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High Expression of ERCC1 Is a Poor Prognostic Factor in Chinese Patients with Non-small Cell Lung Cancer Receiving Cisplatin-based Therapy

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Chinese Journal of Cancer Research 2010年第4期22卷 296-302页

作者： Qing-zhi Guo Jie Wang Hua Bai Tong-tong An Meina Wu Jun Zhao Lu Yang Jian-chun Duan Yu-yan Wang Zhi-jie Wang Key laboratory of Carcinogenesis and Translational Research （Ministry of Education） Department of Medical Oncology Peking University Cancer Hospital ＆ Institute Beijing 100142 China

Objective： to determine the role of excision repair cross-complementing group 1 gene （ERCC1） and ribonucleotide reductase subunit M1 （RRM1） expression in predicting response and survival in Chinese patients with advanced stage non-small cell lung cancer （NSCLC） treated with platinum-based chemotherapy. Methods： Formalin-fixed, paraffin-embedded biopsy tissues were retrospectively obtained from 160 advanced NSCLC patients. mRNA expression levels of ERCC1 and RRM1 were determined by real-time pcr. Results： Associations between mRNA expression level of ERCC1 and RRM1 and clinic-pathologic parameters were analyzed. One handred and forty two （88.75%） specimens were successfully amplified. mRNA expression level of ERCC1 and RRM1 was negatively associated with tumor response. ERCC1 expression levels ranged from 0.01 to 78.79 [median 0.63, mean 4.25 and standard deviation （SD） 9.23] and RRM1 from 0.00 to 30.91 （median 0.63, mean 0.87 and SD 3.36）. By adopting cut-off values according to median expression levels, we found that MST in patients with low ERCC1 mRNA levels was significantly longer in overall population than in patients with higher levels （18.63 versus 13.69 months, log-rank 5.73, P=0.017）, but we did not found the survival benefit of the patients with low expression level of RRM1. （19.07 versus 14.88, log-rank 1.66, P=0.197）. Further, in the multivariable Cox regression model analysis we found that low level of ERCC1 expression, the presence of weight loss and target therapy, were significant prognostic factors for survival. Conclusion： ERCC1 expression is associated with patients’ survival in Chinese advanced NSCLC patients treated with platinum-based regimen and may serve as a biomarker in predicting tumor response and clinical outcome in the patient population.

关键词： ERCC1 RRM1 NSCLC Platinum-based chemotherapy mRNA realtime pcr

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肺炎性衰老的机制与白藜芦醇的干预研究

肺炎性衰老的机制与白藜芦醇的干预研究

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作者：孙涛复旦大学

学位级别：硕士

目的：应用基因芯片技术筛选炎性衰老特征性的炎症细胞因子与受体基因,以及白藜芦醇作用的靶基因,同时检测老年大鼠肺组织中炎性衰老特征性炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10 和 TNF-α mRNA表达水平及白藜芦醇的干预作用。探讨炎性衰老... 详细信息

