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缺氧胎盘组织中ROCK蛋白的表达及意义

中华妇产科杂志 2016年第9期51卷 696-698页

作者：杨博萍韩健周玮李力第三军医大学大坪医院妇产科萍重庆400000 重庆市妇幼保健院妇产科

子痫前期（pre-eclampsia, PE）是严重威胁孕产妇和胎儿健康的产科疾病，其发病机制至今未明。研究表明，PE孕妇胎盘组织中rho相关蛋白激酶（rho associated protein kinase，ROCK）表达水平显著上调[1]，提示ROCK蛋白可能参与子痫前期... 详细信息

子痫前期（pre-eclampsia, PE）是严重威胁孕产妇和胎儿健康的产科疾病，其发病机制至今未明。研究表明，PE孕妇胎盘组织中rho相关蛋白激酶（rho associated protein kinase，ROCK）表达水平显著上调[1]，提示ROCK蛋白可能参与子痫前期的发病过程，ROCK蛋白属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员，是rho蛋白的下游靶效应分子。ROCK蛋白具有两种亚型，即ROCKⅠ和ROCKⅡ，两种亚型的序列同源性达到64％，在激酶活性区域达到89％，两种亚型在正常及PE孕妇的胎盘组织中均有表达[2]。ROCK蛋白主要调节细胞形状以及运动、分泌、增殖、分化、凋亡等细胞功能[3]。近年来研究认为，PE发病与胎盘缺氧有关，缺氧是PE发病的关键因素，但是低氧状态下ROCK蛋白的变化及其作用目前尚不清楚。本研究通过观察低氧状态下正常孕妇胎盘组织ROCK蛋白表达的变化，进一步明确低氧对胎盘组织中ROCK蛋白表达的影响。

关键词： CK蛋白胎盘组织胎盘缺氧苏氨酸蛋白激酶 protein rho蛋白发病机制低氧状态

哮喘小鼠肺组织rho、ROCK信号通路与气道炎症及选择性拮抗剂Y-27632的干预

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中国免疫学杂志 2010年第12期26卷 1124-1126页

作者：项蔷薇李海静罗运春王强朱妍艳李昌崇温州医学院附属育英儿童医院呼吸科浙江省小儿呼吸疾病诊疗中心温州315000

rho/rho激酶[又名rho蛋白相关卷曲螺旋激酶(rho-associated coiled-coil forming kinase,ROCK)]信号通路是机体各组织细胞普遍存在的一条信号转导通路,它伴随多种炎症介质和细胞因子受体后耦联机制而激活,且可能整合于这些炎症因子的后... 详细信息

rho/rho激酶[又名rho蛋白相关卷曲螺旋激酶(rho-associated coiled-coil forming kinase,ROCK)]信号通路是机体各组织细胞普遍存在的一条信号转导通路,它伴随多种炎症介质和细胞因子受体后耦联机制而激活,且可能整合于这些炎症因子的后效应中,介导疾病的病理生理过程. 国外有研究显示哮喘动物模型中存在rho/ROCK信号通路关键分子的异常表达与活化,可能是导致哮喘气道炎症和气道高反应的重要原因[1,2]. 故本研究通过制备哮喘小鼠模型,并应用ROCKⅡ特异性拮抗剂Y-27632进行干预,探讨rho/ROCK信号通路对哮喘小鼠气道炎症的调控作用

关键词： rho蛋白信号通路选择性拮抗剂哮喘小鼠气道炎症 rho/rho激酶肺组织干预

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rho激酶抑制剂治疗肺动脉高压的研究进展

中华医学杂志 2010年第26期90卷 1869-1871页

作者：张锐刘岽袁平荆志成同济大学附属上海市肺科医院肺循环研究中心上海200433

rho激酶（ROCK）是rho蛋白下游效应分子之一,在血管平滑肌细胞收缩、细胞迁移、增殖以及凋亡等多项细胞功能中被证实具有重要的细胞内信号转导作用.已发现动脉粥样硬化、再狭窄、高血压、肺动脉高压和心肌肥厚等多种心血管疾病患者都存... 详细信息

rho激酶（ROCK）是rho蛋白下游效应分子之一,在血管平滑肌细胞收缩、细胞迁移、增殖以及凋亡等多项细胞功能中被证实具有重要的细胞内信号转导作用.已发现动脉粥样硬化、再狭窄、高血压、肺动脉高压和心肌肥厚等多种心血管疾病患者都存在ROCK的异常活化.动物实验和临床研究均表明ROCK抑制剂能够安全有效地治疗肺动脉高压.本文就近年来ROCK抑制剂治疗肺动脉高压的研究进展进行简要综述.

