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登革2型病毒在raw264.7细胞和THP-1细胞中复制能力及免疫激活能力的比较

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医学理论与实践 2024年第17期37卷 2897-2901页

作者：牟小会吴家红张海龙匡贵榕贵州省安顺市人民医院生殖医学科 561000 贵州医科大学基础医学院病原生物学实验室贵州省安顺市人民医院医学检验科

目的:比较登革2型病毒(DENV2)在raw264.7细胞和THP-1细胞中的复制能力及DENV2对这两种靶细胞的免疫激活作用。方法:将DENV2病毒液与靶细胞(raw264.7细胞和THP-1细胞)分别孵育6h、12h、24h,孵育结束后收集细胞,Trizol法提取不同时间的细... 详细信息

目的:比较登革2型病毒(DENV2)在raw264.7细胞和THP-1细胞中的复制能力及DENV2对这两种靶细胞的免疫激活作用。方法:将DENV2病毒液与靶细胞(raw264.7细胞和THP-1细胞)分别孵育6h、12h、24h,孵育结束后收集细胞,Trizol法提取不同时间的细胞总RNA,检测RNA纯度和浓度后逆转录为cDNA,使用qRT-PCR检测样本中病毒目的基因DENV2 E及细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-β、ISG15、CCL2的mRNA相对表达量。结果:DENV2感染raw264.7细胞和THP-1细胞后,DENV2 E基因的表达量均显著上调(P细胞中的相对表达量一致;24h时,DENV2 E基因在raw264.7细胞中的相对表达量显著高于THP-1细胞。与未感染DENV2组相比,DENV2感染raw264.7细胞和THP-1细胞6h、12h、24h后,IL-1β、IL-6、TNF-α、ISG15、IFN-β、CCL2基因的相对表达量均显著升高(Praw264.7细胞中的相对表达量显著高于THP-1细胞。结论:DENV2在raw264.7细胞中的复制能力强于THP-1细胞的复制能力,且DENV2在raw264.7细胞中具有更强的免疫激活能力。

关键词： DENV2 raw264.7细胞 THP-1细胞复制能力免疫激活

H6N6亚型禽流感病毒感染raw264.7细胞炎症模型的建立

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经济动物学报 2024年第1期28卷 18-24页

作者：杨鑫王建俊徐浩李俊贤任涛欧德渊贵州大学动物科学学院铜仁市动物疫病预防控制中心

探讨H6N6亚型禽流感病毒的感染量、感染时间与被感染的raw264.7细胞炎性因子水平变化的相关性，为建立raw264.7细胞体外炎症模型提供参考。根据Reed-Muench法计算病毒滴度(TCID50)，以100 TCID50的H6N6亚型禽流感病毒感染raw264.7细胞2 ... 详细信息

探讨H6N6亚型禽流感病毒的感染量、感染时间与被感染的raw264.7细胞炎性因子水平变化的相关性，为建立raw264.7细胞体外炎症模型提供参考。根据Reed-Muench法计算病毒滴度(TCID50)，以100 TCID50的H6N6亚型禽流感病毒感染raw264.7细胞2 h，弃病毒液，加入含5%FBS的DMEM培养液继续培养，分别于12,24,48 h收集上清液或细胞，CCK8测定细胞活力；透射电子显微镜检测细胞超微结构；ELISA检测小鼠白介素-1β(IL-1β)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；qRT-PCR检测IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α m RNA表达水平。结果表明：H6N6感染各时间段细胞活力显著下降(P细胞中线粒体肿胀，自噬体增多；IL-1β、IL-2、IL-6和TNF-α含量显著升高(Praw264.7细胞模型，为进一步研究其致病机制提供参考。

关键词： H6N6亚型禽流感病毒 raw264.7细胞炎症模型

黄根化合物的分离及对脂多糖诱导raw264.7细胞炎症的影响

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滨州医学院学报 2024年第4期47卷 241-247,259页

作者：姜昕汤锦一付志攀王博雅王昱萱代现平滨州医学院药学院山东烟台264003

目的研究黄根乙醇提取物对脂多糖(LPS)诱导raw264.7细胞炎症模型的作用,并对其具有活性的乙酸乙酯组分的化学成分进行分离纯化。方法利用CCK-8法检测黄根化学成分对raw264.7细胞活性的影响。利用浓度为500 ng/mL的LPS诱导raw264.7细胞,... 详细信息

