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一起皮肤炭疽疫情病原的实验室检测及毒力基因鉴定

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中国人兽共患病学报 2013年第10期29卷 996-999,1005页

作者：谈忠鸣张忠献顾玲胡建利朱叶飞祁贤董晨汤奋扬周明浩鲍倡俊江苏省疾病预防控制中心南京210009

目的对2012年江苏省连云港市赣榆县一起皮肤炭疽疫情的病人临床标本及病牛肉标本进行快速分子诊断及毒力基因的鉴定。方法用real-time PCR方法对病人的血、焦痂标本及病牛肉标本进行炭疽杆菌染色体编码的rpoB基因及质粒PXO1、PXO2上pag... 详细信息

目的对2012年江苏省连云港市赣榆县一起皮肤炭疽疫情的病人临床标本及病牛肉标本进行快速分子诊断及毒力基因的鉴定。方法用real-time PCR方法对病人的血、焦痂标本及病牛肉标本进行炭疽杆菌染色体编码的rpoB基因及质粒PXO1、PXO2上pag、capA基因的检测,并对质粒上4种毒力基因(cya,pag,lef,cap)进行扩增并测序。结果病人焦痂标本和病牛肉标本中均检测出rpoB基因和质粒PXO1、PXO2基因,4种毒力基因的测序结果证实扩增序列为炭疽杆菌质粒基因片段,病人标本与病牛肉标本的基因序列完全一致。结论实验室检测结果证实此次皮肤炭疽疫情是由当地村民宰杀携带炭疽杆菌强毒株的病牛引起。

关键词：炭疽疫情分子检测 real—time PCR 毒力基因

单核细胞增生性李斯特菌分子生物学检测技术的研究进展

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食品工业科技 2014年第4期35卷 392-396页

作者：冯可胡文忠姜爱丽徐永平萨仁高娃大连理工大学生命科学与技术学院辽宁大连116024 大连民族学院生命科学学院辽宁大连116600

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是主要食源性致病菌之一,可引起李斯特菌病,感染严重者会出现致死现象。传统的单增李斯特菌检测方法耗时长,步骤繁琐。因此,特异性强,高效性以及简便的检测手段已成为研究热点。本文... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是主要食源性致病菌之一,可引起李斯特菌病,感染严重者会出现致死现象。传统的单增李斯特菌检测方法耗时长,步骤繁琐。因此,特异性强,高效性以及简便的检测手段已成为研究热点。本文综述了运用分子生物学手段对单核细胞增生性李斯特菌检测的研究概况,并对该技术未来发展趋势进行了展望。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 PCR real—time PCR 基因芯片检测技术

水稻根系不同强度干旱胁迫下5个基因表达分析

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华北农学报 2010年第2期25卷 51-55页

作者：马廷臣陈荣军余蓉蓉曾汉来张端品安徽省农业科学院水稻研究所安徽省水稻遗传育种重点实验室国家水稻改良中心合肥分中心安徽合肥230031 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室湖北武汉430070 中国科学院亚热带农业生态研究所湖南长沙410125

通过不同浓度的PEG处理,模拟不同强度的干旱胁迫,研究水稻幼苗根系中5个基因的表达情况,结果表明:不同强度干旱胁迫下,根系中各基因表达也各不相同,但是在轻度干旱和中等干旱胁迫下,主要以下调为主,少数表达上调,严重干旱胁迫下情况比... 详细信息

通过不同浓度的PEG处理,模拟不同强度的干旱胁迫,研究水稻幼苗根系中5个基因的表达情况,结果表明:不同强度干旱胁迫下,根系中各基因表达也各不相同,但是在轻度干旱和中等干旱胁迫下,主要以下调为主,少数表达上调,严重干旱胁迫下情况比较复杂,有基因以上调为主的(抗坏血酸过氧化物酶4基因、核内小RNAZ274基因、甲酸四氢叶酸连接酶基因),也有基因以下调为主的(木聚糖酶抑制子蛋白1前体基因),还有基因以上调为主,但是上调倍数不大,下调倍数很大(酸性内切几丁质酶基因);5个基因表达的日变化表现出6种类型,每种类型的日表达都是上下波动的;抗旱品种的水稻根系对不同强度的干旱可能采取不同的应对策略,对轻度干旱和中等干旱可能是减少不必要的能量和物质消耗,过度干旱、严重干旱胁迫下才调动大量抗逆相关物质,抵抗干旱的伤害。

