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基于Rho/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞迁移的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：范淑月吴璐蔚孙彤彤倪钰莹高婧崔颖刘敏北京中医药大学中医学院

目的：探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞(DCs)迁移的抑制作用及其潜在机制。方法：分离并培养小鼠骨髓源性DCs，显微镜观察不同时期细胞形态变化，流式细胞术检测CD11c＋比例，鉴定DCs纯度；麻黄细辛附子汤(1、2、5、10、20、40、50... 详细信息

目的：探讨麻黄细辛附子汤对小鼠树突状细胞(DCs)迁移的抑制作用及其潜在机制。方法：分离并培养小鼠骨髓源性DCs，显微镜观察不同时期细胞形态变化，流式细胞术检测CD11c＋比例，鉴定DCs纯度；麻黄细辛附子汤(1、2、5、10、20、40、50、100 mg·mL-1)处理细胞24 h，细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测麻黄细辛附子汤对细胞增殖的影响，筛选给药浓度；脂多糖(LPS)造模后，将DCs分为空白组、模型组、麻黄细辛附子汤组(2、4、8 mg·mL-1)，流式细胞术检测各组细胞表面分子CD80、CD86、主要组织相容性复合物Ⅱ分子(MHC-Ⅱ)表达；Trans-well小室观察细胞迁移情况；酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞表面趋化因子C-C-基元受体7(CCR7)、趋化因子C-X-C-基元受体4(CXCR4)含量；免疫荧光法(IF)检测细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)表达；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Ras同源基因家族成员A(rhoA)、rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(rock1)mRNA表达；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测rhoA、rock1蛋白表达。结果：与空白组比较，模型组CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达显著升高(PrhoA、rock1 mRNA和蛋白表达升高(PrhoA、rock1 mRNA和蛋白表达降低(PRho/ROCK信号通路活性影响细胞骨架改变有关。

关键词：麻黄细辛附子汤 Rho/ROCK信号通路变应性鼻炎树突状细胞细胞迁移

Rho/ROCK信号通路在精子抗冷冻损伤中的作用

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中华男科学杂志 2019年第4期25卷 322-328页

作者：田稼张绍华马珂赵宝运颜贝裴成斌周岳王红红王红燕马良宏张欣宗宁夏医科大学总医院宁夏人类精子库/宁夏医科大学生育力保持教育部重点实验室宁夏银川750004 宁夏医科大学临床学院宁夏银川750004 广东省计划生育专科医院人类精子库广东广州510600

目的:探讨Rho/ROCK信号通路在人精子抗冷冻损伤中的作用,为高效精液冷冻保护剂的研制提供理论依据。方法:选取健康精液25份,每份精液分为新鲜组、对照组与rho通路抑制剂组(抑制剂组)。检测冷冻前后各组精液精子活力、精子存活率、精子... 详细信息

目的:探讨Rho/ROCK信号通路在人精子抗冷冻损伤中的作用,为高效精液冷冻保护剂的研制提供理论依据。方法:选取健康精液25份,每份精液分为新鲜组、对照组与rho通路抑制剂组(抑制剂组)。检测冷冻前后各组精液精子活力、精子存活率、精子膜完整率、正常形态精子百分率、精子DNA碎片指数(DFI)、精子顶体酶活性及精子线粒体膜电位变化;免疫荧光染色检测rhoa/rock蛋白在精子中的表达。结果:抑制剂组精液冷冻复苏后精子活力[(57.50±6.83)%vs(51.20±7.70)%,P=0.002]、精子存活率[(60.24±5.53)%vs(52.87±5.07)%,P=0.001]、精子膜完整率[(67.10±4.43)%vs(59.78±5.56)%,P=0.001]、正常形态精子百分率[(7.46±1.28)%vs(4.83±1.11)%,P=0.001]、精子DFI[(18.87±4.07)%vs(27.64±6.64)%,P=0.001]、精子线粒体膜电位(63.11±2.97 vs 56.30±4.28,P=0.001)指标均明显优于对照组;抑制剂组冷冻后精子顶体酶活性与对照组差异无统计学意义(98.30±11.33 vs 97.65±9.31,P>0.05)。免疫荧光染色显示rhoa/rock蛋白在精子头、颈部广泛表达。结论:Rho/ROCK信号通路在精子冷冻损伤中具有一定作用,抑制其通路活性可明显提高精子抗冷冻损伤的能力。

关键词： Rho/ROCK信号通路抑制剂精子冷冻保存

急性一氧化碳中毒迟发性脑病与Rho/ROCK信号通路研究进展

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中华劳动卫生职业病杂志 2020年第12期38卷 956-960页