目的：应用基因芯片技术筛选炎性衰老特征性的炎症细胞因子与受体基因,以及白藜芦醇作用的靶基因,同时检测老年大鼠肺组织中炎性衰老特征性炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10 和 TNF-α mRNA表达水平及白藜芦醇的干预作用。探讨炎性衰老在机体衰老中的作用,以及白藜芦醇干预衰老的可能机制方法：1、清洁级雄性健康SD大鼠30只,随机分为4m、24m和24m+白藜芦醇(Res)三组,每组各10只。自21月满当天开始,24m+Res组予Res(按60mg/kg/d,融于5ml蒸馏水中)灌胃;24m组给予等量蒸馏水灌胃,连续90天。分别取出各组大鼠的肺组织。(1)应用包含112个DNA的炎症细胞因子与受体基因芯片对4m、24m和24m+Res各组大鼠肺组织基因表达进行检测。提取等量的大鼠肺组织mRNA后,分别用cy-3、cy-5逆转录荧光标记,制作cDNA探针,混合后与上述微矩阵芯片杂交。用Scan Array 3000扫描仪扫描杂交信号荧光强度,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析,分别绘制4m、24m和24m+Res各组肺组织基因表达谱,对芯片资料进行统计分析以寻找待比较组之间有表达差异的基因。2、取各组大鼠肺组织,抽取总mRNA.采用realtime pcr法检测肺组织中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α mRNA表达水平。结果：1、在肺组织中,与4m组相比,24m组表达上调(信号比的对数值SLR>2)的促炎性反应细胞因子与受体基因10个：Cxcl2、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-1r Ⅱ、IL-6、IL-7、TNF、TNFsf4、TNFsf11,表达下调(SLR2)的抗炎细胞因子与受体基因有：IL-10、IL-10rα、 Ccl2、TGF-β3、TGF-βrII共5个,下调(SLR<-2)的促炎细胞因子与受体基因有：IL-1β、IL-6、TNF、TNFsf4共4个;上述各组之间的比较都具有统计学显著差异(P<0.05)。上述差异表达的炎症细胞因子与受体基因涉及白介素、趋化因子、肿瘤坏死因子等。2、24m组肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表达水平都显著高于4m组(P<0.01),而IL-10 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与24m组比较,24m+Res组TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达水平都明显降低(P<0.01);24m+Res组中IL-10 mRNA水平均显著高于24m组(P<0.01),与前面基因芯片结果相符合。结论：1、老年大鼠肺组织内存在促炎性细胞因子基因表达上调,抗炎性细胞因子基因表达下调,导致促-抗炎性细胞因子网络和促-抗炎反应体系平衡失调,这可能是肺炎性衰老发生的机制。2、Res通过下调促炎性细胞因子基因表达和上调抗炎性细胞因子基因表达,重塑促炎/抗炎细胞因子网络动态平衡,达到干预炎性衰老的目的。

关键词：炎性衰老基因芯片 realtime pcr 白藜芦醇肺炎症细胞因子网络

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VEGF转基因绒山羊的检测

VEGF转基因绒山羊的检测

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作者：毕兆伟内蒙古大学

学位级别：硕士

血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF),在人和动物的毛囊中可以表达,是毛乳头细胞的一种自分泌生长因子。研究表明,VEGF与动物毛囊发育和毛发生长密切相关。在VEGF转基因绒山羊的生产中,影响目的基因表达及... 详细信息

血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF),在人和动物的毛囊中可以表达,是毛乳头细胞的一种自分泌生长因子。研究表明,VEGF与动物毛囊发育和毛发生长密切相关。在VEGF转基因绒山羊的生产中,影响目的基因表达及其作用机理仍有待进一步检测和探索。本实验室在2012年通过体细胞克隆技术得到了一批转VEGF基因的转基因绒山羊。本研究通过对产绒量显著提高的一只转基因绒山羊(37号)和一只产绒量没有明显改变的转基因绒山羊(41号)进行测定,同时与来自同一细胞系的体细胞克隆羊(5号)进行对比,确定目的基因VEGF在转基因绒山羊体内的表达情况,进而为深入探索目的基因的作用机理提供实验依据。本研究在DNA、RNA、蛋白以及宏观水平对这三只转基因绒山羊进行检测,得到如下主要结果： 1.对三只绒山羊进行产绒量检测,37号羊抓绒后体重为37.5kg,产绒量为1095g;41号羊抓绒后体重为35kg,产绒量为460g;5号体细胞克隆羊抓绒后体重为36.5kg,产绒量为450g。· 2.通过pcr初步鉴定,37号羊和41号羊均为阳性,然后进行southern bolt检测,与pcr结果吻合。 3.本实验以Glucagon基因为内参,采用绝对定量pcr法检测目的基因的拷贝数。标准曲线为：Log2N(拷贝数)=-0.3881△Ct+0.3093(R2=0.9983,prealtime pcr和western blot检测,其结果与体细胞克隆羊进行对比。结果显示,在37号羊中,VEGF在皮肤中的RNA表达量和蛋白表达量分别为3.27和1.82倍,在血液中RNA表达量和蛋白表达量分别为0.49和1.02倍;在41号羊中,VEGF在皮肤中的RNA表达量和蛋白表达量分别为0.93和1.16倍,在血液中RNA表达量和蛋白表达量分别为0.24倍和0.86倍。 5.对37号、41号和5号羊皮肤做石蜡切片纵切,并进行免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下成像,并用显微镜自带分析软件对毛囊及其周围组织的荧光强度进行测量。结果显示,VEGF的荧光强度在37号羊的初级毛囊中是5号体细胞克隆羊的1.21倍,在41号羊中为1.07倍。 6.对37号、41号和5号羊皮肤做冰冻切片横切,并进行HE染色。结果显示,在一个毛囊簇中转基因绒山羊的初级毛囊数量为3个没有变化,而次级毛囊的数量有所变化。37号羊的绒毛比为13.78,41号羊的绒毛比为11.78,5号体细胞克隆羊的绒毛比则为9.89。以上结果显示,VEGF转基因绒山羊的目的基因具有皮肤组织表达特异性,且目的基因在皮肤组织的高表达可显著提高羊绒产量。本实验初步建立了对转基因动物各个水平检测的体系,为今后对转基因动物进行更深层次的研究打下了基础。

