检索结果-南通市图书馆

作者：贾玉艳西北农林科技大学

学位级别：硕士

一种新型的载体系统——细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)已经发展成为构建复杂基因组文库的重要方法。BAC文库在基因组研究中起着关键作用，对BAC的修饰在分析和研究基因体内和体外的功能和表达方面也有很重要的... 详细信息

一种新型的载体系统——细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome，BAC)已经发展成为构建复杂基因组文库的重要方法。BAC文库在基因组研究中起着关键作用，对BAC的修饰在分析和研究基因体内和体外的功能和表达方面也有很重要的作用。利用red系统进行的基因同源重组技术扩展了BAC文库的应用范围，并为转基因动物研究克服转基因表达的“位置效应”提供了新的思路。本研究的目的就是构建具有高产奶性能的关中奶山羊基因组DNA的BAC文库，及利用red重组系统将天然的人组织型纤溶酶原激活剂(ht-PA)的编码序列置换掉BAC克隆中的β-酪蛋白的编码序列，用β-酪蛋白的调控序列指导ht-PA的表达，以消除转基因动物外源基因的“位置效应”, 为制备表达ht-PA的动物乳腺生物反应器提供一个有效的载体。本论文由2部分组成: 1. 用脉冲电泳技术分离大片段DNA，以电透析法回收DNA后,与用BamHI酶切和CIAP（牛小肠碱性磷酸酶）脱磷的pBeloBAC11载体连接，然后电击转化感受态细胞DH10B，得到了关中奶山羊基因组的部分BAC文库，插入片段平均大小为30～40 kb。摸索了BAC载体制备、高分子量DNA制备、酶切、连接和电击转化等一系列环节对高效转化产生大片段DNA的BAC的影响，为整个文库的构建奠定了基础。 2．构建了两个携带Zeocin抗性的ht-PA的载体，一个含有牛生长激素polyA 信号 (Bovine growth hormone polyadenylation signal, BGHpA)，另一个没有BGHpA。Zeocin抗性基因含有真核和原核两个启动子，可以在真核和原核细胞中进行抗性筛选。用PCR方法获得上述两个载体的DNA片段，然后电击转化至含有BAC的*** DH10B细胞中，在λ red重组系统的作用下，与BAC发生同源重组，置换了BAC中β-酪蛋白的编码区。用PCR和基因序列分析技术对BAC克隆进行了鉴定，证明获得了在β-酪蛋白基因座定位整合天然ht-PA基因的阳性克隆。

关键词：山羊 BAC文库构建 red系统同源重组

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

red重组系统在痢疾杆菌基因敲除中的应用研究

引用

微生物学报 2003年第6期43卷 740-746页

作者：胡堃史兆兴王恒樑冯尔玲黄留玉军事医学科学院生物工程研究所

利用λ噬菌体的red系统在细菌中进行基因敲除的技术 ,最近发展较快 ,但多在大肠杆菌中进行。以alkA、wcaJ、yphF和dam 4个基因为例 ,分别在大肠杆菌和痢疾杆菌中利用red系统进行基因敲除。对于大肠杆菌 ,除dam基因外 ,其余 3个基因均能... 详细信息

利用λ噬菌体的red系统在细菌中进行基因敲除的技术 ,最近发展较快 ,但多在大肠杆菌中进行。以alkA、wcaJ、yphF和dam 4个基因为例 ,分别在大肠杆菌和痢疾杆菌中利用red系统进行基因敲除。对于大肠杆菌 ,除dam基因外 ,其余 3个基因均能被有效敲除 ,而在痢疾杆菌中只能敲除一个alkA基因。结果表明 ,为使该系统能有效地应用于痢疾杆菌和其它细菌 ,还需对该系统进行改进。

关键词： red系统基因敲除突变体重组系统痢疾杆菌

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

噬菌体重组酶介导的DNA同源重组工程

引用

微生物学通报 2021年第9期48卷 3230-3248页

作者：李瑞娟赵晓雨杨润雨刘洋颜富王海龙张友明符军山东大学微生物技术国家重点实验室山东青岛266237

来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于Lambda噬菌体的同源重组酶redα/redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50b... 详细信息

来源于噬菌体的遗传操作工具在基因工程中具有非常重要的地位,例如位点特异性重组酶、柯斯质粒DNA文库及同源重组酶等。其中,来源于Lambda噬菌体的同源重组酶redα/redβ和来源于Rac原噬菌体的同源重组酶RecE/RecT能够高效地介导35–50bp短同源臂之间的重组。基于噬菌体同源重组酶redα/redβ和RecE/RecT开发的DNA同源重组工程(Recombineering)能够对靶标DNA分子进行快速、精准、高效的修饰,不受限制性内切酶识别位点和DNA分子大小限制,已发展成为一种新型的基因工程技术。本文主要综述了噬菌体同源重组酶及其作用机制、在大肠杆菌及其他细菌中的应用和开发,以及在微生物次级代谢产物的挖掘、动植物转基因、病毒基因组克隆和修饰等方面的应用。原位激活沉默基因簇需要宿主特异性的DNA同源重组工程进行启动子和调控元件的修饰;异源表达次级代谢产物的首要步骤一般是通过RecET直接克隆大的DNA片段;动植物转基因复杂载体的构建效率在有了red同源重组系统以后有了革命性的发展;RecET直接克隆和red同源重组介导的感染性克隆构建和修饰方法,不仅有利于病毒基因组功能研究,同时也为载体疫苗开发提供了最优方案。

关键词：噬菌体同源重组酶同源重组工程 red系统 RecET系统次级代谢产物动植物转基因病毒反向遗传学

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基因敲除技术研究进展

引用

生物技术通报 2008年第2期24卷 80-82,92页

作者：李樊刘义何钢中南林业科技大学生命科学与技术学院中南林业科技大学生物环境科学与技术研究所长沙410004

基因中断技术是研究基因功能和实现基因的精确缺失重要手段。原核中断系统最近发展较快的是利用λ噬菌体的red系统在细菌中进行的基因敲除技术,但多在大肠杆菌中进行;真核中断系统属PCR介导的酵母基因中断技术和RNAi干涉技术发展最快。... 详细信息

基因中断技术是研究基因功能和实现基因的精确缺失重要手段。原核中断系统最近发展较快的是利用λ噬菌体的red系统在细菌中进行的基因敲除技术,但多在大肠杆菌中进行;真核中断系统属PCR介导的酵母基因中断技术和RNAi干涉技术发展最快。这几种中断技术都大大简化了实验操作,缩短了实验时间,在研究生物基因组中未知基因及蛋白质的功能等领域具有诱人的应用前景。

关键词：基因敲除 red系统酵母 RNAi干涉

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：