作者：黄艳青彭争荣中南大学湘雅医院高压氧科 410008

急性一氧化碳中毒迟发性脑病(DEACMP)是急性一氧化碳中毒经救治恢复至正常后,逐渐出现的脑神经功能障碍,表现为智力障碍、锥体外系症状。本文介绍DEACMP和Rho/ROCK信号通路,并分析了DEACMP的病理生理机制与Rho/ROCK信号通路相关研究进展... 详细信息

急性一氧化碳中毒迟发性脑病(DEACMP)是急性一氧化碳中毒经救治恢复至正常后,逐渐出现的脑神经功能障碍,表现为智力障碍、锥体外系症状。本文介绍DEACMP和Rho/ROCK信号通路,并分析了DEACMP的病理生理机制与Rho/ROCK信号通路相关研究进展。rho/rock通路在介导脑缺氧、细胞凋亡、免疫调节反应、氧自由基、神经细胞损伤等DEACMP发病机制中具有重要的作用,值得进一步深入研究。

关键词：一氧化碳中毒迟发性脑病鸟苷三磷酸一氧化碳中毒迟发性脑病 Rho/ROCK信号通路

Rho/ROCK信号通路对生精小管样结构重构的作用及机制研究

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Rho/ROCK信号通路对生精小管样结构重构的作用及机制研究

作者：孙梦迪遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:研究Rho/ROCK信号通路对体外生精小管样结构重构的影响及相关分子机制,为明确男性不育的分子机制及其治疗提供理论基础。方法:1.睾丸细胞团培养:取10日龄C57/BL6小鼠睾丸酶解消化为单细胞悬液,重聚后添加人工合成血清替代物(Knock ... 详细信息

目的:研究Rho/ROCK信号通路对体外生精小管样结构重构的影响及相关分子机制,为明确男性不育的分子机制及其治疗提供理论基础。方法:1.睾丸细胞团培养:取10日龄C57/BL6小鼠睾丸酶解消化为单细胞悬液,重聚后添加人工合成血清替代物(Knock Out Serum Replacement,KSR)进行三维(3 dimensions,3D)立体培养;2.Rho/ROCK信号通路在生精小管样结构重构中的作用:添加rock分子抑制剂Y27632和rho蛋白激动剂Bradykinin(BK),将实验分为control组(阴性对照组)、KSR(阳性对照组)、KSR+Y27632组和BK组,利用免疫荧光技术检测支持细胞(Sertoli cells,SCs)、管周肌样细胞(Peritubular myoid cells,PTMs)、睾丸间质细胞(Leydig cells,LCs)、生殖细胞(Germ cells,GCs)定位情况及生精小管样结构重构情况;3.利用免疫荧光技术检测支持细胞、生殖细胞增殖情况;4.添加BK培养2周后观察紧密连接标志物Claudin11和ZO-1表达情况;5.Real-time PCR检测rho GTPase、rock分子m RNA表达水平;6.Western Blot检测Rho/ROCK信号通路下游分子MLC/p-MLC蛋白表达水平;探讨Rho/ROCK信号通路在生精小管样结构重构中的作用及机制;7.分离提取10天小鼠睾丸支持细胞,培养3d后利用免疫荧光技术鉴定支持细胞纯度;8.将分离的支持细胞分为RPMI 1640组(cont组)、KSR组、FBS组、KSR+Y27632组、BK组,相差显微镜下观察Y27632和BK分别处理后Rho/ROCK信号通路对支持细胞管状结构形成的影响;9.对cont组和BK组标本进行转录组测序,并对其结果进行生物信息学分析寻找差异基因。利用显著上调的差异基因Cxcl5受体抑制剂进一步探讨Rho/ROCK信号通路对生精小管样结构形成的作用。结果:1.将立体培养的细胞团脱水包埋,行石蜡切片染色。免疫荧光结果显示,与阳性对照KSR组相比,添加rock激酶抑制剂Y27632后,支持细胞极性消失,管周肌样细胞由最初的线性、连续性排列变为圆形散在分布,睾丸间质细胞、生殖细胞、未分化型精原细胞、初级精母细胞零散分布,层粘连蛋白表达受抑。添加rho GTPase激动剂BK后,支持细胞具有极性,管周肌样细胞位于支持细胞外侧排列呈线性,有睾丸索样结构形成。睾丸间质细胞位于生精小管样结构之间,未分化型精原细胞、初级精母细胞位于生精小管样结构基底部或管腔内,Laminin呈线性分泌;2.Y27632抑制支持细胞、生殖细胞增殖,prho GTPase m RNA表达明显增多,prock基因表达明显下降,prho GTPase、rock基因表达水平升高,pRho/ROCK信号通路参与生精小管样结构重构;2.Rho/ROCK信号通路参与支持细胞管状结构的形成;3.Cxcl5/CXCR2可能通过与Rho/ROCK信号通路相互作用参与生精小管样结构重构。

