例,rho a蛋白为38例、Snail蛋白为40例、VEGF蛋白为42例,以上研究所得数据采用Spearman相关性分析,所得结果显示:rho a,Snail,VEGF基因和蛋白表达均呈正相关。统计结果显示:rho a、Snail和VEGF在SACC中的表达比癌旁组织中的表达率明显增高,提示在涎腺腺样囊性癌的发生、发展、浸润以及转移的过程中三者可能共同促进互相参与,并且三者可能共同成为SACC发生浸润、转移的生物学指标,并且可能通过rho a/ROCK/PKD1/NF-κB/Snail信号传导通路联合作用促进了SACC的浸润和转移,为治疗SACC提供了新的理论依据和治疗靶点。

关键词：涎腺腺样囊性癌 rho a Snail VEGF 肿瘤浸润肿瘤转移免疫组化原位杂交

rhoA-ROCK信号通路在氯胺酮致发育期海马神经元的神经毒性机制研究

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RhoA-ROCK信号通路在氯胺酮致发育期海马神经元的神经毒性机制研究

作者：郝子淼河北医科大学

学位级别：硕士

第一部分原代海马神经元的培养、形态学观察以及纯度鉴定目的:通过对新生24h内SD大鼠海马神经元培养,掌握大鼠海马神经元体外培养的方法,利用免疫荧光细胞化学鉴定神经元纯度。方法:取新生24 h内的SD乳鼠,用75%乙醇消毒,剪断头,分层剪... 详细信息

第一部分原代海马神经元的培养、形态学观察以及纯度鉴定目的:通过对新生24h内SD大鼠海马神经元培养,掌握大鼠海马神经元体外培养的方法,利用免疫荧光细胞化学鉴定神经元纯度。方法:取新生24 h内的SD乳鼠,用75%乙醇消毒,剪断头,分层剪开皮肤和颅骨,用弯镊取出大脑,置于预冷的DMEM液中,快速剥离出两侧海马组织,在解剖显微镜下去除海马的血管和被膜,用显微剪把组织剪碎,再移入木瓜蛋白酶和DNA酶Ⅰ的混合消化液中,置于37℃,5%CO2培养箱中消化30 min。用吸管将组织块移入含有10%胎牛血清的DMEM液中终止消化5min,再把组织块移入接种培养基中,用1ml长枪头匀速、轻柔地反复吹打,直至液体变浑浊,没有块状物质,之后过200目的细胞筛。在显微镜下进行活细胞计数,制成1x106/ml密度的细胞悬液,种植于多聚赖氨酸处理过的6孔培养板中,每孔加2.5ml,置于37℃,5%CO2的培养箱内培养。6h后全量更换无血清的维持培养基。以后,每隔一天半量换液一次。在第四天的时候,加入终浓度10m M的5fu和尿嘧啶,来抑制胶质细胞的生长。在显微镜下观察神经元的生长情况。海马神经元培养7d后,应用免疫荧光化学技术,用荧光标记的MAP-2标记神经元,DAPI标记所有细胞的细胞核。在荧光显微镜下,随机选取5个孔,分为5组,分别在低倍视野(4×10)和高倍视野(10×20倍)下观察,拍照。计数神经元和所有细胞核的数目,并计算神经元所占的百分比,取均值作为每孔神经元纯度。结果:原代培养海马神经元,神经元标志物单克隆神经元微管相关蛋白-2(MAP-2)抗体和核抗体DAPI荧光染色后,在荧光倒置显微镜下鉴定,计算海马神经元纯度约为(91.52±1.70)%。小结:体外培养的原代SD新生乳鼠海马神经元形态典型,且海马神经元纯度在90%以上,能够满足进一步的实验要求。第二部分不同浓度的氯胺酮对海马神经元树突棘的影响目的:观察不同浓度氯胺酮对发育期海马神经元树突棘的影响。方法:取原代培养至第5 d的海马神经元,随机分为4组:(1)C组(空白对照组):加入等体积的维持培养基(2)K1组:加入氯胺酮,终浓度为100μM(3)K2组:加入氯胺酮,终浓度为300μM(4)K3组:加入氯胺酮,终浓度为500μM。各组继续培养6小时后,固定,用荧光染料V22888染色。之后,在共聚焦显微镜下观察,随机摄取荧光图片,并计算各组神经元树突棘的密度以及平均长度。结果:1树突棘的密度(F=13.298,P=0.002):K2组及K3组与C组比较,数值有所降低,差异有统计学意义(PrhoA及其下游分子ROCK的表达量的变化,以及使用Y-27632后rhoA和ROCK蛋白表达的变化。2应用免疫荧光细胞化学技术标记神经元树突棘,阐明rhoA-ROCK信号通路在氯胺酮对原代培养的海马神经元毒性中的作用。方法:取原代培养至第5 d的海马神经元,随机分为4组:(1)C组(空白对照组):加入等体积的维持培养基(2)Y组:加入Y-27632,终浓度为10μM(3)K组:加入氯胺酮,终浓度为300μM(4)K+Y组:加入氯胺酮和Y-27632,终浓度分别为300μM和10μM。1将各组再培养6小时后,提取蛋白,应用Western blot技术检测各组rhoA和ROCK蛋白表达的变化。2将各组再培养6小时后,用V22888染色,在共聚焦显微镜下观察各组神经元树突棘的变化。结果:1 rhoA(F=404.774,P=0.000):Y组与C组比较,rhoA蛋白表达量差异无统计学意义;K组与C组比较,rhoA蛋白表达表达显著增高,且有统计学意义(PrhoA蛋白表达量差异无统计学意义;2 ROCK(F=721.413,P=0.000):Y组与C组比较,ROCK蛋白表达量差异无统计学意义;K组与C组比较,ROCK蛋白表达表达显著增高,且有统计学意义(P<0.05)。K+Y组与K组比较,ROCK蛋白表达量显著降低,且差异有统计学意义(P<0.05);3树突棘的密度(F=11.383,P=0.003):Y组与C组比较,差异无统计学意义