关键词： rho激酶抑制剂肺动脉高压治疗心血管疾病患者动脉粥样硬化信号转导作用 rho蛋白肌细胞收缩

DLC-1通过rho通路抑制耐恩杂鲁胺前列腺癌细胞的增殖与侵袭能力

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重庆医科大学学报 2024年第10期49卷 1061-1066页

作者：汤洋斌杨果吴小候全真重庆医科大学附属第一医院泌尿外科重庆421800

目的:探索肝癌缺失因子1(deleted in liver cancer 1,DLC-1)对耐恩杂鲁胺前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞增殖,侵袭和凋亡的影响以及作用机制。方法:体外以不同浓度的恩杂鲁胺药物培养人前列腺癌lncap及C4-2细胞株6个月以上,构建恩... 详细信息

目的:探索肝癌缺失因子1(deleted in liver cancer 1,DLC-1)对耐恩杂鲁胺前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞增殖,侵袭和凋亡的影响以及作用机制。方法:体外以不同浓度的恩杂鲁胺药物培养人前列腺癌lncap及C4-2细胞株6个月以上,构建恩杂鲁胺耐药细胞系lncap-R,C4-2-R。CCK-8法检测其IC50,验证恩杂鲁胺耐药株是否构建成功。利用慢病毒转染lncap-R,C4-2-R,以敲低和过表达DLC-1,采用克隆实验、Transwell实验和流式细胞术检测DLC-1对耐恩杂鲁胺的前列腺癌细胞的增殖、侵袭和凋亡的影响。结果:与对照组相比,过表达组DLC-1显著抑制了2个耐药株的增殖和侵袭进程。机制上,WB实验结果表明DLC-1表达与2个耐药株中rho蛋白的表达呈负相关。rho抑制剂rhosin逆转了因敲低DLC-1后lncap-R细胞凋亡减少的情况。结论:DLC-1可以下调耐药株中的rho蛋白的表达,并抑制耐药株的增殖和侵袭。

关键词：肝癌缺失因子1 前列腺癌恩杂鲁胺 rho蛋白增殖侵袭

人pEGFP-GEF-H1载体的构建及其表达

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胃肠病学 2014年第9期19卷 540-543页

作者：徐卫东钱元霞曹俊江苏大学药学院 212013 南京大学医学院附属鼓楼医院消化科

背景:研究表明GEF-H1能激活rho蛋白,与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的:构建人pEGFPGEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法:在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物,构建重组质粒pEGFP-GEF-H1,并转染... 详细信息

背景:研究表明GEF-H1能激活rho蛋白,与肿瘤发生、发展、浸润、迁移等密切相关。目的:构建人pEGFPGEF-H1载体并稳定转染结肠癌HCT116细胞后检测GEF-H1表达。方法:在线合成引物软件设计人GEF-H1基因引物,构建重组质粒pEGFP-GEF-H1,并转染结肠癌HCT116细胞,以转染空质粒和未转染的细胞分别作为空质粒组和空白对照组。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平。结果:成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,测序结果表明序列正确。转染重组质粒pEGFP-GEF-H1后,荧光显微镜下可见较强的绿色荧光,GEF-H1 mRNA和蛋白表达水平均较空质粒组和空白对照组明显上调。结论:体外成功构建了人pEGFP-GEF-H1载体,且转染结肠癌HCT116细胞后高表达GEF-H1,为进一步探讨结肠癌与GEF-H1的关系提供了必要的实验材料。

关键词：结肠肿瘤鸟嘌呤核苷酸交换因子类 rho蛋白载体构建转染

rho激酶在心血管生理和病理生理中的作用(待续)

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中华高血压杂志 2009年第9期17卷 847-848页

作者：张刘锋单位不详

rhoA是rho蛋白家族的成员,除了有调节肌动蛋白细胞骨架的作用外,还参与调节许多基本的细胞功能,如收缩、运动、增殖和凋亡[1].rhoA作为一种分子开关,通过无活性的GDP结合形式与有活性的GTP结合形式之间的转换,经下游效应分子,引起细胞反应.

