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流感病毒检测能力考核结果分析

中国卫生检验杂志 2013年第3期23卷 676-678页

作者：冀林立祁美荣内蒙古鄂尔多斯市疾病预防控制中心检验科鄂尔多斯017000

目的:通过对流感病毒核酸考核盲样进行检测,及时找出问题,以确立简便、快速、特异的检测技术。方法:用RT-PCR法对10份考核盲样进行了检测,对不能确定型别的盲样用real-time PCR法重新检测。结果:根据国家流感中心的反馈结果,RT-PCR法检... 详细信息

目的:通过对流感病毒核酸考核盲样进行检测,及时找出问题,以确立简便、快速、特异的检测技术。方法:用RT-PCR法对10份考核盲样进行了检测,对不能确定型别的盲样用real-time PCR法重新检测。结果:根据国家流感中心的反馈结果,RT-PCR法检测10份盲样9份结果正确,3号盲样用RT-PCR法检测新甲型H1N1和人季节性H1均为阴性,用real-time PCR法复检为新甲型H1N1阳性。结论:real-time PCR法具有灵敏度高、特异性好、重复性好等优点,适用于流感疫情的快速诊断。

关键词：流感病毒检测能力考核 real—time PCR

小鼠CRABP2真核表达载体的构建及体外表达

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黑龙江畜牧兽医 2017年第6期 246-249,300页

作者：袁晶杜晋平杨军陶恒勋长江大学动物科学学院湖北荆州434025

为了进一步研究细胞视黄酸结合蛋白2(cellular retinoic acid-binding protein 2,CRABP2)基因在肌肉发育中的功能和作用机制,试验从成年小鼠肌肉组织中提取RNA,经反转录获得c DNA样本,RT-PCR扩增小鼠CRABP2基因的编码区,克隆入pc DNA3.1... 详细信息

为了进一步研究细胞视黄酸结合蛋白2(cellular retinoic acid-binding protein 2,CRABP2)基因在肌肉发育中的功能和作用机制,试验从成年小鼠肌肉组织中提取RNA,经反转录获得c DNA样本,RT-PCR扩增小鼠CRABP2基因的编码区,克隆入pc DNA3.1(+)真核表达载体中。经PCR扩增、双酶切和测序分析鉴定后提取去内毒素质粒,将其转染C2C12细胞,通过real-time PCR检测其在C2C12细胞中的表达情况。结果表明:pc DNA3.1-CRABP2真核表达载体成功构建及其在体外细胞有效表达。

关键词：细胞视黄酸结合蛋白2(CRABP2) 真核表达 C2C12细胞 real—time PcR 肌肉发育

LAMP技术在食源性病原微生物检测中的应用

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生命科学研究 2014年第2期18卷 140-144页

作者：陈传凌霄郭震邵筱张如胜魏泉德广东医学院中国广东湛江524023 广东医学院第二附属医院中国广东湛江524023 珠海市疾病预防与控制中心中国广东珠海519000

针对常见引起食物中毒细菌的特异保守基因设计环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立食源性病原微生物的检测方法。特异性及灵敏性试验显示,LAMP法最低检出限为10-5,real-time LAMP最低检出限为10-7,而普通PCR的检出下限仅为10-3... 详细信息

针对常见引起食物中毒细菌的特异保守基因设计环介导恒等温扩增(LAMP)引物,并以此套引物建立食源性病原微生物的检测方法。特异性及灵敏性试验显示,LAMP法最低检出限为10-5,real-time LAMP最低检出限为10-7,而普通PCR的检出下限仅为10-3;且LAMP全部反应在1 h内完成;LAMP反应结果可通过肉眼直接观测判定结果。LAMP快速检测常见食物中毒菌的方法初步建立,同时结合real-time LAMP,可提供更准确的检测结果并可实现仪器在线式实时监测。

关键词：食源性微生物 LAMP 奇异变形杆菌 real—time

SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测H5亚型禽流感病毒

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黑龙江畜牧兽医 2006年第11期 13-15页

作者：刘丽玲王秀荣陈化兰孙凯魏萍中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室/兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明：农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。

关键词： real—time RT—PCR H5亚型禽流感病毒 HA基因

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分子生物学技术在镰孢菌研究中的应用

农业系统科学与综合研究 2009年第2期25卷 181-187页

作者：魏巍许艳丽朱琳东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 中国科学院东北地理与农业生态研究所黑龙江哈尔滨150081

镰孢菌属是一类生态系统中广泛分布、种类丰富的真菌,扮演着一系列重要的生态角色。然而,镰孢菌属下分类中各个种的遗传多变性,为其在分类学、生态学以及植物病理学等领域的研究带来了困难。近年来,随着分子生物学技术的应用,使镰孢菌... 详细信息

镰孢菌属是一类生态系统中广泛分布、种类丰富的真菌,扮演着一系列重要的生态角色。然而,镰孢菌属下分类中各个种的遗传多变性,为其在分类学、生态学以及植物病理学等领域的研究带来了困难。近年来,随着分子生物学技术的应用,使镰孢菌在上述几个领域的研究得到了突飞猛进的发展。同工酶分析、限制性片断长度多态性(RFLP)、扩增片段长度多态性(AFLP)、核酸序列分析法、随机扩增多态性DNA(RAPD)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)以及实时荧光定量PCR(real-time QPCR)等分子技术在镰孢菌研究中均有应用。表1,参41。