关键词：氯胺酮神经元 MAP-2 DAPI 树突棘 rho a ROCK Y-27632

rhoA在单增李斯特菌以“特洛伊木马”形式穿越血脑屏障中的作用

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RhoA在单增李斯特菌以“特洛伊木马”形式穿越血脑屏障中的作用

作者：卢叶江苏大学

学位级别：硕士

目的:单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)以―特洛伊木马‖形式穿越血脑屏障这一方式在细菌性脑炎、脑膜炎的发生发展中具有重要意义,其中细胞迁移和突破血脑屏障是必须的,rhoGTP酶家族是调控细胞迁移的关键因子。本研究拟探讨rho... 详细信息

目的:单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)以―特洛伊木马‖形式穿越血脑屏障这一方式在细菌性脑炎、脑膜炎的发生发展中具有重要意义,其中细胞迁移和突破血脑屏障是必须的,rhoGTP酶家族是调控细胞迁移的关键因子。本研究拟探讨rhoA在该过程中的表达,观察rhoA对细胞迁移和免疫因子的表达等生物学行为的影响。同时研究rhoA调控巨噬细胞对血脑屏障的影响。方法:***小室迁移实验检测RAW264.7带菌迁移能力;实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Lm感染RAW264.7后IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平和蛋白水平的变化;qRT-PCR和Western blot检测Lm感染RAW264.7后,rhoGTP酶家族在mRNA水平和蛋白水平的表达差异。2.基因干扰技术干扰rhoA在RAW264.7中的表达,并用qRT-PCR和Western blot验证其效率;Transwell迁移实验检测对照组和干扰组迁移能力的改变;流式细胞术(FCM)检测对照组和干扰组抗原提呈、细胞周期的改变,CCK8以及细胞吞噬实验检测细胞的增殖和吞噬功能的改变;qRT-PCR和ELISA检测对照组和干扰组IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平和蛋白水平的变化;Western blot检测rhoA下游分子ROCK的表达。3.用鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞构建血脑屏障。经Lm感染巨噬细胞的上清刺激后,辣根过氧化物酶(HRP)渗漏实验检测血脑屏障通透性;划痕实验、Transwell实验检测内皮细胞迁移功能;qRT-PCR检测内皮细胞紧密连接蛋白和粘附分子的改变。结果:***感染RAW264.7后,细胞迁移速度增快;IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10在mRNA水平表达随菌量增加表达量增加;在蛋白水平IL-1β、IL-6、TNF-α表达增高明显,IL-10表达无差异。***-PCR和Western blot结果显示,rhoGTP酶家族在感染细胞中的表达各不相同,其中rhoA差异最明显。其下游效应分子ROCK2也出现和rhoA一致的变化。3.干扰RAW264.7细胞的rhoA后,能明显抑制RAW264.7细胞的迁移和IL-6、IL-1β的表达,但是对TNF-α、IL-10无明显影响,对细胞的增殖和吞噬能力无影响,可提高RAW264.7细胞的抗原提呈能力。4.干扰RAW264.7细胞的rhoA后,可降低Lm对血脑屏障的破坏作用。干扰rhoA后,血脑屏障通透性降低,内皮细胞迁移能力增强,紧密连接蛋白Occludin、Claudin5升高,粘附分子ICAM-1降低,抑制巨噬胞带菌迁移穿越血脑屏障的细菌数量。结论:rhoA在Lm以“特洛伊木马”形式穿越血脑屏障中具有重要作用,可能通过促进细胞迁移、调控IL-6、IL-1β来破坏血脑屏障内皮细胞间紧密连接、增高血脑屏障通透性、促进巨噬细胞与内皮细胞粘附来穿越血脑屏障,该过程可能通过rhoA/ROCK2信号通路调控,对细菌性脑膜炎、脑水肿等治疗具有积极意义。

