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日常豆制品中抗草甘膦大豆转基因成分的realtime-pcr检测方法的建立和应用

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日常豆制品中抗草甘膦大豆转基因成分的Realtime-PCR检测方法的建...

作者：张文志北京工业大学

学位级别：硕士

本论文以大豆及其加工产品为对象,建立了用于快速检测豆制品中转基因大豆成份——抗草甘膦基因EPSPS及其表达元件的realtime-pcr检测法,并对市场上常见豆制品进行检测分析。该方法的建立,可为食品监管机构有效的管理转基因产品提供理论... 详细信息

本论文以大豆及其加工产品为对象,建立了用于快速检测豆制品中转基因大豆成份——抗草甘膦基因EPSPS及其表达元件的realtime-pcr检测法,并对市场上常见豆制品进行检测分析。该方法的建立,可为食品监管机构有效的管理转基因产品提供理论和实验依据和参考。聚乙烯吡咯烷酮(PVP)浓度对大豆基因组DNA提取的影响:对来自三个地区的大豆样本进行了分析,并对其中看家基因Lectin基因进行pcr反应和凝胶电泳分析,结果显示,0.1%以上PVP能有效的提高大豆基因组DNA提取质量,凝胶电泳分析结果中能够明显看到目标基因所在位置,条带清晰。酱油中抗草甘膦转基因大豆成分检测方法的建立:建立了利用RT-pcr反应(SybGreen法)对酱油中提取出的基因组DNA进行检测的方法,通过对提取出的基因组DNA进行RT-pcr检测分析显示,在以转基因豆粕为原料的酱油所提取出的基因组DNA中能够检测到CaMv35s启动子和Nos终止子调控元件,而外源基因EPSPS基因降解较严重,熔解曲线分析表明,RTpcr对转基因的检测获得了很好的特异性。RT定量pcr相对于传统pcr,具有快速、高通量、高选择性、高灵敏度的优势,在转基因食品的检测领域具有很大的潜力。市场上常见豆制品中抗草甘膦转基因大豆成分的检测:以自农贸市场的散装豆制品和来自超市中的袋装豆制品共28种为检测对象,利用RTpcr反应对其中抗草甘膦转基因大豆成分进行了检测。结果发现,11种袋装豆干类产品中有2种检测到抗草甘膦转基因大豆CaMv35s启动子、Nos终止子和EPSPS基因,1种检测到抗草甘膦转基因大豆CaMv35s启动子和Nos终止子。17种散装豆制品中只有1种检测到CaMv35s启动子、Nos终止子和EPSPS基因。28种样品中,在标签中明确标注原料为非转基因大豆的产品都未检测出抗草甘膦转基因大豆成分,未标注是否含转基因大豆原料的产品中部分检测出4种含抗草甘膦转基因大豆成分。

关键词：抗草甘膦转基因大豆 realtime-pcr PVP 豆制品

武汉献血人群抗-HCV ELISA检测反应性标本联合realtime-pcr的研究

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临床血液学杂志（输血与检验） 2014年第4期27卷 653-655页

作者：杨茹凃历波武汉血液中心检验科武汉430030

目的:对现有的2种国产抗-HCV ELISA试剂检出的反应性标本进行realtime-pcr扩增,对结果进行分析,比较2种方法的检出率。为制定ELISA检测结果假阳性的献血者献血资格的恢复措施提供依据。方法:对日常工作中的检测标本用2种抗-HCV ELISA两... 详细信息

目的:对现有的2种国产抗-HCV ELISA试剂检出的反应性标本进行realtime-pcr扩增,对结果进行分析,比较2种方法的检出率。为制定ELISA检测结果假阳性的献血者献血资格的恢复措施提供依据。方法:对日常工作中的检测标本用2种抗-HCV ELISA两步法试剂做初检,反应性结果再次双孔复试。对任何一种试剂经复试检测后仍为反应性的标本进行realtime-pcr扩增,对所有检测结果进行分析。结果:共检测无偿献血标本63 169份,其中检出抗-HCV反应性标本206份,对206份标本进行realtime-pcr扩增,共扩增出91例HCV-RNA阳性标本,53例科华试剂单反应性标本中仅2例HCV-RNA结果为阳性,41例新创试剂单反应性标本中6例HCV-RNA结果为阳性。ELISA试剂检出的标本S/CO值在不同的区间内的,都有HCV-RNA为阳性的标本。结论:ELISA试剂检测出的抗-HCV标本很多可能为假阳性,特别是单侧试剂呈反应性的标本。但即使ELISA检测S/CO值仅在灰区的单试剂反应性标本,仍不能排除为HCV感染者。

关键词：丙型肝炎病毒抗-HCV ELISA realtime-pcr

Detection of BmNPV multiplication in different tissues of highly resistant silkworm strain NB by realtime-pcr

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Detection of BmNPV multiplication in different tissues of hi...

inlA和inlB基因缺失对单核细胞增生性李斯特菌侵袭HT29结肠癌细胞的影响

华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流...