关键词：转基因绒山羊 pcr realtime pcr Southern bolt 拷贝数 Western blot 冰冻切片石蜡切片

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天然及氧化修饰高密度脂蛋白对HepG2细胞MSRG转录影响的初步研究

天然及氧化修饰高密度脂蛋白对HepG2细胞MSRG转录影响的初步研究

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作者：王鹏四川大学

学位级别：硕士

为研究代谢综合征(metabolic syndrome,MS)与动脉粥样硬化等疾病之间的关系，本研究室曾通过高糖膳食构建了高甘油三酯血症大鼠模型，其具有代谢综合征的基本特征。用该大鼠模型肝脏基因的差异表达序列片段筛选人肝脏cDNA文库后发现一... 详细信息

为研究代谢综合征(metabolic syndrome,MS)与动脉粥样硬化等疾病之间的关系，本研究室曾通过高糖膳食构建了高甘油三酯血症大鼠模型，其具有代谢综合征的基本特征。用该大鼠模型肝脏基因的差异表达序列片段筛选人肝脏cDNA文库后发现一条新的基因，国内外尚未有关于该基因的报道。该新基因被暂时命名为代谢综合征相关新基因(metabolism syndrome-related novel gene,MSRG)。为进一步了解MSRG与MS的关系，研究MSRG的功能，我室正在对影响MSRG转录因素进行系列研究。本文以HepG2细胞为研究对象，通过设计MSRG、β-actin引物及相应的Taqman探针，建立了realtimepcr定量检测基因转录水平的方法。对HepG2细胞内MSRG转录水平进行检测后，发现MSRG相对于β-actin为低转录基因。我们用天然高密度脂蛋白(native high density lipoprotein,N-HDL)及氧化修饰高密度脂蛋白(oxidized high density lipoprotein,OX-HDL)孵育HepG2细胞，观察对细胞MSRG转录的影响。结果发现：①在N-HDL 0～100mg/L组及OX-HDL 0～50mg/L组，MSRG转录随N-HDL及OX-HDL浓度的增加有下降趋势。与0mg/L组相比，MSRG在N-HDL 50mg/L、100mg/L组和OX-HDL 50mg/L组转录水平差异具有统计学意义(p＜0．05)。当浓度高于此范围，MSRG转录较最低水平有所升高。与N-HDL 100mg/L组相比，N-HDL 200mg/L组基因转录有所回升，但无统计学差异(p＞0．05);与OX-HDL 50mg/L组相比，OX-HDL 100mg/L、200mg/L组MSRG mRNA含量有增高趋势，且200mg/L组与50mg/L组间基因转录水平差异具统计学意义(p＜0．05)。②在N-HDL 0～24h组及OX-HDL 0～12h组，MSRG转录随时间延长有下降趋势。与0h相比，N-HDL 12h、24h、36h组基因转录降低(p＜0．05)，24h组MSRG mRNA含量最低;OX-HDL 6h、12h组基因转录较其0h组降低(p＜0．05)，12h组MSRG转录水平最低。当时间超过相应范围后，MSRG转录有回升倾向。与N-HDL 24h组相比，MSRG在N-HDL36h组转录有所回升，但无统计学差异(p＞0．05);OX-HDL 24h、36h组MSRG转录较其12h组有所回升(p＜0．05)。③分别用100mg/L N-HDL或OX-HDL孵育HepG2细胞12h后，MSRG转录水平均较对照组显著下降(p＜0．05)，但二者间无显著差异。N-HDL、OX-HDL组培养基总胆固醇浓度较孵育前下降，甘油三酯浓度较孵育前上升，但均无统计学差异(p＜0．05)。细胞内糖原、总胆固醇及甘油三酯浓度在三组间均无显著性差异。我们发现：在低浓度及短时间内，N-HDL及OX-HDL均可降低HepG2细胞MSRG的转录水平。N-HDL较OX-HDL作用更为明显，抑制转录作用的浓度及时间范围均宽于OX-HDL。培养基由于加入了高密度脂蛋白，MSRG转录下降的同时伴有培养基胆固醇、甘油三酯浓度的改变。细胞内糖原、总胆固醇和甘油三酯浓度未发生显著变化。N-HDL及OX-HDL影响HepG2细胞MSRG转录的机制尚需进一步研究。

