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人参皂苷F2对LPS诱导raw264.7细胞炎症反应的改善作用

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现代食品科技 2024年第1期40卷 27-33页

作者：牛志强李琦刘亚男胡烨烨何姿良胡卫成陶永霞张迹新疆农业大学食品科学与药学学院新疆乌鲁木齐830052 淮阴师范学院生命科学学院江苏淮安223300 扬州大学医学院江苏扬州225109

作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激raw264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗... 详细信息

作为人参的主要生物活性物质,多数人参皂苷已被证实具有良好的抗炎作用,但是其抗炎机制研究较少,尤其是人参皂苷F2。因此,该研究基于脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激raw264.7细胞产生炎症,构建体外细胞炎症模型,探究人参皂苷F2的抗炎作用。细胞活力实验表明人参皂苷F2在100μmol/L内对细胞无毒性作用,为安全浓度范围。人参皂苷F2可以显著抑制LPS刺激raw264.7细胞NO释放,且呈剂量依赖性抑制(0~100μmol/L)。人参皂苷F2(50、100μmol/L)也呈剂量依赖性抑制一氧化氮合酶(iNOS)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的mRNA表达,100μmol/L时显著抑制iNOS和TNF-α的mRNA表达。经人参皂苷F2处理可显著下调iNOS蛋白表达,但对COX2蛋白表达无显著促进作用(P>0.05)。此外,经扫描电镜(SEM)观察,100μmol/L人参皂苷F2处理可以显著改善LPS刺激raw264.7细胞的细胞形态改变。蛋白印迹表明,人参皂苷F2提高了PDK1、AKT、IκB-α蛋白的表达,降低了AKT蛋白磷酸化、NF-κB的核易位。该文研究结果表明人参皂苷F2具有较好的抗炎作用,并可能通过AKT/IκB-α/NF-κB信号通路发挥其抗炎作用,可为相关天然抗炎药物的开发提供理论支撑。

关键词：人参皂苷F2 抗炎作用 raw264.7细胞

陈皮精油对脂多糖诱导的raw264.7细胞炎症的干预作用

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畜牧兽医学报 2024年

作者：刘玲史万玉李秀梅王明华翟向和周炜炜河北农业大学中兽医学院中国农业科学院饲料研究所农业农村部饲料生物技术重点实验室

基于脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的raw264.7细胞模型研究陈皮精油抗炎作用。通过Griess法检测一氧化氮（Nitric oxide，NO）分泌水平，采用Real-time PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor α，TNF-α）、白... 详细信息

基于脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的raw264.7细胞模型研究陈皮精油抗炎作用。通过Griess法检测一氧化氮（Nitric oxide，NO）分泌水平，采用Real-time PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor α，TNF-α）、白细胞介素 6（Interleukin-6，IL-6）、白细胞介素 1β（Interleukin-1β，IL-1β）和诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase，iNOS）、环氧化酶2（Cyclooxygenase 2，COX-2）mRNA的表达水平。结果显示，陈皮精油显著降低LPS诱导的raw264.7细胞释放NO的含量，抑制iNOS、COX-2、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达。综上所述，陈皮精油通过抑制炎症因子的分泌和表达，有效缓解由LPS诱导raw264.7细胞炎症反应。

关键词：陈皮精油抗炎 LPS raw264.7细胞

siRNA干扰TLR4影响两种酵母多糖处理raw264.7细胞NF-κB/MAPK信号通路的激活

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中国兽医科学 2024年第7期 974-981页

作者：杜蕊陈灰张宇飞李松建刘世雄李薛强徐子萱薛晨刘大程内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室包头市固阳县畜牧业技术服务中心

为了探究Toll样受体4(TLR4)在两种酵母多糖激活NF-κB/MAPK信号通路中发挥的作用，本研究利用CCK8法检测酵母β-葡聚糖和甘露聚糖的细胞毒性，并利用多种方法筛选效果最佳的TLR4 siRNA，然后利用ELISA、RT-qPCR方法检测相关炎症因子的... 详细信息

为了探究Toll样受体4(TLR4)在两种酵母多糖激活NF-κB/MAPK信号通路中发挥的作用，本研究利用CCK8法检测酵母β-葡聚糖和甘露聚糖的细胞毒性，并利用多种方法筛选效果最佳的TLR4 siRNA，然后利用ELISA、RT-qPCR方法检测相关炎症因子的分泌量及其m RNA表达量的变化，最后通过Western-blot检测NF-κB/MAPK信号通路关键蛋白磷酸化水平。结果显示，2.5～20μg/m L β-葡聚糖及2.5～50μg/m L甘露聚糖对raw264.7细胞的活力没有影响；TLR4 siRNA-2可以高效敲低TLR4 m RNA和蛋白表达水平；两种酵母多糖处理敲低TLR4的细胞后，IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α、NO分泌量及IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α、i NOSm RNA表达水平显著下降，NF-κB/MAPK信号通路关键蛋白p-P65、p-P38、p-ERK1/2、p-JNK和p-IκB水平显著降低。结果表明，两种酵母多糖可以通过TLR4调控NF-κB/MAPK信号通路及相关细胞因子的分泌，最终确定TLR4是两种酵母多糖发挥免疫调节作用的重要受体。