作者： Gao Lu,Chen KePing,Hu ZhiGang,Yao Qing (Institute of Life Sciences, Jiangsu University,Zhenjiang 212013,P. R. China School of medical technology, Jiangsu University, Zhenjiang 212001, P. R. China.)

To determine the mechanism by which highly resistant silkworm resists the attack of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV), we analyzed progression of infection by BmNPV in highly resistant silkworm NB?highly susceptible silkworm 306 and near isogenic line BC7. After orally administered with same dose of Wild-type BmNPV at 5th instar larvae,we detected copy numbers of virus in midgut, hemolymph and fat body at nine time points post infection by realtime-pcr respectively. Nearly same copy numbers of virus were detected in midgut of three silkworm strains at 2hour post infection (hpi). Infection in hemolymph was widespread by 12hpi, by which time the fat body also showed infection. After 72hpi, copy numbers of BmNPV in three tissues of silkworm NB and BC7 remained in low level. In contrast, marked amplification of BmNPV (nearly 108-fold higher in the hemolymph than silkworm NB) was observed in three tissues of silkworm 306. These results indicate that suppressing replication of virus in vivo is the main mechanism by which highly resistant silkworm shows antiviral activity against BmNPV

关键词： Bombyx mori nucleopolyhedrovirus resistance realtime-pcr

来源： cnki会议评论

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食品科学 2016年第23期37卷 166-172页

作者：刘武康陈国薇吴嫚丁承超谢曼曼刘箐上海理工大学医疗器械与食品学院上海200093

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其可以穿透多个宿主屏障,而内化素蛋白家族被认为是LM穿透宿主屏障过程中起重要作用的毒力因子。本研究利用同源重组的方法构建了LM野生菌株EGDe的inl A和i... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是人畜共患的食源性致病菌,其可以穿透多个宿主屏障,而内化素蛋白家族被认为是LM穿透宿主屏障过程中起重要作用的毒力因子。本研究利用同源重组的方法构建了LM野生菌株EGDe的inl A和inl B基因双缺失菌株,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测其主要毒力基因表达的变化,并以HT29结肠癌细胞为对象,研究inl A和inl B基因缺失对LM侵袭宿主细胞能力的影响。结果表明基因的缺失对其生长能力没有影响,但多个毒力基因的表达发生了不同程度的变化,同时发现inl A和inl B基因的缺失使LM侵袭HT29结肠癌细胞的能力显著下降(P<0.05)。本研究成功构建LM的inl A和inl B基因双缺失菌株,并初步研究了基因缺失对LM侵袭宿主细胞能力的影响,为深入研究内化素Inl A和Inl B在LM入侵宿主细胞过程中的具体作用提供了支持。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌内化素基因敲除 realtime-pcr 侵袭细胞

播娘蒿耐寒基因DsKIN1的克隆、序列分析及冷诱导表达分析

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应用与环境生物学报 2017年第3期23卷 467-473页

作者：田磊常斐斐秦世尚唐滋一陈麒名马晓瑞徐辉乔代蓉曹毅四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室成都610065

播娘蒿是极端耐寒的冷诱导植物,研究其低温胁迫下的冷响应基因对于揭示其抗寒性具有重要意义.根据拟南芥At KIN1和At KIN2同源比对,设计同源引物进行播娘蒿KIN基因克隆,通过RACE技术克隆得到Ds KIN1基因,利用Vector NTI11.5软件对其进... 详细信息