目的研究黄根乙醇提取物对脂多糖(LPS)诱导raw264.7细胞炎症模型的作用,并对其具有活性的乙酸乙酯组分的化学成分进行分离纯化。方法利用CCK-8法检测黄根化学成分对raw264.7细胞活性的影响。利用浓度为500 ng/mL的LPS诱导raw264.7细胞,以建立细胞炎症模型,Griess检测细胞上清液中一氧化氮(NO)水平,ELISA法检测细胞上清液IL-1β、TNF-α的含量,DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS水平。再通过溶剂提取法、硅胶色谱柱、高效液相色谱法等方法对黄根乙酸乙酯组分分离纯化。结果质量浓度在100μg/mL及以下的黄根醇提物、石油醚组分、乙酸乙酯组分、正丁醇组分和水组分对raw264.7细胞无毒性。与模型组比较,黄根醇提物、乙酸乙酯组分对细胞中NO、TNF-α、IL-1β和ROS的表达水平具有下调抑制作用。根据理化性质和波谱资料确定化合物结构,从黄根乙酸乙酯部位分离鉴别了4个化合物,根据理化性质和波谱资料确定化合物结构为甲基异茜草素-1-甲醚(1)、1,3-二羟基-2-乙氧甲基蒽醌(2)、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(3)、对苯二甲酸二(2-乙基己)酯(4)及实验证明分离得到单体不具抗炎活性在此不做赘述。结论黄根醇提物组、乙酸乙酯组可拮抗LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应,抑制炎症相关因子的表达。邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯和对苯二甲酸二(2-乙基己)酯为首次从该植物中分离。

关键词：黄根脂多糖 raw264.7细胞炎症一氧化氮活性氧炎症因子

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人参皂苷F2对LPS诱导raw264.7细胞炎症反应的改善作用

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现代食品科技 2024年第1期40卷 27-33页

作者：牛志强李琦刘亚男胡烨烨何姿良胡卫成陶永霞张迹新疆农业大学食品科学与药学学院新疆乌鲁木齐830052 淮阴师范学院生命科学学院江苏淮安223300 扬州大学医学院江苏扬州225109

作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激raw264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗... 详细信息

作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激raw264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗炎作用。细胞活力实验表明人参皂苷F2在100μmol/L内对细胞无毒性作用,为安全浓度范围。人参皂苷F2可以显著抑制LPS刺激raw264.7细胞NO释放,且呈剂量依赖性抑制(0~100μmol/L)。人参皂苷F2(50、100μmol/L)也呈剂量依赖性抑制一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达,100μmol/L时显著抑制iNOS和TNF-α的mRNA表达。经人参皂苷F2处理可显著下调iNOS蛋白表达,但对COX2蛋白表达无显著促进作用(P>0.05)。此外,经扫描电镜(SEM)观察,100μmol/L人参皂苷F2处理可以显著改善LPS刺激raw264.7细胞的细胞形态改变。蛋白印迹表明,人参皂苷F2提高了PDK1、AKT、IκB-α蛋白的表达,降低了AKT蛋白磷酸化、NF-κB的核易位。该文研究结果表明人参皂苷F2具有较好的抗炎作用,并可能通过AKT/IκB-α/NF-κB信号通路发挥其抗炎作用,可为相关天然抗炎药物的开发提供理论支撑。

关键词：人参皂苷F2 抗炎作用 raw264.7细胞

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raw264.7细胞泡沫化前后差异蛋白质组分析

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中国动脉硬化杂志 2009年第3期17卷 197-201页

作者：沈驰斌卢德赵沃兴德李晓娟江婷婷王科浙江中医药大学生命科学学院浙江省杭州市310053

目的应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究小鼠巨噬细胞raw264.7泡沫化前后蛋白质组的差异。方法体外培养raw264.7细胞,用氧化型低密度脂蛋白作用使其转变为泡沫细胞。分别提取raw264.7细胞泡沫化前后的细胞总蛋白,用荧光染料Cy3或... 详细信息