关键词：高密度脂蛋白氧化修饰 HepG2细胞代谢综合征相关新基因 realtime pcr

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针药结合对缺血性脑损伤大鼠海马Caspase-9的mRNA表达的影响

针药结合对缺血性脑损伤大鼠海马Caspase-9的mRNA表达的影响

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作者：朱庆南京中医药大学

学位级别：硕士

目的：观察针药结合方法对脑缺血再灌注大鼠脑组织中重要凋亡启动蛋白酶的基因表达的影响,探讨针药结合拮抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的核心机制。为临床上采用针药结合疗法治疗脑梗死提供可参考的理论基础和客观依据。方法：以局灶性... 详细信息

目的：观察针药结合方法对脑缺血再灌注大鼠脑组织中重要凋亡启动蛋白酶的基因表达的影响,探讨针药结合拮抗脑缺血再灌注后神经元凋亡的核心机制。为临床上采用针药结合疗法治疗脑梗死提供可参考的理论基础和客观依据。方法：以局灶性脑缺血再灌注大鼠模型为研究对象,以针药结合为干预手段(针药结合组),并与单纯针刺干预(针刺组)和单纯药物干预(药物组)进行对照,观察干预治疗前后模型大鼠神经功能评分的变化,同时采用realtime pcr方法检测各组大鼠在干预治疗前后海马中重要凋亡启动蛋白酶Caspase-9的mRNA的表达变化情况。结果：干预后神经功能评分显示针刺组、药物组、针药组分值均低于模型组,差异有显著性(p0.05);3个治疗组均能明显抑制Caspase-9的mRNA的表达,其中针药结合组优于其它组。结论：1.针药结合是治疗缺血性脑血管病的有效手段,疗效优于单纯针刺和单纯药物。2.针药结合可通过更显著地抑制促凋亡蛋白酶Caspase-9的mRNA的表达而抑制受损脑组织的神经细胞凋亡。这可能是针药结合取得良好疗效的重要机制。

关键词：针药结合脑缺血 realtime pcr Caspase-9

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斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因的扩增、测序和cytb基因在斯氏狸殖吸虫不同虫期的表达

斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因的扩增、测序和cytb基因在斯氏狸殖吸...

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作者：王曼泸州医学院

学位级别：硕士

目的：扩增出斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb (cytochrome B)基因片段并测序,研究斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因在囊蚴期、30天幼虫期、60天童虫期、成虫期和虫卵期5个虫期的表达情况,分析该基因对吸虫遗传分类、虫期物质代谢及致病方面的意义。... 详细信息

