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Optimization of PCR-SSCP reaction System and reaction conditions in Crataegus spp.

Agricultural Science & Technology 2017年第3期18卷 398-401页

作者：撒云俐那冬晨山西师范大学生命科学学院山西临汾041000

[Objective] This study was conducted to optimize PCR-SSCP reaction system and conditions for hawthorn （Crataegus spp.）. [Method] The chloroplast DNA and nuclear DNA of hawthorn leaf were extracted with improved CTAB method. Pdmers for the PCR amplification of chloroplast DNA and nuclear DNA were select- ed from eight pairs of candidate pdmers, and the PCR-SSCP reaction system and reaction conditions were optimized. The PCR products were detected by agarose gel electrophoresis, and the denatured PCR-SSCP products were analyzed by native polyacrylamide gel. [Result] Five pairs primers （psbA-tmH, ropB, ropL, rpoC1 and ITS2） were proved to be suitable for PCR-SSCP in hawthorn, including four for chloroplast DNA and one for nuclear DNA. The clear electrophoretogram of PCR- SSCP in hawthorn was obtained by performing electrophoresis in 0.5×TBE buffer, at 4 ℃ and 200 V for 3-4 h, using 6% native polyacrylamide gel （crosslinking ratio at 29：1）, and the PCR product had been mixed with an equal volume of loading buffer containing 1% NaOH （without glycerol） and denatured at 98℃ for 15 min. [Conclu- sion] The results may lay the foundation of SSCP analysis of hawthom.

关键词： Crataegus spp. PCR-SSCP Primers reaction. system reaction condi-tions

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