目的应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究小鼠巨噬细胞raw264.7泡沫化前后蛋白质组的差异。方法体外培养raw264.7细胞,用氧化型低密度脂蛋白作用使其转变为泡沫细胞。分别提取raw264.7细胞泡沫化前后的细胞总蛋白,用荧光染料Cy3或Cy5进行标记,与Cy2标记的内标等量混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱。采用DeCyder6.5软件进行差异蛋白质组分析,筛选出12个差异蛋白质。经质谱鉴定和分析,其中10个蛋白质得到鉴定。结果raw264.7细胞泡沫化后,应激蛋白70、二硫键异构酶、细胞质肌动蛋白和一种未命名的蛋白质表达量降低,而葡萄糖调节蛋白、烯醇酶、Eno1蛋白、Peroxiredoxin4、Stathmin1和BID蛋白表达量上升。结论本研究建立了巨噬细胞泡沫化前后蛋白质组图谱,并成功进行差异蛋白质组分析,从蛋白质组水平增加了对细胞泡沫化的机制认识,为细胞泡沫化形成动脉粥样斑块的干预研究提供新思路和新靶点。

关键词：泡沫细胞 raw264.7细胞蛋白质组

桉柠蒎油抑制脂多糖诱导的raw264.7细胞炎症因子产生的作用及其机制研究

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辽宁中医药大学学报 2024年第4期26卷 48-54页

作者：邱新宇颜丽珊康建英顾春宇王亦巍聂红梅孔静王晶肖莉段兴华张翼北京中医药大学北京102488 北京远大九和药业有限公司北京102433

目的探究桉柠蒎油(ELP)抑制脂多糖(LPS)刺激的raw264.7细胞炎症因子产生的作用及作用机制。方法构建LPS刺激的raw264.7炎症细胞模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的产生;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定... 详细信息

目的探究桉柠蒎油(ELP)抑制脂多糖(LPS)刺激的raw264.7细胞炎症因子产生的作用及作用机制。方法构建LPS刺激的raw264.7炎症细胞模型。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性;采用Griess法检测一氧化氮(NO)的产生;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定LPS处理后培养液中炎症因子的浓度;采用Western-blot法检测蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测LPS处理后核转录因子κB亚基(p65)、激活子蛋白1亚基(c-Jun)和干扰素调节因子3(IRF3)的入核情况。结果ELP在6.25~400μg/mL的剂量范围内对LPS处理的raw264.7细胞活力没有明显抑制作用。ELP(50~300μg/mL)能有效地抑制LPS诱导的raw264.7细胞NO、前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白介素-1β(IL-1β)和受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(Rantes)的产生。ELP能剂量依赖性地降低Toll样受体4(TLR4)信号通路关键蛋白kappa B抑制因子激酶α/β(IKKα/β)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)、p38、p65、核因子kappa B抑制蛋白α(IκBα)、c-Jun和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平。ELP同时能抑制LPS诱导的raw264.7细胞p65、c-Jun和IRF3的入核。结论ELP能剂量依赖性地抑制LPS诱导的raw264.7细胞炎症因子的产生,其作用机制与阻断TLR4/NF-κB、TLR4/AP-1和TLR4/IRF3信号通路有关。

关键词：桉柠蒎油脂多糖 raw264.7细胞炎症 Toll样受体4信号通路

ralb34k2-1刺激小鼠raw264.7巨噬细胞对蛋白质PTM代谢物修饰及DENV-2易感性的影响

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贵州医科大学学报 2024年第09期 1259-1268页

作者：代薇露胡欢覃燕春吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵州医科大学基础医学院现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白34k2-1(ralb34k2-1)刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(raw264.7细胞)胞内蛋白翻译后代谢修饰(PTMs)的变化及对2型登革病毒(DENV-2)易感性的影响。方法利用抗乙酰化、乳酰化、琥珀酰化、巴豆酰化和丙二酰化... 详细信息