目的：扩增出斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb (cytochrome B)基因片段并测序,研究斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因在囊蚴期、30天幼虫期、60天童虫期、成虫期和虫卵期5个虫期的表达情况,分析该基因对吸虫遗传分类、虫期物质代谢及致病方面的意义。方法：(1)提取斯氏狸殖吸虫成虫基因组DNA,同时分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的mRNA,并反转录为cDNA。基因组DNA和各虫期cDNA保存于-20℃。(2)用日本血吸虫线粒体cytb基因设计出斯氏狸殖吸虫的线粒体cytb基因的兼并引物,扩增出虫体囊蚴的总DNA,聚合酶链式反应(pcr)法扩增出斯氏狸殖吸虫cytb基因片段→电泳分离→提纯→连接→转化→挑菌→摇菌→送出测序。用所得的测序结果设计斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因片段的特异引物。(3) Blast与斯氏狸殖吸虫cytb有亲缘性的吸虫,并用DNAsis等软件分析这些吸虫的线粒体cytb基因,然后用树的方式表达它们的亲缘关系。(4)以5个虫期的cDNA为模板,特异引物为实验组引物,卫氏狸殖吸虫的18SrDNA基因引物作为内参引物做实时荧光定量pcr (realtime pcr)。根据所获得的结果判断斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因分别在5个虫期的表达情况并分析其意义。结果：(1)获得542bp的斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因片段,并将该基因片段纳入NCBI基因库中。根据该基因片段设计出一对斯氏狸殖吸虫线粒体cytb基因片段的特异引物CytbF:5’GGTTGCTTGATCATAACATTGG3’CytbR:5GACACTCTGGGTCGACCTTG5’(2)通过在Genebank数据库中Blast发现,斯氏狸殖吸虫的此段cytb序列与日本血吸虫(中国流行区虫种)、异盘并殖吸虫、哈氏并殖吸虫、卫氏并殖吸虫以及斜睾吸虫等有相似性,一共搜索到种7种具有同源性的虫种,对这7种吸虫线粒体cytb序列利用MEGA4计算遗传距离,采用最大简约法(MP)和邻位相连法(NJ)构建系统进化树,Bootstrap法检验,并用Clusterx软件对7种吸虫线粒体cytb序列进行多序列对比。结果显示,用NJ和MP方法构建的遗传系统进化树拓扑结构相似,同时用MEGA4软件对遗传距离进行分析计算上,所得遗传距离远近分布与所得遗传系统进化树结果一致。(3) realtime pcr结果显示除了虫卵期不见线粒体cytb基因的表达,其他虫期均有表达。结论：1.线粒体cytb基因可作为吸虫遗传进化分类的依据。2.线粒体cytb基因在斯氏狸殖吸虫不同虫期的表达情况与不同时期该虫对宿主的侵袭危害是成正相关的,也为以后的预防,诊断,治疗提供理论依据。

关键词：斯氏狸殖吸虫线粒体基因 cytb基因片段 T/A克隆 pcr RT-pcr DNAsis realtime pcr

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DEC1、TIAM1基因与口腔鳞癌复发的相关性研究

DEC1、TIAM1基因与口腔鳞癌复发的相关性研究

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作者：游镜民中南大学

学位级别：硕士

目的：研究DEC1、TIAM1基因在不同预后口腔鳞癌组织中的表达,从基因和蛋白水平研究DEC1、TIAM1与口腔鳞癌复发的关系;为口腔鳞癌的预后评估和治疗方案的选择提供参考依据。方法： 1、口腔鳞癌组织DEC1、TIAM1的表达收集中南... 详细信息