关键词： Rho/ROCK信号通路生精小管支持细胞管周肌样细胞睾丸间质细胞 Cxcl5

基于“IL-34”-Rho/ROCK信号通路探讨生地黄水煎总提物对动脉粥样硬化的作用分析

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中国药学杂志 2019年第8期54卷 624-631页

作者：刘艳宾秦洁洁杨树涵陈红伟邢永生张文才河南省新乡市中心医院心内一科河南新乡453000 河南省新乡市中心医院冠心病监护病房河南新乡453000 郑州大学第一附属医院心内科郑州450000

目的观察生地黄水煎总提物对动脉粥样硬化(AS) Apo E-/-小鼠脂质斑块的改善作用以及对"IL-34"-rho/rock通路的影响。方法①动物实验:将40只Apo E-/-小鼠分成空白对照组(CTL组)、模型对照组(Model组)、5μg·g^(-1)生地黄干预组(Reh-L组)... 详细信息

目的观察生地黄水煎总提物对动脉粥样硬化(AS) Apo E-/-小鼠脂质斑块的改善作用以及对"IL-34"-rho/rock通路的影响。方法①动物实验:将40只Apo E-/-小鼠分成空白对照组(CTL组)、模型对照组(Model组)、5μg·g^(-1)生地黄干预组(Reh-L组)和10μg·g^(-1)生地黄干预组(Reh-H组)。空白对照组小鼠给予普通饲料,其余组小鼠腹腔注射人血清低密度脂蛋白(LDL) 2周,并喂以高脂饲料。连续灌胃4周,检测小鼠血脂指标,并计算AS指数(AI)。②细胞实验:将RAW264. 7细胞分为空白对照组(con组)、ox-LDL组、IL-34组和Reh组;油红O染色观察泡沫细胞形成,检测细胞内胆固醇酯含量和胆固醇流出率。免疫荧光染色法、qRT-PCR法和Western blot法检测rho A和rock1表达量。结果①动物实验:Reh-H组小鼠外周血TC、TG、LDL-C、内皮素-1(ET-1)、白介素-34(IL-34)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)水平、AI值以及AS斑块面积比低于Model组和Reh-L组,而HDL-C水平高于Model组和Reh-L组(P rho A和rock1表达量较Model组和Reh-L组降低(P rho A和rock1蛋白表达量较con组和ox-LDL组细胞增加(P rho A和rock1蛋白表达量较IL-34组细胞明显减少(P Rho/ROCK信号通路抑制巨噬细胞吞噬脂质形成泡沫细胞,从而有效地预防AS的形成和进展。

关键词：动脉粥样硬化生地黄 IL-34 Rho/ROCK信号通路 RAW264. 7巨噬细胞

基于Rho/ROCK信号通路探讨补肾养精颗粒改善早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢功能的机制

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中华中医药杂志 2021年第5期36卷 2678-2683页

作者：张芳师伟刘震刘金星山东中医药大学第一临床医学院济南250014 山东中医药大学附属医院妇科济南250014

目的:基于Rho/ROCK信号通路探讨补肾养精颗粒治疗早发性卵巢功能不全的机制。方法:选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组,模型组,补肾养精颗粒低、中、高剂量(1.75、3.50、7.00g/kg)组,补佳乐组。HE及Masson染色观察大鼠卵... 详细信息

目的:基于Rho/ROCK信号通路探讨补肾养精颗粒治疗早发性卵巢功能不全的机制。方法:选定动情周期正常的60只SD雌性大鼠,随机分为空白组,模型组,补肾养精颗粒低、中、高剂量(1.75、3.50、7.00g/kg)组,补佳乐组。HE及Masson染色观察大鼠卵泡数目及纤维化情况;ELISA检测大鼠血清FSH、LH、IL-1、ET浓度;RT-PCR检测卵巢组织中rhoa、rhob、rhoc的表达;Western Blot检测rhoa、rhob、rhoc、rock1、rock2、TGF-β、VEGF的表达;免疫组化检测caspase-3的表达。结果:模型组成熟卵泡数目显著减少、闭锁卵泡数目显著增加、纤维化显著(Prhoa、rhoc、rock1、TGF-β、caspase-3的表达水平显著升高(Prho/rock通路的表达,降低IL-1、ET、TGF-β及促凋亡因子的caspase-3表达,改善血清FSH及VEGF蛋白水平,减少卵巢纤维化及卵泡闭锁,改善卵巢功能。

关键词： Rho/ROCK信号通路补肾养精颗粒早发性卵巢功能不全卵巢纤维化卵巢功能卵泡转化生长因子-β 血管内皮生长因子

麝香通心滴丸对高血压大鼠血管内皮功能及Rho/ROCK信号通路的影响

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中国医科大学学报 2020年第6期49卷 485-489,504页