关键词： real—time PCR 干旱胁迫基因表达变化根系

牛结核分枝杆菌Mce4E蛋白对牛肺泡巨噬细胞iNOs、TNF-α、IL-6和IL-12表达的影响

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中国农业大学学报 2007年第1期12卷 1-6页

作者：徐广贤赵德明周向梅尹晓敏杨建民中国农业大学动物医学院/国家动物海绵状脑病实验室北京100094

探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P0.05)。Mce4蛋白能够促使肺泡巨噬细胞分泌炎性细胞因子,并对肺泡巨噬细胞有抑... 详细信息

探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(Preal-time PCR方法检测显示,Mce4E蛋白能够促使牛肺泡巨噬细胞TNF-α和IL-6 mRNA的表达上调(P0.05)。Mce4蛋白能够促使肺泡巨噬细胞分泌炎性细胞因子,并对肺泡巨噬细胞有抑制作用,证实Mce4蛋白在分枝杆菌中具有重要的作用。

关键词：牛结核分枝杆菌 Mce4E蛋白牛肺泡巨噬细胞 real—time PCR

禽网状内皮组织增殖病病毒的实时荧光定量PCR检测

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中国兽医学报 2007年第6期27卷 795-798页

作者：赵丽青王树峰吴延功王志亮山东出入境检验检疫局

基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。整个检测过程2 h内可以完成,病毒的最低检出浓度为10-7,在特异性试验中,REV有特异性的... 详细信息

基于Light Cycler平台,利用SYBR GreenI染料能特异与双链DNA结合而发荧光的特性,建立了一种荧光PCR方法检测禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)的方法。整个检测过程2 h内可以完成,病毒的最低检出浓度为10-7,在特异性试验中,REV有特异性的扩增曲线,而禽流感病毒和阴性对照一样,没有特异性扩增。对REV患鸡各器官组织进行了荧光PCR检测,各脏器病毒含量从高到低依次是肝、脾、腺胃、肾、肌胃,肝脏中的病毒含量最高,肌胃中的病毒含量最少,肺中没有检测到病毒。基于SYBR GreenI的荧光PCR方法检测REV快速、敏感、特异性好,为开展REV病原学检测提供了一种快速、无污染的方法。

关键词：禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) real—time PCR 检测

运动强度对幼龄大鼠海马VEGF及其受体Flk-1 mRNA表达的影响

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神经解剖学杂志 2008年第2期24卷 189-194页

作者：娄淑杰刘瑾彦陈佩杰上海体育学院运动科学系上海200438

为了研究不同强度跑台运动对5周龄大鼠海马表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,Flk-1)受体mRNA水平的影响,5周龄雄性SD大鼠被随机分为对照组和小强度、中等强度、大强度... 详细信息

为了研究不同强度跑台运动对5周龄大鼠海马表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和胎肝激酶-1(fetal liver kinase-1,Flk-1)受体mRNA水平的影响,5周龄雄性SD大鼠被随机分为对照组和小强度、中等强度、大强度3个跑台运动组,并通过定量real-time PCR技术,观察不同强度跑台运动1周后大鼠海马内VEGF和Flk-1mRNA表达的影响。采用3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为管家基因内参,以样品中所测得的VEGF和Flk-1基因拷贝数除以该样品中内参基因拷贝数进行校正后,各组动物海马内VEGF mRNA相对水平分别是:对照组为2740±2229,小强度运动组为3599±2386(P<0.05),中等强度运动组为1654±1136,大强度运动组为1572±1071。各组动物海马内Flk-1mR-NA相对水平分别是:对照组为147±47,小强度运动组为281±182(P<0.01),中等强度运动组为208±100;大强度运动组为54±31。以上结果提示,大鼠海马内VEGF和Flk-1mRNA的表达受运动的调节,且与运动强度有关。小强度跑台运动可对VEGF和Flk-1mRNA的表达产生促进作用,而大强度运动则不影响VEGF和Flk-1mRNA的表达。

关键词： VEGF Flk-1 mRNA real—time PCR海马大鼠

MYL1基因mRNA选择性剪切体的鉴定及其在不同发育时期的蓝塘与长白猪骨骼肌中的表达

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广东农业科学 2010年第1期37卷 12-17页

作者：凌飞方伟杜红丽陈瑶生华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 中山大学生命科学学院广东广州510006

肌球蛋白轻链1基因(MYL1)的2个剪切体MLC1f及MLC3f在骨骼肌不同发育时期中发挥着重要作用。为进一步了解MYL1基因在猪骨骼肌发育过程中的重要作用,通过电子克隆、RT-PCR扩增及实时定量PCR方法克隆和鉴定了猪MYL1基因mRNA 5个选择性剪切... 详细信息