目的：研究DEC1、TIAM1基因在不同预后口腔鳞癌组织中的表达,从基因和蛋白水平研究DEC1、TIAM1与口腔鳞癌复发的关系;为口腔鳞癌的预后评估和治疗方案的选择提供参考依据。方法： 1、口腔鳞癌组织DEC1、TIAM1的表达收集中南大学湘雅医院口腔颌面外科2010～2012年期间经病理学明确诊断为口腔鳞癌病例（高、中低分化,Ⅰ-Ⅳ期,术前未行放、化疗）组织石蜡标本80例,正常口腔粘膜组织20例。采用免疫组化法检测两组标本中DEC1、TIAM1蛋白的表达情况。 2、DEC1、TIAM1的表达差异与口腔鳞癌复发、转移的关系收集中南大学湘雅医院口腔颌面外科2009～2012年期间经病理学明确诊断为口腔鳞癌病例（高分化,Ⅲ-Ⅳ期,术前未行放、化疗）组织石蜡标本56例,采用免疫组化法检测DEC1、TIAM1蛋白的表达情况;使用Image-Pro Plus6.0图像分析技术定量检测DEC1、IAM1蛋白表达的阳性单位（IOD值）。收集2009-2012年期间经病理学明确诊断为口腔鳞癌病例（高分化,Ⅲ-Ⅳ期,术前未行放、化疗）组织液氮冻存标本32例,采用realtime pcr检测DEC1mRNA、TIAM1mRNA的表达情况。所有数据采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析。结果： 1、口腔鳞癌组织DEC1、TIAM1的表达免疫组化结果：口腔鳞癌组织中DEC1、TIAM1的表达阳性率分别为92.50%、91.25%。正常口腔粘膜组织中,两者的表达阳性率分别为5.00%、10.00%,差异有统计学意义（P＜0.05）。口腔鳞状细胞癌组织中,DEC1、TIAM1在高、中低不同分化程度以及在有无淋巴结转移的口腔鳞癌之间阳性表达差异有统计学意义（P＜0.05）。 2、DEC1、TIAM1表达差异与口腔鳞癌复发、转移的关系免疫组化结果：DEC1、TIAM1在不同预后组口腔鳞癌（高分化,Ⅲ-Ⅳ级）组织中表达量差异均有统计学意义（P＜0.05）。1年内复发、转移组口腔鳞癌DEC1和TIAM1表达明显高于其他组,3年未复发、转移组中两者表达均最低。 realtime pcr检测结果：在口腔鳞癌组织细胞中DEC1mRNA和TIAM1mRNA含量明显高于正常组。在不同预后组间的含量比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。1年内复发、转移组DEC1mRNA和TIAM1mRNA表达明显高于其他组,3年未复发、转移组中两者表达均最低。结论： 1、DEC1与TIAM1蛋白定位于口腔鳞癌细胞胞浆中,在口腔鳞癌组织中的表达高于正常口腔粘膜。 2、1年内复发、转移组口腔鳞癌组织中DEC1mRNA和TIAM1mRNA的表达均明显高于其他组。DEC1和TIAM1基因的表达可能与口腔鳞癌的预后呈负相关。

关键词：口腔鳞癌 DEC1 TIAM1 复发转移免疫组化 realtime pcr

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肌肉生长抑制素（Myostatin）及其相关基因在绵羊肱二头肌发育中的表达分析

肌肉生长抑制素（Myostatin）及其相关基因在绵羊肱二头肌发育中...

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作者：刘晨曦新疆农业大学

学位级别：硕士

肌肉抑制素基因-Myostatin （MSTN） ,又称GDF-8,属TGF-β（transforming growth factor beta）超家族成员,是肌肉生长发育的负调节因子。对该基因表达的抑制可引起成肌细胞的过度增殖和肌纤维的肥大,从而引起骨骼肌增生。本实验以小尾... 详细信息

肌肉抑制素基因-Myostatin （MSTN） ,又称GDF-8,属TGF-β（transforming growth factor beta）超家族成员,是肌肉生长发育的负调节因子。对该基因表达的抑制可引起成肌细胞的过度增殖和肌纤维的肥大,从而引起骨骼肌增生。本实验以小尾寒羊×杜伯羊羔羊为实验动物,采集从出生到7周不同发育时期肱二头肌,利用realtime pcr技术对肌肉抑制素（myostatin, MSTN）及其相关基因胰岛素样生长因子I （insulin-like growth factorsI, IGF1）、胰岛素样生长因子II （insulin-like growth factors II, IGF2）、肌球蛋白重链II a（myosin heavy chain 2a, MHC2a）在出生后不同时期羔羊肱二头肌中的表达规律进行了定量分析。结果显示, IGF1、IGF2和MSTN基因出生后的表达趋势各不相同。其中,IGF-1表达水平最低,MHC2a表达水平最高;IGF2与MSTN表达水平相当;MSTN的表达于7天时表达水平最高,是出生时表达的3倍,随后于14天时急剧下降,于7周时降至最低水平;出生时IGF1的表达水平最高,随后于一周时降至出生时的一半,后期的表达变化不大;IGF2的表达水平于3周时表达最高,是出生时的两倍,在1周时最低。3周后骤然降低,呈现一个波浪型变化;MHC的表达出生时最高,于1周后降至原来的1/7,随后逐渐升高,但变化并不太大。 Myostatin基因的表达与IGF1、IGF2、MHC2a基因表达之间无显著相关性,提示Myostatin基因的表达与IGF1、IGF2、MHC2a之间并不存在紧密的调控机制;IGF1与MHC基因表达之间存在显著正相关,表明IGF1与MHC之间存在紧密的相互作用,这种调控机制有待进一步探讨