目的探讨白纹伊蚊唾液蛋白34k2-1(ralb34k2-1)刺激的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(raw264.7细胞)胞内蛋白翻译后代谢修饰(PTMs)的变化及对2型登革病毒(DENV-2)易感性的影响。方法利用抗乙酰化、乳酰化、琥珀酰化、巴豆酰化和丙二酰化的泛特异性抗体，通过免疫印迹法(Western blot)检测ralb34k2-1蛋白刺激后不同时相的raw264.7细胞蛋白质翻译后代谢物修饰的情况，酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)检测细胞内外的乳酸含量；用2 mg/L ralb34k2-1预处理raw264.7细胞24 h后、继续培养2 d、再用DENV-2感染细胞，通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-qPCR)检测感染18 h和36 h后的病毒核酸变化，分析ralb34k2-1预处理后对病毒易感性的影响；检测感染前后胞内白细胞介素1β-(IL-1β)、白细胞介素10-(IL-10)、肿瘤坏死因子β-(TGF-β)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(Arg-1) mRNA的相对表达情况，分析ralb34k2-1预处理对细胞免疫状态及细胞极化的影响。结果胞内不同的代谢物对蛋白质的修饰程度主要表现为乳酰化修饰>乙酰化修饰>琥珀酰化修饰；在时相上，除琥珀酰修饰外，随时间的延长其余代谢物对蛋白质的修饰有增多的趋势，其中以6 h乳酰化修饰最多；ralb34k2-1刺激对细胞的乳酸产生无明显影响；经ralb34k2-1预处理后胞内DENV-E相对表达量较对照组高5倍以上，IL-10 mRNA的相对表达在感染前后均保持高水平(6～8倍);在感染前iNOS/Arg比值为3.46±1.59,但受ralb34k2蛋白预处理的细胞在感染后表现iNOS表达下调的趋势。结论蚊唾液ralb34k2蛋白可能通过调控PTM代谢物修饰的方式，改变细胞的免疫状态从而增强登革病毒的易感性。

关键词：白纹伊蚊蚊唾液蛋白34k2-1 巨噬细胞 raw264.7细胞蛋白翻译后修饰 2型登革病毒免疫调控

raw264.7细胞分化为破骨细胞的凋亡观察

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2015年第1期36卷 6-10页

作者：付应霄顾建红王怡袁燕刘学忠卞建春刘宗平扬州大学兽医学院江苏扬州225009 蚌埠医学院生物科学系安徽蚌埠233030

采用M-csF＋RANKL联合诱导raw264.7细胞分化为破骨样细胞（OCL），观察培养过程中的凋亡现象，了解其生长规律。在诱导培养的第5～9天，通过TRAP染色、检测TRAP基因表达水平、细胞骨架与胞核染色方法分析OCL凋亡状况。结果表明：体外... 详细信息

采用M-csF＋RANKL联合诱导raw264.7细胞分化为破骨样细胞（OCL），观察培养过程中的凋亡现象，了解其生长规律。在诱导培养的第5～9天，通过TRAP染色、检测TRAP基因表达水平、细胞骨架与胞核染色方法分析OCL凋亡状况。结果表明：体外培养成熟OCL短时间内即发生凋亡，表现为TRAP阳性细胞数减少，TRAP基因表达水平降低，细胞骨架结构破坏、胞核形态改变。

关键词： raw264.7细胞破骨样细胞凋亡

羊栖菜多酚通过核转录因子-κB/丝裂原活化蛋白激酶通路缓解脂多糖诱导的raw264.7细胞炎症反应

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食品科学 2022年第23期43卷 141-148页

作者：黄平洪静霞米杰张攀学李超杨文鸽宁波大学食品与药学学院浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室浙江宁波315211

目的:研究羊栖菜多酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞raw264.7细胞炎症反应的影响。方法:噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素(interleukin,... 详细信息

目的:研究羊栖菜多酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病细胞raw264.7细胞炎症反应的影响。方法:噻唑蓝法测定细胞活力;Griess法测定一氧化氮(NO)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应测定白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的基因相对表达量;流式细胞术测定细胞吞噬能力;蛋白免疫印迹法测定信号通路丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)和核转录因子(nuclearfactor,NF)-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果:羊栖菜多酚对raw264.7细胞的安全质量浓度范围为0~160μg/mL。与LPS组相比,羊栖菜多酚剂量依赖性降低巨噬细胞吞噬能力并抑制NO的生成。同时,羊栖菜多酚下调促炎细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和炎症诱导酶(iNOS、COX-2)的mRNA水平,且作用效果与给药剂量及LPS刺激时间相关。这些炎性介质的表达与羊栖菜多酚抑制p38 MAPK和NF-κB p65的激活有关。结论:羊栖菜多酚可通过减弱p38 MAPK和NF-κB p65信号通路的激活水平,抑制下游炎症介质的转录表达,从而缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应。

关键词：羊栖菜多酚 raw264.7细胞抗炎核转录因子-κB信号通路丝裂原活化蛋白激酶信号通路