关键词：酵母β-葡聚糖酵母甘露聚糖 Toll样受体4 raw264.7细胞 NF-κB/MAPK信号通路

过表达溶质载体家族1成员5和敲低慢病毒载体构建及稳定转染raw264.7细胞株

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中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1414-1421页

作者：郭大鑫范苏苏朱振东侯建红张旋云南省第三人民医院/大理大学第二附属医院云南省昆明市650011 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室/现代生物医药产业学院云南省昆明市650500

背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供... 详细信息

背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的raw264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养raw264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与raw264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定raw264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染raw264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的raw264.7细胞株。

关键词：慢病毒载体溶质载体家族1成员5 SLC1A5 过表达敲低 raw264.7细胞稳转细胞株

叉分蓼多糖结构表征及其对LPS诱导raw264.7细胞炎症的抑制作用

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食品科学 2024年

作者：崔艳艳袁永旭郭明坤何文兵李明裴世春李大军通化师范学院食品科学与工程学院吉林省长白山食用植物资源开发工程中心抗体开发吉林省校企联合技术创新实验室吉林双正医疗科技有限公司吉林双正诊断用单克隆抗体科学家工作室吉林农业大学食品科学与工程学院

目的：为了探究叉分蓼多糖体外抗炎活性及其作用机制。方法：从叉分蓼（Polygonum divaricatum L.）中提取制得多糖（PSPDL），采用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）、高效液相色谱（HPLC）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、X射线衍射（XRD）... 详细信息

目的：为了探究叉分蓼多糖体外抗炎活性及其作用机制。方法：从叉分蓼（Polygonum divaricatum L.）中提取制得多糖（PSPDL），采用高效凝胶渗透色谱（HPGPC）、高效液相色谱（HPLC）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、X射线衍射（XRD）、核磁共振波谱（NMR）对其结构进行表征，并通过脂多糖（LPS）诱导raw264.7细胞炎症模型评估其体外抗炎活性及其作用机制。结果：PSPDL的相对分子质量为59.475 kDa，主要由甘露糖（Man）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcA）、半乳糖醛酸（GalA）、葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、阿拉伯糖（Ara）组成，摩尔比为1.69:4.95:1.04:21.79:19.01:31.68:19.84，是含有(1→4)-α-D-Glcp的α-吡喃型多糖；能够抑制炎症因子的释放及其相关mRNA的表达水平，改善氧化应激，下调p38、p-p38、IκB-α、p65和p-p65蛋白的表达水平。结论：PSDPL具有抗炎活性，其作用机制可能与调节炎症相关mRNA表达，调控MAPK/NF-κB信号通路相关，为叉分蓼多糖资源的开发与应用提供了科学依据。

关键词：叉分蓼多糖脂多糖 raw264.7细胞炎症 MAPK/NF-κB信号通路

红曲黄色素对LPS诱导的THP-1细胞和raw264.7细胞炎症的影响

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食品与发酵工业 2024年

作者：毛禹清高坤辉刘曾丽陈勉华天津科技大学食品科学与工程学院

为研究红曲黄色素MC、MS和AK的抗炎机理，从红曲菌CP-1固态发酵后得到的红曲米中提取分离出红曲黄色素MC，并使用TLC和HPLC进行纯度分析。构建2 μg/mL的脂多糖诱导人THP-1巨噬细胞和小鼠raw264.7巨噬细胞炎症模型，并进行形态学观察，... 详细信息

为研究红曲黄色素MC、MS和AK的抗炎机理，从红曲菌CP-1固态发酵后得到的红曲米中提取分离出红曲黄色素MC，并使用TLC和HPLC进行纯度分析。构建2 μg/mL的脂多糖诱导人THP-1巨噬细胞和小鼠raw264.7巨噬细胞炎症模型，并进行形态学观察，利用MTT法测定细胞活力，以MS和AK作为参比，实时荧光定量法和酶联免疫吸附试验测定红曲黄色素MC对脂多糖诱导的THP-1细胞和raw264.7细胞中IL-6和TNF-α的影响。结果表明，提取出的红曲黄色素MC纯度能达到98%以上，可用于细胞实验。6 μg/mL的MC、MS和AK诱导THP-1细胞24h后，细胞存活率均能达到90％以上，符合实验要求。6 μg/mL的MC、MS和AK处理THP-1细胞和raw264.7细胞24h后，在转录水平和翻译水平上均显著抑制了IL-6的表达（P细胞和raw264.7细胞中TNF-α的表达量（Praw264.7细胞TNF-α的分泌（P<0.01）。