作者：李立杰葛华陈曦鲁伟王月陈克研沈阳医学院附属中心医院心内科沈阳110024 中国医科大学实验动物部沈阳110122

目的探讨麝香通心滴丸对自发性高血压大鼠血管内皮的作用及其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法SPF级自发性高血压大鼠20只及同类正常血压大鼠10只,随机分为正常血压组(对照组)、自发性高血压模型组(SHR组),麝香通心滴丸组(STX组),每组10... 详细信息

目的探讨麝香通心滴丸对自发性高血压大鼠血管内皮的作用及其对Rho/ROCK信号通路的影响。方法SPF级自发性高血压大鼠20只及同类正常血压大鼠10只,随机分为正常血压组(对照组)、自发性高血压模型组(SHR组),麝香通心滴丸组(STX组),每组10只。观测各组大鼠血压变化;检测大鼠血清中一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血管中内皮素-1(ET-1)、血管内皮生长因子(VEGF)含量;实时PCR检测血管组织中ET-1及VEGF mRNA的表达;利用Western blotting检测血管组织中Rho/ROCK信号通路相关蛋白rhoA、rock及MLC蛋白的表达。结果与SHR组比较,STX组大鼠血压明显降低;SOD活性及NO含量显著增加,而MDA水平却明显降低;ET-1及VEGF蛋白及mRNA水平明显降低,差异均有统计学意义(均PrhoA、rock及MLC蛋白表达明显降低,差异均具有统计学意义(PRho/ROCK信号通路相关蛋白表达有关。

关键词：麝香通心滴丸自发性高血压血管内皮功能 Rho/ROCK信号通路

中药调控Rho/ROCK信号通路抑制肿瘤转移的研究进展

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环球中医药 2023年第4期16卷 790-795页

作者：何阳高西京薛喜梅孙建飞陕西中医药大学咸阳712000 陕西中医药大学附属医院普外科

Ras同源基因(Ras homolog gene,rho)/rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(rho-associated coiled coil-forming protein kinase,rock)信号通路与肿瘤的发生发展有密切联系,rho/rock通路被异常激活后rho/Rac蛋白与下游效应子合作并激活特定的信号网络,可直接或间接影响癌细胞的运动,促进肿瘤的转移进程。近年来,许多研究表明具有清热解毒,活血化瘀的中药复方抗肿瘤疗效显著,并且单味中药的配伍在抗肿瘤中能起到协同作用,延缓肿瘤进展。本文基于Rho/ROCK信号通路介导肿瘤转移的理论视角,将中药复方及单味中药作用于rho/rock通路的具体机制进行总结,发现中医药经Rho/ROCK信号通路对肿瘤转移产生疗效的可能机制包括:抑制肿瘤血管生成拟态、降低血管通透性、减少癌细胞的增殖、促进癌细胞凋亡、恢复细胞极性并诱导细胞骨架改变、减少细胞外基质降解抑制癌细胞侵袭。此外,将本文提及的中药复方和单体总结成表,以方便读者查阅。本文针对目前研究领域的现状进行分析与评价,旨在为研究提供一定的参考。

关键词：中药 Rho/ROCK信号通路增殖凋亡侵袭细胞骨架肿瘤转移机制研究

Rho/ROCK信号通路在眼科疾病发生发展中的作用研究进展

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国际眼科杂志 2021年第4期21卷 640-643页

作者：郝一宪魏慧霞郭大东毕宏生山东中医药大学中国山东省济南市250355 山东省中西医结合眼病防治重点实验室山东省高校中西医结合眼病防治技术强化重点实验室山东中医药大学眼科研究所中国山东省济南市250002 山东中医药大学附属眼科医院中国山东省济南市250002

眼科疾病的发生发展与细胞生理功能和眼组织功能异常密切相关,其中相关信号通路的调控发挥了重要作用。Rho/ROCK信号通路可参与多种细胞事件,包括诱导细胞骨架重组、细胞黏附、细胞增殖和血管生成,并可在细胞周期进展、细胞分化和细胞... 详细信息

眼科疾病的发生发展与细胞生理功能和眼组织功能异常密切相关,其中相关信号通路的调控发挥了重要作用。Rho/ROCK信号通路可参与多种细胞事件,包括诱导细胞骨架重组、细胞黏附、细胞增殖和血管生成,并可在细胞周期进展、细胞分化和细胞凋亡中发挥显著作用。研究表明,Rho/ROCK信号通路在眼组织中分布广泛,其异常活化可影响眼组织的正常生理功能,与眼病的发生发展关系紧密。本文对Rho/ROCK信号通路在眼科疾病发生发展中的作用简要综述,为临床治疗眼病提供思路。

关键词： Rho/ROCK信号通路眼病作用机制调控