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耐辐射奇球菌recr和SSB蛋白的克隆表达及抗紫外功能

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应用与环境生物学报 2010年第3期16卷 328-331页

作者：常晓松杨澜付文娟赵清胡冉陈济安舒为群重庆第三军医大学环境卫生学教研室重庆400038 广州军区武汉总医院检验科武汉430070

recr和SSB蛋白是耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans)同源重组修复RecFOR途径的关键蛋白.以耐辐射奇球菌基因组为模板,PCR扩增recr和ssb基因片段,以质粒pET32a(+)为载体,构建重组质粒pET32a(+)-recr和pET32a(+)-ssb,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达,表达产物采用SDS-PAGE鉴定,同时,应用平板菌落计数法检测紫外辐照前后各组细菌生存率变化,研究recr和SSB蛋白在*** BL21(DE3)抗紫外线辐射中的作用.结果表明,recr和SSB能够克隆至pET32a(+)载体并在*** BL21(DE3)中诱导表达.紫外辐照生存率实验结果提示,recr和SSB蛋白能增强*** BL21(DE3)对紫外线辐射的抵抗能力.recr和SSB的成功表达及紫外抗性特点将为耐辐射奇球菌超强耐辐射机制的研究提供实验基础.

关键词： recr ssb 基因克隆耐辐射奇球菌紫外抗性

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耐辐射动球菌recO和recr基因的克隆表达及功能验证

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核农学报 2018年第9期32卷 1684-1691页

作者：李晓梅张丹燕乔嘉凯郭江峰浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018

为研究耐辐射动球菌Rec O和recr蛋白的抗紫外辐射损伤效应,本研究通过PCR扩增耐辐射动球菌rec O和recr基因的全长序列,构建重组质粒p GEX-2T-rec O和p GEX-2T-recr并转化到大肠杆菌*** BL21(DE3)中,IPTG诱导重组蛋白表达,Western Blot... 详细信息

为研究耐辐射动球菌Rec O和recr蛋白的抗紫外辐射损伤效应,本研究通过PCR扩增耐辐射动球菌rec O和recr基因的全长序列,构建重组质粒p GEX-2T-rec O和p GEX-2T-recr并转化到大肠杆菌*** BL21(DE3)中,IPTG诱导重组蛋白表达,Western Blot检测蛋白表达,测定紫外辐照前后*** BL21(DE3)、空载菌株及表达菌株的生存率,并采用实时荧光定量PCR技术检测工程菌中耐辐射动球菌rec O、recr基因及*** BL21(DE3)中Rec FOR途径相关基因(rec F、rec O、recr、rec A、rec G、ruv A、ruv B、ruv C、ssb)的表达情况。结果表明,Rec O和recr融合蛋白在大肠杆菌中成功诱导表达;当紫外辐照剂量大于8 J·m-2,导入p GEX-2T-rec O和p GEX-2T-recr的工程菌存活率均高于对照组,说明耐辐射动球菌recr和Rec O蛋白能增强*** BL21(DE3)对紫外辐射的抵抗能力;Rec O工程菌中rec F、recr、rec A、rec G、ruv A、ruv B、ruv C、ssb的表达明显高于对照组,recr工程菌中Rec FOR途径其他相关基因的表达与对照组差异均不显著,表明耐辐射动球菌recr和rec O基因可通过不同的调控路径提高*** BL21(DE3)的抗紫外辐射能力。本试验结果为耐辐射动球菌的耐辐射机制研究提供了一定的科学依据。

关键词：耐辐射动球菌 recO recr 紫外辐照实时荧光定量PCR

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功能型DNA重组修复蛋白质recr的体内分布示踪

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自然科学进展 2009年第7期19卷 704-710页

作者：邱洁芳潘学峰北京理工大学生命科学与技术学院北京100081

recr是参与大肠杆菌(***)同源重组的蛋白质,在真核生物中存在功能保守性组分.通过构建recr-yfp融合基因及其表达载体,对大肠杆菌菌体内recr蛋白的分布情况进行了活体观察.显微镜观察结果表明,recr蛋白一般在菌体的拟核区起作用.通过对... 详细信息

recr是参与大肠杆菌(***)同源重组的蛋白质,在真核生物中存在功能保守性组分.通过构建recr-yfp融合基因及其表达载体,对大肠杆菌菌体内recr蛋白的分布情况进行了活体观察.显微镜观察结果表明,recr蛋白一般在菌体的拟核区起作用.通过对比紫外线敏感性,Re cR-YFP在重组质粒上提高了recr缺陷型大肠杆菌的抗紫外线能力,表明重组质粒表达的融合蛋白recr-YFP具有生物活性,能够提高recr缺陷型大肠杆菌的存活率.