关键词： RAW264.7 rho a 血脑屏障细胞迁移免疫因子

苦豆碱对野百合碱致大鼠肺动脉高压的保护作用

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苦豆碱对野百合碱致大鼠肺动脉高压的保护作用

作者：吴凡宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的研究苦豆碱(Aloperine,ALO)对野百合碱致大鼠肺动脉高压的保护作用,并对rho a/ROCK信号通路与其保护作用之间的关系进行探讨。方法1.采用MPA心功能分析仪对肺动脉高压大鼠的m PAP和RVSP进行检测;2.采用H.E.染色法分析对ALO对肺动脉... 详细信息

目的研究苦豆碱(Aloperine,ALO)对野百合碱致大鼠肺动脉高压的保护作用,并对rho a/ROCK信号通路与其保护作用之间的关系进行探讨。方法1.采用MPA心功能分析仪对肺动脉高压大鼠的m PAP和RVSP进行检测;2.采用H.E.染色法分析对ALO对肺动脉高压大鼠肺小动脉病理结构变化的作用;3.采用超声心动图对检测ALO对肺动脉高压大鼠血流加速时间的作用;4.采用免疫组化染色法检测ALO对肺动脉高压大鼠肺动脉α-SMA和PCNA表达的影响;5.采用Western blot方法检测ALO对肺动脉高压大鼠肺组织rho a、ROCK1、ROCK2、t-MYPT1、p-MYPT1、p27kip1、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,分析rho a、ROCK1、ROCK2、t-MYPT1、p-MYPT1、p27kip1、Bax和Bcl-2对苦豆碱改善肺动脉高压作用的影响;6.采用RT-q RCR方法检测ALO对肺动脉高压大鼠肺组织中rho a、ROCK1、ROCK2 mRNA表达的影响,分析rho a、ROCK1、ROCK2对ALO改善野百合碱致大鼠肺动脉高压作用的作用。结果1.与正常组相比,模型组大鼠平均肺动脉压力(Prho a(Prho a(Prho a(Prho a(Prho a/ROCK信号通路表达有关。

关键词：苦豆碱野百合碱肺动脉高压 rho a ROCK

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伪足在羽毛分叉系统中的作用研究

伪足在羽毛分叉系统中的作用研究

作者：程冬洋福州大学

学位级别：硕士

羽毛具有精密排布层次分明的分叉结构,是研究分叉发生的绝佳模型。在分叉发生的过程中,平滑的上皮细胞层几乎同时形成周期性排布的分叉结构。多种信号分子如FGF、Notch、BMP、Wnt等,都能调节羽毛分叉的发生。但是分叉过程中精确的分子... 详细信息