关键词： Myostatin 肱二头肌 realtime pcr 小尾寒羊×杜伯羊

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MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响

MTDH基因沉默对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖和化疗敏感性的影响

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作者：王勇河北医科大学

学位级别：硕士

目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，约占女性恶性肿瘤的23%，占女性癌症死亡人数的14%[1]。乳腺癌的发生、进展、转移及耐药是一个多基因、多要素共同作用的结果。现有研究表明：乳腺癌具有高度异质性，乳腺癌因分子表型不同对特定... 详细信息

目的：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，约占女性恶性肿瘤的23%，占女性癌症死亡人数的14%[1]。乳腺癌的发生、进展、转移及耐药是一个多基因、多要素共同作用的结果。现有研究表明：乳腺癌具有高度异质性，乳腺癌因分子表型不同对特定治疗的反应不同，乳腺癌的转归、预后也不同。伴随着分子生物学的高速崛起和各种高新生物技术的涌现，探讨乳腺癌发生及发展的分子机制，寻找相关的生物学标志物已成为医学研究热点。MTDH基因即转移粘附基因（metadherin，MTDH），又称星形胶质细胞上调基因-1（AEG-1），此基因过表达可能与乳腺癌的发生、进展及耐药有关。MTDH的过表达使乳腺癌细胞产生耐药性的具体机制尚不完全清楚，目前的研究提示可能存在以下机制：（1）MTDH使细胞从G1期进入S期，从而降低G期细胞的相对数量比，控制肿瘤细胞凋亡。（2）高表达的MTDH使多元抗药性基因（multidrug resistance gene1MDR1）高表达，而正是由于此种蛋白高表达增加癌细胞药物抗性，降低化疗药物浓度。因此对乳腺癌MTDH在细胞生物学行为中作用的探索以及将MTDH基因作为乳腺癌治疗的一个潜在靶点意义重大。本实验通过RNAi干扰技术抑制乳腺癌MCF-7/ADR细胞MTDH的表达，观察其对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖、转移及耐药性的影响，探讨MTDH基因在乳腺癌MCF-7/ADR细胞生物学活动中的作用，为MTDH-siRNA的个性化、靶向性治疗乳腺恶性肿瘤提供实验基础及理论依据。方法：本实验成功构建MTDH-siRNA-1、MTDH-siRNA-2、MTDH-siRNA-3、empty-siRNA四组干扰siRNA。用RNAi干扰技术使MTDH基因沉默。用realtime pcr法和Western Blot法测定沉默前后乳腺癌MCF-7/ADR细胞株中MTDH基因的mRNA及蛋白表达水平。用MTT法绘制沉默前后乳腺癌MCF-7/ADR细胞株的生长曲线。也通过MTT法检测沉默前后MCF-7/ADR细胞株对1mg/L阿霉素及8mg/L紫杉醇在24h时的药物敏感性。用SPSS13.0统计分析测定沉默前后MCF-7/ADR细胞株MTDH的mRNA、蛋白表达水平及药物敏感性是否存在差异。结果：1realtime pcr及Western Blot筛选沉默效果最佳的MTDH-siRNArealtime pcr结果表明：与未转染组相比，转染MTDH-siRNA-1、MTDH-siRNA-2、 MTDH-siRNA-3的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞内MTDHmRNA水平分别下降了46.88%、77.88%、30.12%，其中MTDH-siRNA-2对MTDHmRNA的表达干扰作用最明显（P0.05）。Western Blot结果表明：与未转染组相比，转染MTDH-siRNA-1、MTDH-siRNA-2、MTDH-siRNA-3的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞蛋白水平分别下降了84.81%、97.26%、75.26%，其中MTDH-siRNA-2对MTDHmRNA表达干扰作用最明显（P0.05）。2沉默前后MCF-7/ADR细胞株的MTDH mRNA表达水平的检测realtime pcr结果显示：转染MTDH-siRNA-2(0.2ug)、MTDH-siRNA-2（0.4ug）、MTDH-siRNA-2（0.8ug）的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞mRNA水平分别下降了63.22%、76.40%、87.06%，其中MTDH-siRNA-2（0.8ug）转染组对MTDHmRNA表达干扰效果最明显（P0.05)。转染MTDH-siRNA-2（24h）、MTDH-siRNA-2（48h）、MTDH-siRNA-2（72h）的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞mRNA水平分别下降了69.62%、81.44%、93.87%,其中MTDH-siRNA-2（72h）转染组对MTDHmRNA表达干扰效果最明显（P0.05)。3沉默前后乳腺癌MCF-7/ADR细胞的MTDH基因蛋白表达水平的检测Western Blot结果显示：转染MTDH-siRNA-2（0.2ug）、MTDH-siRNA-2（0.4ug）、MTDH-siRNA-2（0.8ug）的人乳腺癌MCF-7/AD