播娘蒿是极端耐寒的冷诱导植物,研究其低温胁迫下的冷响应基因对于揭示其抗寒性具有重要意义.根据拟南芥At KIN1和At KIN2同源比对,设计同源引物进行播娘蒿KIN基因克隆,通过RACE技术克隆得到Ds KIN1基因,利用Vector NTI11.5软件对其进行序列分析,采用realtime-pcr测定Ds CBF1、Ds CBF2、Ds COR和Ds KIN1基因在不同处理方式[整株低温处理、同一植株局部低温处理和局部未受低温处理(两部分植株)]下各时间段(0.2 h、0.5 h、1 h、2 h、6 h、12 h、24 h)的表达,采用String数据库预测分析与Ds KIN1相互作用的蛋白.结果显示,Ds KIN1基因序列全长为462 bp,开放阅读框ORF长度为198 bp,编码66个氨基酸,分子量(Mr)为6.61×10~3,理论等电点为9.10,亲水性好.播娘蒿Ds CBF1和Ds CBF2在0.2 h开始表达,在2 h达到最大,随后下降.在冷诱导0.2 h后,Ds CBF调控的耐寒基因Ds COR和Ds KIN1基因开始表达,均呈现上调的趋势.整株、局部冷诱导植株与同一植株上未受低温胁迫部位的耐寒基因Ds COR和Ds KIN1表达模式类似.此外发现与Ds KIN1相互作用的蛋白大部分为低温诱导蛋白、盐和渗透压胁迫响应的信号蛋白、与渗透调节有关的家族蛋白、RING-H2锌指蛋白2B以及未知蛋白等.本研究说明播娘蒿局部冷诱导时,冷信号可进行传递,使未受冷诱导部位获得耐寒性能.

关键词：播娘蒿 DsKIN1 基因克隆低温胁迫 realtime-pcr

BrdU标记大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨能力的变化

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第19期14卷 3421-3426页

作者：冯进益尤元璋李偏蔡志刚芮钢福建医科大学附属厦门第一医院骨科福建省厦门市361003

背景:BrdU标记是一种标记率高、标记简便的标记物,但其毒性报道不一。目的:观察BrdU标记对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨能力的影响。方法:直接贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,0.2%Brdu标记后检测其增殖能力、克隆形成能力;经... 详细信息

背景:BrdU标记是一种标记率高、标记简便的标记物,但其毒性报道不一。目的:观察BrdU标记对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖与成骨能力的影响。方法:直接贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,0.2%Brdu标记后检测其增殖能力、克隆形成能力;经成骨诱导液诱导培养3周后,利用茜素红染色,荧光免疫组织化学和RT-pcr观测标记前后骨髓间充质干细胞成骨能力的变化情况。结果与结论:Brdu标记后骨髓间充质干细胞克隆形成能力明显减弱,在克隆个数和面积上均小于正常对照组(Ppcr检测显示标记前后骨髓间充质干细胞在骨钙素基因的表达方面差异无显著性意义(P>0.05)。提示BrdU标记抑制骨髓间充质干细胞的克隆增殖形成能力,但不会降低其成骨分化能力,可以广泛应用于骨髓间充质干细胞作为种子细胞干细胞研究的示踪剂。

关键词：细胞示踪 BrdU 骨髓间充质干细胞组织工程 realtime-pcr

Wnt家族成员在TA2小鼠乳腺癌生成过程中基因表达变化规律

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中国肿瘤临床 2013年第7期40卷 371-374页

作者：刘芳孙保存张丹芳王进京董学易古强赵秀兰天津医科大学病理教研室天津市300070 天津医科大学附属肿瘤医院病理科

目的:研究乳腺癌生成过程中,Wnt家族成员表达的变化规律。方法:收集自发乳腺癌小鼠42只,记录其详细资料。采用基因芯片筛选正常TA2小鼠乳腺组织和自发乳腺癌TA2小鼠乳腺癌组织中的差异表达基因,随后用Real-time pcr进行验证,并检测TA2... 详细信息

目的:研究乳腺癌生成过程中,Wnt家族成员表达的变化规律。方法:收集自发乳腺癌小鼠42只,记录其详细资料。采用基因芯片筛选正常TA2小鼠乳腺组织和自发乳腺癌TA2小鼠乳腺癌组织中的差异表达基因,随后用Real-time pcr进行验证,并检测TA2小鼠乳腺癌形成过程中相关基因表达的变化。结果:TA2自发乳腺癌小鼠平均见瘤年龄为(336.706±85.05)d,平均分娩次数为(3.767±1.79)次。分娩次数最多者为7次,其平均见瘤年龄只有251.5 d。TA2小鼠基因芯片结果发现Wnt家族成员中,Wnt1、Wnt10b、Wnt5a、Wnt5b在正常乳腺组织和乳腺癌组织中表达具有差异。Real time pcr的结果证实了以上结果,并发现Wnt1、Wnt10b、Wnt5a在癌前病变和乳腺癌组织中表达高于正常乳腺组织,而Wnt5b在乳腺癌组织中表达低于正常乳腺组织。结论:Wnt1、Wnt5a、Wmt10b在TA2小鼠乳腺癌生成过程中起促进作用,而Wnt5b的作用可能是抑制小鼠乳腺癌的生成。