关键词：红曲黄色素 THP-1细胞 raw264.7细胞抗炎作用促炎细胞因子

过表达溶质载体家族1成员5和敲低慢病毒载体构建及稳定转染raw264.7细胞株

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中国组织工程研究 2024年

作者：郭大鑫范苏苏朱振东侯建红张旋云南省第三人民医院/大理大学第二附属医院昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室/现代生物医药产业学院

背景：溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用，但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提... 详细信息

背景：溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用，但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的：构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体，以建立稳定转染的raw264.7细胞株，为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法：根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe II酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒，对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果；pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染，获得慢病毒原液进行包装和滴度测定；在此基础上，通过体外培养raw264.7细胞，确定嘌呤霉素工作质量浓度；不同滴度的慢病毒分别与raw264.7细胞共同培养，根据荧光强度确定转染效率；用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞，实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论：(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功；(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×109TU/mL，敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×109TU/mL;(3)确定raw264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染raw264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调，而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明，成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的raw264.7细胞株。

关键词：慢病毒载体溶质载体家族1成员5 SLC1A5 过表达敲低 raw264.7细胞稳转细胞株

柴胡皂苷d对LPS诱导的raw264.7细胞炎症的抗炎作用机制

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现代食品科技 2024年

作者：王妍婷牛志强刘亚男李甫胡卫成张迹新疆农业大学食品科学与药学学院扬州大学医学院中国科学院成都生物研究所天然产物研究中心淮阴师范学院生命科学学院

本文以细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞raw264.7为模型，对柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SSd)的体外抗炎作用机制进行深入研究。结果显示，SSd在8μmol/L的浓度下能够显著抑制raw264.7炎症细胞一氧化氮（Nitri... 详细信息

本文以细菌脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞raw264.7为模型，对柴胡皂苷d(Saikosaponin d,SSd)的体外抗炎作用机制进行深入研究。结果显示，SSd在8μmol/L的浓度下能够显著抑制raw264.7炎症细胞一氧化氮（Nitric Oxide,NO）的释放（P细胞一氧化氮合酶（Inducible Nitric Oxide Synthase,i NOS）、环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)及白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）等炎症相关基因m RNA的表达（Praw264.7细胞形态改变。此外，SSd能够抑制Toll样受体4(Toll-Like Receptor 4,TLR4)、IκB激酶（IκB Kinase-α,IκBα）、核因子κB(Nuclear Factor Kappa-B,NF-κB)、丝氨酸/苏氨酸激酶（Serine/Threonine Kinase Proteins,GSK3β）等炎症相关信号通路关键蛋白的表达或磷酸化水平。结果表明，SSd对LPS诱导的raw264.7细胞炎症有较好的抑制作用，其作用机制与TLR4/NF-κB以及GSK3β等炎症相关信号通路相关，可为全面理解SSd的抗炎作用提供数据支撑。

关键词：柴胡皂苷d raw264.7细胞抗炎作用 TLR4 GSK3β NF-κB

匹莫齐特对脂多糖诱导raw264.7细胞诱导型一氧化氮合成酶表达的调控及其作用机制

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河南医学研究 2024年第7期33卷 1175-1180页

作者：刘佳郑州大学第五附属医院输血科河南郑州450052

目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞raw264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将raw264.7细胞稀释为每孔2×10... 详细信息

目的运用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞raw264.7细胞株,探究匹莫齐特(Pimozide)对一氧化氮和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)合成的影响和作用机制。方法用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液将raw264.7细胞稀释为每孔2×105个接种于24孔板中进行培养,分为空白对照组(仅含DMEM培养液+raw264.7细胞)、Pimozide组(仅含raw264.7细胞和10μmol·L^(-1)Pimozide培养液)、LPS诱导(LPS 1 mg·L^(-1))组(LPS+raw264.7细胞)、药物处理组[含细胞和不同浓度药物,包括Pimozide低(LPS+2.5μmol·L^(-1))、中(LPS+5μmol·L^(-1))、高(LPS+10μmol·L^(-1))组]。各组培养上清液中一氧化氮水平测定采用Griess法进行检测。采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫蛋白印迹法分别检测iNOS mRNA表达水平和iNOS和磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的蛋白表达相对水平。结果用含10%胎牛血清、100 U·mL^(-1)的青链霉素DMEM培养液培养raw264.7细胞24 h后,各组培养上清液一氧化氮表达水平差异有统计学意义(F=25.69,Praw264.7细胞中iNOS表达和一氧化氮的生成,其作用机制可能与抑制磷酸化的信号传导及转录激活因子通路-5的生成相关。

关键词：匹莫齐特脂多糖 raw264.7细胞信号传导及转录激活因子通路诱导型一氧化氮合成酶