肌球蛋白轻链1基因(MYL1)的2个剪切体MLC1f及MLC3f在骨骼肌不同发育时期中发挥着重要作用。为进一步了解MYL1基因在猪骨骼肌发育过程中的重要作用,通过电子克隆、RT-PCR扩增及实时定量PCR方法克隆和鉴定了猪MYL1基因mRNA 5个选择性剪切体(MLC1f、MLC3f、MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C)。其中MLC5f-A、MLC5f-B和MLC5f-C是在猪背最长肌中鉴定到的MYL1基因的3个新转录本,目前在人、鼠等其它物种尚无这三种转录本的报道。结果表明,剪切体MLC3f在180日龄长白猪中的表达量最高,而剪切体MLC1f则是在90日龄蓝塘猪的表达量最高;剪切体MLC5f-A在蓝塘与长白猪中各发育时期的表达量都很低;除了剪切体MLC1f外,其余转录本的表达量均为随个体体重的增加而逐步增加。通过对MYL1基因不同选择性剪切体的鉴定,为其在骨骼肌不同发育阶段或组织类型特异性表达调控研究奠定了基础,为该基因功能的研究提供重要线索。

关键词：猪肌球蛋白轻链1基因选择性剪接体 RT—PCR real—time PCR

微囊藻和小球藻携带WSSV量的变化及对水体游离WSSV的影响

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南方水产科学 2014年第2期10卷 54-60页

作者：李凡曹煜成胡晓娟王善龙文国樑吴垠李卓佳大连海洋大学辽宁大连116023 中国水产科学研究院南海水产研究所、农业部南海渔业资源开发利用重点实验室、广东省渔业生态环境重点实验室广东广州510300

研究了铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)和蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)携带白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)数量变化及对水体游离WSSV量的影响。试验设置微藻高、低密度组和不加微藻的对照组,分别加入等量... 详细信息

研究了铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)和蛋白核小球藻(Chlorella pyrenoidosa)携带白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)数量变化及对水体游离WSSV量的影响。试验设置微藻高、低密度组和不加微藻的对照组,分别加入等量的WSSV粗提液,于第2、第24、第72和第120小时以实时荧光定量PCR检测藻液上清和沉淀藻体的WSSV数量。结果表明,微囊藻和小球藻可携带少量WSSV,且随时间延长而减少;微囊藻携带WSSV量与其细胞数呈显著正相关(P0.05);2种微藻均有促进水体WSSV数量消减的效果,且小球藻的消减效果优于微囊藻,对养殖对虾白斑综合症(white spot syndrome,WSS)的生态防控更有积极意义。

关键词：微囊藻小球藻 WSSV携带量 TaqMan real—time PCR

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盐芥EhKCR1基因的克隆及表达分析

生物技术通报 2013年第4期29卷 55-62页

作者：徐小静安会灵韦百阳周宜君冯金朝中央民族大学生命与环境科学学院北京100081

以山东生态型盐芥(EutremA halophilum)为试材,采用电子克隆及RT-PCR的方法,从中获得一个β-酮脂酰-CoA还原酶基因全长cDNA,命名为EhKCRI,GenBank登录号为JQ389855。EhKCR1cDNA长1 152 bp,含954 bp开放阅读框架,编码318个氨基酸。采用... 详细信息

以山东生态型盐芥(EutremA halophilum)为试材,采用电子克隆及RT-PCR的方法,从中获得一个β-酮脂酰-CoA还原酶基因全长cDNA,命名为EhKCRI,GenBank登录号为JQ389855。EhKCR1cDNA长1 152 bp,含954 bp开放阅读框架,编码318个氨基酸。采用生物信息学的手段对EhKCR1蛋白的保守结构域、疏水性和二级结构等进行了分析。EhKCR1蛋白具有NADH结合结构域[G(X)3GXG(X)3A(X)3A(X)2G]负责裂解的关键结构域[Y(X)3K]。序列比对和系统进化分析表明,盐芥EhKCRl基因与来源于拟南芥和油菜的KCR1亲缘关系最近,与单子叶植物来源的KCR1亲缘关系较远。real-time PCR分析表明EhKCRI受ABA和干旱明显诱导。推测EhKCRI与盐芥的抗逆有关。

关键词：盐芥 EhKCR1 电子克隆生物信息学分析 real—time PCR