关键词： rho激酶心血管生理病理生理肌动蛋白细胞骨架 rhoA 效应分子 rho蛋白细胞功能

HMGB1通过rho/Rock通路对内皮屏障通透性影响的机制研究

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HMGB1通过Rho/Rock通路对内皮屏障通透性影响的机制研究

作者：赵梦姣中国医科大学

学位级别：硕士

目的:高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1 protein,HMGB1）是存在于体内重要的晚期炎症因子。近年来,因发现其参与了脓毒症发生的病理生理过程并发挥重要的致病作用而成为研究热点。脓毒症（sepsis）是ICU十分常见的危重病症,... 详细信息

目的:高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1 protein,HMGB1）是存在于体内重要的晚期炎症因子。近年来,因发现其参与了脓毒症发生的病理生理过程并发挥重要的致病作用而成为研究热点。脓毒症（sepsis）是ICU十分常见的危重病症,其发病的根本机制尚未完全阐明,肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素-1（IL-1）等是在脓毒症发病中重要的早期炎症介质。但是,临床应用TNF-α及IL-1拮抗剂并未取得满意结果。因此本研究旨在探讨能否通过阻断晚期炎症介质HMGB1的下游信号传导通路从而对内皮屏障起保护作用。方法:选取人肺微血管内皮细胞（HPMEC）,将胰酶消化后的HPMEC于培养瓶中传代培养,并随机分成9组:空白对照组（加入等量PBS）、rh HMGB1处理10min组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理30min组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理1h组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理6h组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理24h组（600 ng/m L）、rh HMGB1处理24h+RAGE抑制剂（FPS-ZM1）预处理组（600 ng/m L rh HMGB1+FPS-ZM1 0.05μM）、rh HMGB1处理60min+Rock抑制剂（Y-27632）预处理组（600 ng/m L rh HMGB1+Y-27632 10μmol/L）、rh HMGB1处理24h+Rock抑制剂（Y-27632）处理组（600 ng/m L rh HMGB1+Y-27632 10μmol/L）。1、传代培养后的人肺微血管内皮细胞,通过CCK-8增殖实验测定内皮细胞的存活率。2、利用Transwell法检测下层小室的FD40荧光值以反映内皮细胞通透性。3、利用Pull Down法检测HMGB1诱导的rho-GTP的活性表达。4、利用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Rock、Total rho A、MLC、p-MLC、ZO-1、VE-cadherin蛋白表达。5、利用免疫荧光法观察F-actin、ZO-1、VE-钙粘蛋白的表达及分布。结果:1、在600 ng/m L的rh HMGB1刺激24h后,与空白对照组相比,内皮细胞存活率无显著变化,且差异无统计学意义（P＞0.05）。2、应用浓度为100 ng/m L、200 ng/m L、400 ng/m L、600 ng/m L的rh HMGB1刺激HPMECs 24h,随着HMGB1浓度的增大,内皮屏障通透性也明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;经过600ng/m L的rh HMGB1处理内皮细胞10min、30min、1h后,内皮细胞屏障通透性较空白对照组无明显变化（P＞0.05）。而经rh HMGB1处理6h、24h后,与空白对照组相比,内皮细胞屏障通透性显著增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。3、Pull Down法及蛋白免疫印迹法显示HMGB1诱导rho蛋白和Rock蛋白快速活化,肌球蛋白轻链在30min时被激活,其磷酸化形式有所上升,1h处磷酸化水平达到最高值,但随着刺激时间的延长磷酸化肌球蛋白逐渐失活。而内皮连接蛋白ZO-1及粘附连接蛋白VE-cadherin在rh HMGB1刺激1h后表达逐渐下调。4、与对照组相比,共聚焦显微镜下显示rh HMGB1处理组可以短时间内引起HPMECs细胞骨架蛋白F-actin结构和分布的改变,随着时间延长ZO-1连接蛋白失去连贯性、分布断裂、荧光强度较对照组有所减弱。VE-cadherin被破坏、相互交联、呈片段分布。5、应用FPS-ZM1和Y-27632预处理可以看到其对HMGB1介导的内皮屏障损伤的保护作用,与对照组相比,表现为细胞通透性明显降低,定量分析表明,MLC的磷酸化水平显著降低,ZO-1和VE-cadherin的蛋白表达显著上调（均P＜0.05）,并且由F-actin聚集形成的应力纤维减少,ZO-1和VE-cadherin荧光表达明显增强,膜定位明显增加;而在rh HMGB1刺激24h的最后4小时内加入Y-27632,可以发现其并未对内皮屏障损伤起保护作用,与rh HMGB1刺激组相比,细胞通透性无明显差异,ZO-1和VE-cadherin的表达及分布仍处于较低水平。结论:HMGB1与胞外RAGE受体结合后,通过早期活化rho/ROCK信号通路,诱导MLC磷酸化、F-actin形成应力纤维、内皮连接蛋白分布及表达变化,导致内皮细胞收缩、细胞间形成裂隙,从而使内皮屏障通透性增高。