关键词：镰孢菌 RFLP AFLP 核酸序列分析 RAPD DGGE real—time QPCR

烟草PVYreal-timePCR定量检测体系的建立及应用

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中国烟草科学 2010年第1期31卷 9-12页

作者：刘晓霞杨金广王凤龙钱玉梅申莉莉张帅王长栓黄瑾国家烟草专卖局烟草病虫害监测与综合治理重点开放实验室中国农业科学院烟草研究所青岛266101 中国农业科学院研究生院北京100081 广西壮族自治区烟草公司百色市分公司广西百色533000

马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草... 详细信息

马铃薯Y病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一,严重影响烟草的产量与品质。本研究利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,设计引物,以烟草肌动蛋白基因为内参,建立了烟草PVY的实时定量检测体系。获得的real-time PCR扩增基线平整,指数扩增明显,斜率大;稳定性和重现性好,变异系数小;循环阈值与PCR起始模板量对数之间存在良好的线性关系。与DAS-ELISA相比,该方法具有高效、灵敏、特异性强等优点,为从分子生物学水平上检测烟草中PVY提供了新的技术手段。

关键词： real—time PCR PvY 检测

转录因子TDF1对拟南芥雄性不育突变体atms1的温敏调控机制研究

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上海师范大学学报（自然科学版） 2014年第3期43卷 259-265页

作者：郑亚洁高贝夏群芳周树敏张卫上海大学生命科学学院上海市能源作物育种及应用重点实验室上海200444

TDF1作为MYB家族的转录因子,参与了胼胝质的降解过程,并控制绒毡层的分化从而影响着花粉粒的正常发育.以一株通过甲基磺酸乙酯(EMS)诱变Col-0野生型拟南芥获得的温敏雄性不育突变体atms1(ambient temperature-sensory male sterility1)... 详细信息

TDF1作为MYB家族的转录因子,参与了胼胝质的降解过程,并控制绒毡层的分化从而影响着花粉粒的正常发育.以一株通过甲基磺酸乙酯(EMS)诱变Col-0野生型拟南芥获得的温敏雄性不育突变体atms1(ambient temperature-sensory male sterility1)对温度敏感机制进行了研究.通过构建TDF1反义RNA表达载体,在atms1突变体背景下抑制TDF1的表达来观察突变体花粉育性的变化,发现在27℃时的atms1突变体花粉的育性得以恢复.这一结果表明在花粉发育的过程中TDF1对ATMS1m具有一定的调控作用.

关键词： atms1 温敏雄性不育 TDF1 花药育性 real—time PCR

HBV-DNA实时荧光定量检测与HBV免疫标志物结果相关性分析

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临床医学工程 2010年第11期17卷 61-62页

作者：杨小蓉陈小明丁彩屏秦建川陈少莲广东药学院附属第一医院检验科广东广州510080

目的通过对血清中乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的实时荧光定量PCR(real-timePCR)(荧光探针法)检测结果与乙肝免疫标志物相关性分析,从而探讨二者在临床诊断中的应用。方法采用real-timePCR法检测HBV-DNA,ELISA法检测血清HBV免疫标志物。结... 详细信息

目的通过对血清中乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)的实时荧光定量PCR(real-timePCR)(荧光探针法)检测结果与乙肝免疫标志物相关性分析,从而探讨二者在临床诊断中的应用。方法采用real-timePCR法检测HBV-DNA,ELISA法检测血清HBV免疫标志物。结果 121例乙型肝炎标本中,HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+阳性组患者有39例,血清HBV-DNA阳性率67%,平均浓度1.42×107IU/ml;HBsAg+,HBeAb+,HBcAb+阳性组患者有64例,血清HBV-DNA阳性率45%,平均浓度4.29×105IU/ml;HBsAg+,HBcAb阳性组患者有6例,血清HBV-DNA定量值均为<500;HBsAg+,HBeAg+,HBeAb+,HBcAb+有2例,血清HBV-DNA阳性50%,平均浓度2.96×l04IU/ml。结论血清中HBV-DNA定量检测结果与乙肝免疫标志物结合能更好地为临床提供准确可靠的诊断数据。

关键词： HBV—DNA real—time PCR:乙肝免疫标志物

死后不同时间对小鼠皮肤切创组织中CB_2R检测影响的研究

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中国刑警学院学报 2013年第1期 56-59页

作者：郑吉龙李晓娜张(山含) 温洪洋官大威中国刑警学院辽宁沈阳110035 中国医科大学辽宁沈阳110001

为观察不同死后间隔时间对CB2R检测的影响,本文应用Western blot和real-time RT-PCR技术检测了40只健康成年雄性BALB/c小鼠在生前皮肤切创5d处死后不同时间点对CB2R表达变化的影响。发现小鼠皮肤切创愈合过程中,CB2R表达变化具有时间规... 详细信息

为观察不同死后间隔时间对CB2R检测的影响,本文应用Western blot和real-time RT-PCR技术检测了40只健康成年雄性BALB/c小鼠在生前皮肤切创5d处死后不同时间点对CB2R表达变化的影响。发现小鼠皮肤切创愈合过程中,CB2R表达变化具有时间规律性,并且死后6h内CB2R稳定存在于皮肤组织中,有望用于皮肤损伤时间的推断。

关键词：皮肤损伤 CBWestern blot real—time RT—PCR死亡时间