关键词：乳腺癌MCF-7/ADR细胞株 siRNA MTDH基因沉默 realtime pcr Western Blot MTT 耐药

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HER-2在胃癌中的表达及其与临床生物学行为的关系

HER-2在胃癌中的表达及其与临床生物学行为的关系

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作者：王华河北医科大学

学位级别：硕士

HER-2是一类表皮生长因子受体，在胃癌的发生发展中有着重要的作用。研究表明，HER-2表达阳性的胃癌有其特殊性，并在分子靶向治疗中表现出了良好的疗效。研究HER-2在胃癌中的阳性表达及分析其与胃癌生物学关系具有重要意义，为临床治... 详细信息

HER-2是一类表皮生长因子受体，在胃癌的发生发展中有着重要的作用。研究表明，HER-2表达阳性的胃癌有其特殊性，并在分子靶向治疗中表现出了良好的疗效。研究HER-2在胃癌中的阳性表达及分析其与胃癌生物学关系具有重要意义，为临床治疗胃癌提供新的治疗方法。目的：检测胃癌患者人类表皮生长因子受体(Human epidermal growth factor receptor-2HER-2)的表达，分析其表达及其与临床生物学行为的相关性。对比不同方法检测HER-2结果的一致性，对比术前术后HER-2结果的一致性，探讨胃癌异质性及IHC方法测定HER-2过程中的质控对HER-2表达的影响。方法：通过实时荧光定量pcr(realtime Polymerase Chain Reaction,realtime pcr)测得142例胃癌组织术前HER-2基因表达、通过免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）测得96例胃癌组织术前和277例胃癌组织术后HER-2蛋白表达，分析其与患者性别、年龄、肿瘤部位、Lauren分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、脉管瘤栓、神经受侵的相关性。对比不同方法检测HER-2结果的一致性，对比同一患者组织经IHC方法检测术前术后HER-2蛋白表达结果一致性，探讨胃癌异质性及IHC方法测定HER-2过程中的质控对HER-2蛋白表达的影响。结果：194例胃癌组织术前经过IHC方法测得HER-2蛋白过表达率11.702%;2277例胃癌组织术后经IHC测得HER-2蛋白过表达率为7.581%;3142例胃癌组织术前经过realtime pcr方法测得HER-2基因扩增率为12.676%;4对比同一胃癌组织术前、术后均应用IHC方法检测HER-2蛋白过表达率无统计学差异（t=0.948，P=0.349>0.05）;5对比同一胃癌组织术前应用realtime pcr方法测得HER-2基因扩增与术后应用IHC方法检测HER-2蛋白过表达率无统计学差异（t=-1.346，P=0.186>0.05）;6胃癌HER-2过表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、Lauren分型、脉管瘤栓、神经受侵无统计学差异（P>0.05），而与患者分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期具有统计学差异（P0.05），而随着浸润深度、淋巴转移、远处转移、TNM分期增加，HER-2蛋白过表达率随之增加，并且HER-2蛋白过表达率在中分化胃癌中所占比例较大;2术前、术后经过IHC方法检测HER-2蛋白过表达结果一致;3realtime pcr方法和IHC方法检测HER-2表达结果一致;4检测HER-2表达过程的严格质控可以明显改善检测结果;5胃癌的肿瘤异质性在严格的质控下，对于经IHC方法检测胃癌HER-2蛋白表达的影响较小，测得结果真实可靠。

关键词： HER-2 胃癌免疫组织化学 realtime pcr

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