关键词：高迁移率族蛋白内皮屏障通透性 rho蛋白细胞骨架

RacGAP1在前列腺癌恶性进展中的作用及机制研究

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RacGAP1在前列腺癌恶性进展中的作用及机制研究

作者：吴震山东大学

学位级别：硕士

研究背景前列腺癌是一种严重影响人类生命健康的疾病,位居男性恶性肿瘤发病率第二位,同时,前列腺癌所导致的死亡病例数在所有肿瘤中排第五位。我国前列腺癌发病率较低,但近年来随着人口老龄化、肥胖、生活方式西方化和前列腺癌诊断技术... 详细信息

研究背景前列腺癌是一种严重影响人类生命健康的疾病,位居男性恶性肿瘤发病率第二位,同时,前列腺癌所导致的死亡病例数在所有肿瘤中排第五位。我国前列腺癌发病率较低,但近年来随着人口老龄化、肥胖、生活方式西方化和前列腺癌诊断技术的提高,我国前列腺癌患者数量呈高速增长趋势,年增长率达5%。雄激素受体(Androgen Receptor,AR)是前列腺发育和前列腺癌发生发展中的一个重要分子,它在与双氢睾酮等配体结合后,通过与雄激素依赖性基因启动子区域的雄激素反应元件结合,在转录共调节因子的辅助下,发挥转录调控作用。AR通过调控一系列下游基因的表达,促进前列腺癌细胞增殖、迁移、抗凋亡和上皮-间充质转化等功能。鉴于AR在前列腺癌发生发展中的关键作用,目前针对进展期前列腺癌,一线治疗方案是雄激素剥夺治疗(Androgen Deprivation Therapy,ADT)。在治疗初期,肿瘤细胞往往表现为对治疗较高的敏感性,但是,大多数前列腺癌经ADT治疗12-18个月后发生复发,并产生对雄激素剥夺的抵抗,转变为去势抵抗性前列腺癌(Castration-Resistant Prostate Cancer,CRPC),在大部分CRPC病例中均存在AR信号通路的重激活。因此,AR在前列腺癌进展和肿瘤复发中均发挥关键作用。通过对转移性前列腺癌的差异基因进行分析,我们发现了前列腺癌转移的一个差异基因,Rac GTP酶激活蛋白1(RacGAP1)。RacGAP1属于rho小G蛋白家族,可以激活rho蛋白的GTP酶水解活性,水解与之相连的GTP,使rho蛋白失活。RacGAP1也是中心纺锤体的重要组成成分,控制胞质分裂收缩环的形成和其与细胞膜的锚定,在细胞分裂中发挥重要作用。此外,RacGAP1还参与STAT3激活和p-STAT3的入核,在其转录活性发挥中起关键调控作用,而STAT3可以在转录水平影响RacGAP1的表达;RacGAP1对HIF-1 α起负向调控作用,并通过HIF-1 α参与细胞缺氧调控。RacGAP1与畸形精子症、小鼠不育症、病毒感染等疾病有关。同时,RacGAP1的表达失调也与许多肿瘤相关。RacGAP1通过抑制Hippo/YAP信号通路,促进胞质分裂的发生,进而促进肿瘤细胞增殖;RacGAP1通过对rho蛋白的调控促进肿瘤细胞转移;RacGAP1与STAT3的调控环路在肿瘤中也发挥重要作用,可以促进膀胱癌、肝癌等肿瘤进展。RacGAP1的高表达还与结直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胃癌和脑膜瘤等癌症的恶性程度、淋巴结转移、血管侵袭及不良预后相关。RacGAP1也在前列腺癌中存在表达失调,但其机制尚不明确。