关键词： TA2小鼠基因芯片 realtime-pcr Wnt 自发乳腺癌

宫颈癌组织ICAM-1和VEGF表达与放疗敏感相关性研究

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中华肿瘤防治杂志 2014年第4期21卷 284-288页

作者：何爱琴李咏刘继斌张建兵蔡晶南通市肿瘤医院妇瘤科江苏南通226361 南通市肿瘤医院研究所江苏南通226361 南通市肿瘤医院病理科江苏南通226361 南通市肿瘤医院放疗科江苏南通226361

目的:研究细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管内皮生长因子(vascular endothalial growth factor,VEGF)在宫颈鳞癌组织中的表达及其与放疗敏感性的相关性。方法:选取2007-07-01-2008-06-30在南通市肿瘤医院妇瘤科住院行根治性放疗的60例宫颈鳞癌患者。采用realtime-pcr技术检测ICAM-1mRNA和VEGF mRNA在宫颈鳞癌组织中的表达,分析不同放疗敏感性患者ICAM-1mRNA和VEGF mRNA表达水平差异,探讨ICAM-1mRNA和VEGF mRNA之间的相关性。结果:宫颈鳞癌组织放疗前后ICAM-1mRNA表达水平分别为124.57±58.64和47.38±39.27,差异有统计学意义,P=0.008;VEGF mRNA的表达水平分别为152.75±66.92和73.46±54.41,差异有统计学意义,P=0.023;ICAM-1mRNA和VEGF mRNA的表达在放疗抵抗组和放疗敏感组中差异均有统计学意义,P值分别为0.027和0.009;近期疗效中,肿瘤消失组中ICAM-1mRNA和VEGF mRNA表达存在一定相关性,r=0.468,P=0.016;肿瘤未控组中ICAM-1mRNA和VEGF mRNA表达存在一定相关性,r=0.693,P=0.031。远期疗效中,肿瘤治愈组中ICAM-1mRNA和VEGF mRNA表达亦存在一定相关性,r=0.457,P=0.023;肿瘤复发组中ICAM-1mRNA和VEGF mRNA表达亦存在一定相关性,r=0.637,P=0.018。结论:ICAM-1高表达与宫颈鳞癌放疗抵抗性有关,并且与VEGF的表达在放射抵抗中具有一定的相关性。

关键词：宫颈肿瘤放射疗法癌鳞状细胞细胞间黏附分子血管内皮生长因子放疗敏感性 realtime-pcr

ATF3基因在正常小鼠脑组织中的表达定位研究

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云南大学学报（自然科学版） 2018年第4期40卷 814-819页

作者：崔畅范志祥钱忠义白娟娟王乐龙莉昆明医科大学基础医学院云南昆明650500

ATF3(activating transcription factor 3)作为压力诱导因子,在接受外界信号后能够迅速升高表达,调节靶基因,维持细胞稳态,因而被认为和多种疾病相关,关于ATF3在正常组织的功能目前并不清楚.为了确认ATF3在正常小鼠脑中是否表达,利用RT-... 详细信息

ATF3(activating transcription factor 3)作为压力诱导因子,在接受外界信号后能够迅速升高表达,调节靶基因,维持细胞稳态,因而被认为和多种疾病相关,关于ATF3在正常组织的功能目前并不清楚.为了确认ATF3在正常小鼠脑中是否表达,利用RT-pcr、realtime-pcr、Western blot和免疫组化方法检测了ATF3的表达.实验结果显示:ATF3 m RNA和蛋白在所有正常小鼠的额叶、顶叶、枕叶、颞叶、丘脑、小脑和海马等部位均有表达,且不同部位的ATF3 m RNA和蛋白表达量没有统计学差异.证明了ATF3在小鼠脑正常生理状态下能够稳定表达,提示该基因在正常小鼠脑中具有生理功能.

关键词：转录激活因子3(ATF3) RT-pcr realtime-pcr 免疫组化小鼠