羽毛具有精密排布层次分明的分叉结构,是研究分叉发生的绝佳模型。在分叉发生的过程中,平滑的上皮细胞层几乎同时形成周期性排布的分叉结构。多种信号分子如FGF、Notch、BMP、Wnt等,都能调节羽毛分叉的发生。但是分叉过程中精确的分子机制和细胞行为仍不清楚。在果蝇气管系统或脊椎动物血管系统中,间充质细胞分泌特定因子诱导分叉上皮细胞伸出伪足,伪足介导相应信号通路的活化,调节分叉形成。我们在羽毛分叉系统中也发现了伪足的存在。在羽毛分叉系统中伪足是由F-actin构成,VASP和Fscn1在伪足上有定位。免疫染色及电镜观察发现,轴的近端到远端基底上皮细胞都有伪足。而分叉的近端有伪足,分叉形成的同时伪足消失,说明伪足与分叉的形成有一定的关系。细胞粘附分子NCAM、LCAM和β-cat等在伪足上富集定位,使其有粘附作用。伪足与Tenascin C成指状交叉,表明伪足伸入到基底膜中。rho家族能够调节细胞骨架和伪足。在Hela细胞中伪足受rho a和Cdc 42的调节。通过慢病毒感染的方式,在鸡毛囊内过表达DN型rho a和Cdc 42,羽毛尖端轴变成小分叉。在毛管轴局部过表达DN型rho a和Cdc 42,轴新形成的小分叉上伪足消失。因此,伪足受rho调节,且能影响分叉的发生。通过RT-PCR发现,Fgf2和Fgf10的表达从DP到Pulp逐渐递减,原位杂交进一步确定。在毛管局部过表达Fgf10,分叉融合成轴,且诱导伪足形成。通过SU5402抑制FGF信号,轴变成小分叉,其上伪足消失。在Hela细胞中SU5402同样能抑制伪足。因此,FGF能够调节伪足形成和分叉发生。pERK1/2在轴和近端未分叉处有活化,在分叉上没有活化。PD98059抑制pERK活化,表型与SU5402相似,表明pERK参与了伪足和分叉的调节。原位杂交显示Notch1在羽小枝基板表达,Ser1表达与Notch1相似,Ser2在边缘板表达。过表达Notch1分叉融合成轴,轴上没有伪足出现。RNAi-Notch1轴变成小分叉,伪足消失。Notch信号能够调节分叉发生,但不能直接诱导伪足形成。β-cat和LCAM在分叉羽小枝基板处高表达,介导细胞粘附成团形成分叉的核心。Notch1通过β-cat直接结合,参与了分叉核心形成的调节。RNAi-Ecad羽毛尖端轴变成分叉,表型与Notchl 一致。而RNAi-β-cat羽毛尖端分叉一边缺失。综上所述,在羽毛毛囊近端,基底上皮细胞伸出伪足,感受间充质中的FGF信号,抑制上皮细胞形成分叉。随着向上生长,间充质中FGF信号下降,基底上皮细胞伪足缩短至消失,同时分叉发生。Notch信号也参与了分叉的调节。本文初步探索了伪足结构、调节及其在羽毛分叉中的作用,为羽毛分叉的机制提供了新的假说。

关键词：羽毛分叉伪足 rho a Cdc 42 FGF Notch

蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血后脑组织ROCK2、rhoA及p-MLC的影响

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光明中医 2021年第19期36卷 3258-3261页

作者：王蔚杜渊钟霞王洪连孙长侦刘增金王丽杨思进西南医科大学附属中医医院临床药学GCP中心四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院儿科四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院中西医结合药物研究中心四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院心脑病科四川泸州646000

目的观察蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经功能及脑组织ROCK2、rhoA、p-MLC表达的影响,探寻该药防治脑出血的作用机制。方法将96只SD大鼠随机分为假手术组、脑出血模型组、蛭龙活血通瘀组、盐酸法舒地尔组,各组又分为12 h、48 h、3 d、... 详细信息

目的观察蛭龙活血通瘀胶囊对脑出血大鼠神经功能及脑组织ROCK2、rhoA、p-MLC表达的影响,探寻该药防治脑出血的作用机制。方法将96只SD大鼠随机分为假手术组、脑出血模型组、蛭龙活血通瘀组、盐酸法舒地尔组,各组又分为12 h、48 h、3 d、7 d四个亚组,取大鼠自体尾部血注入基底节区以制备脑出血模型,蛭龙活血通瘀组灌胃给药1.2 g/(kg·d),盐酸法舒地尔组腹腔注射给药12 mg/(kg·d),假手术组、脑出血模型组灌胃生理盐水(3 ml/d)。在规定时点对各组大鼠进行NSS评分,采用蛋白质印迹试验(Western blot)检测脑组织ROCK2、p-MLC蛋白表达,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)法检测大鼠脑组织ROCK-2、rhoA mRNA的水平。结果与模型组比较,蛭龙活血通瘀组、盐酸法舒地尔组大鼠NSS评分在各时点均明显减少(PrhoA mRNA水平各时点均明显下降(PrhoA、p-MLC的表达,改善神经功能障碍,从而发挥脑保护作用。

关键词：蛭龙活血通瘀胶囊脑出血 ROCK2 rho a p-MLC 实验研究