因此我们将关注点放在RacGAP1是否与前列腺癌的生物学行为有关,以及RacGAP1在前列腺癌进展过程中的作用和机制上,希望可以对这一严重危害人类健康的疾病有更深入的理解。研究目的1、寻找前列腺癌进展和转移中的差异表达基因;2、探究RacGAP1与前列腺癌进展的关系;3、探究RacGAP1与雄激素受体的关系;4、探究RacGAP1在前列腺癌中发挥作用的机制。研究方法一、寻找前列腺癌进展和转移中的差异基因1、使用多个GEO数据库,筛选转移性前列腺癌和原发性前列腺癌之间的差异基因,通过GO(Gene Ontology)功能分析,确定研究对象;2、使用TCGA、GEO数据库,探究RacGAP1与前列腺癌临床病理指标、患者预后的联系;3、使用我们的前列腺癌标本进行免疫组化实验,检测RacGAP1与前列腺癌指标的关系。二、RacGAP1在前列腺癌中的作用1、Western blot和RT-qPCR检测前列腺癌细胞系RacGAP1表达量;2、筛选RacGAP1 siRNA和过表达质粒,Western blot及RT-qPCR检测转染效率;3、使用MTS、EdU、Transwell和细胞划痕等实验,检测肿瘤细胞增殖、转移等能力。三、RacGAP1与雄激素受体的关系1、GEO数据库资料分析,探究去势/雄激素对RacGAP1表达的影响;2、使用LNCaP细胞检测RacGAP1是否具有雄激素反应性(剂量/时间);LNCaP细胞长时间剥夺雄激素培养,检测RacGAP1表达变化;3、干扰/过表达AR,检测RacGAP1表达变化;4、软件预测RACGAP1基因启动子区域有无雄激素反应元件(Androgen Responding Elements,ARE);5、ChIP实验探究AR是否可以直接结合到RacGAP1基因启动子上。四、RacGAP1在AR信号通路介导的前列腺癌进展中是否发挥作用通过拯救实验,检测RacGAP1在AR介导的前列腺癌细胞增殖中是否发挥作用。五、RacGAP1在前列腺癌中的作用机制1、Western blot检测RacGAP1对细胞周期蛋白的影响

关键词：前列腺癌 AR信号通路 rho蛋白 RacGAP1

烟曲霉β-1,3-葡聚糖合成酶在分子调控及真菌感染中的作用

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中国真菌学杂志 2017年第5期12卷 309-311,317页

作者：张曦韩黎中国人民解放军疾病预防控制所医院感染监控中心北京100071

烟曲霉是最为常见的重要病原真菌之一,可引起侵袭性曲霉病、变应性支气管肺曲霉病、曲霉肿以及严重过敏性哮喘等多种疾病,病死率高。β-1,3-葡聚糖是烟曲霉细胞壁的主要骨架成份,也是重要免疫原性因子,由β-1,3-葡聚糖合成酶催化生成,... 详细信息

烟曲霉是最为常见的重要病原真菌之一,可引起侵袭性曲霉病、变应性支气管肺曲霉病、曲霉肿以及严重过敏性哮喘等多种疾病,病死率高。β-1,3-葡聚糖是烟曲霉细胞壁的主要骨架成份,也是重要免疫原性因子,由β-1,3-葡聚糖合成酶催化生成,该酶主要由催化亚基Fks蛋白和调节亚基rho1蛋白组成,rho1可利用自身活性状态转化和修饰调控β-1,3-葡聚糖的合成,也可能通过控制肌动蛋白骨架重排影响Fks胞内转位和功能。该文对β-1,3-葡聚糖的合成的分子调控机制与烟曲霉及其他病原真菌感染进行综述。

关键词：烟曲霉 β-1,3-葡聚糖天然免疫应答 rho蛋白