关键词： recr 黄色荧光蛋白DNA修复同源重组大肠杆菌

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耐辐射动球菌RecO、recr的克隆表达及抗紫外辐射损伤效应

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耐辐射动球菌RecO、RecR的克隆表达及抗紫外辐射损伤效应

作者：李晓梅浙江理工大学

学位级别：硕士

耐辐射动球菌(Kineococcus radiotolerans)是一种对电离辐射、紫外线耐受性极强的革兰氏阳性细菌,该菌可以在强碱、高盐、高金属离子浓度、高渗透压等极端环境下生存,其极端抗性是由于自身高效而准确的基因修复系统。RecFOR途径是细菌... 详细信息

耐辐射动球菌(Kineococcus radiotolerans)是一种对电离辐射、紫外线耐受性极强的革兰氏阳性细菌,该菌可以在强碱、高盐、高金属离子浓度、高渗透压等极端环境下生存,其极端抗性是由于自身高效而准确的基因修复系统。RecFOR途径是细菌主要的同源重组修复途径之一,主要由RecF、RecO、recr蛋白组成。到目前为止,*** RecFOR途径分子调控机理还未见报道。本论文选择***重组修复RecFOR途径的两个关键基因recO和recr,构建了*** recO、recr的原核表达体系,研究RecO、recr蛋白的抗紫外辐射损伤效应及其对宿主RecFOR途径相关基因的表达调控,为后续紫外生物防护的研究提供科学依据。生物信息学分析表明RecO、recr蛋白较为稳定,其二级结构中存在较多的无规则卷曲和α-螺旋,β-螺旋相对较少;利用SWISS-MODEL对RecO、recr进行同源模建,模建蛋白三级结构的3D模型,这为*** RecO和recr蛋白结构的进一步研究提供一定的帮助。通过PCR扩增耐辐射动球菌recO和recr基因的全长序列,构建重组质粒pGEX-2T-recO和pGEX-2T-recr并转化到大肠杆菌(Escherichia coli,***)BL21(DE3)中,IPTG诱导重组蛋白表达。结果显示:RecO融合蛋白在0.1 mmol/L IPTG,28℃诱导5 h时表达量最高;recr融合蛋白在0.5 mmol/L IPTG,30℃诱导2 h时表达量最高。采用UVC对重组菌做不同剂量的辐射处理,经辐射后*** pGEX-2T-recO、*** pGEX-2T-recr、*** BL21(DE3)和*** pGEX-2T的生长都受到抑制,当紫外辐射剂量大于8 J/m,*** pGEX-2T-recO、*** pGEX-2T-recr重组菌开始表现出明显的修复能力,存活率均在其空白对照之上,说明耐辐射动球菌recr和RecO蛋白能增强*** BL21(DE3)对紫外辐射的抵抗能力。利用实时荧光定量PCR技术检测重组菌中耐辐射动球菌recO、recr基因及*** BL21(DE3)中Rec FOR途径相关基因recF、recO、recr、recA、recG、ruvA、ruvB、ruvC、ssb的表达情况。结果显示:*** recr的表达量是*** recO表达量的15倍。RecO重组菌中recF、recr、recA、recG、ruvA、ruvB、ruvC、ssb的表达明显高于对照组,recr重组菌中RecFOR途径其它相关基因的表达与对照组差异均不显著,表明耐辐射动球菌recr和RecO基因通过不同的调控路径提高*** BL21(DE3)的抗紫外辐射能力。上述结果为耐辐射动球菌的耐辐射机制研究提供科学依据。

关键词：耐辐射动球菌 RecO recr 紫外辐射 DNA修复实时荧光定量PCR