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昆明医科大学学报 2024年第9期45卷 9-16页

作者：秦祥川李金秋黄晓婧忽吐比丁·库尔班阿仙姑·哈斯木新疆医科大学基础医学院/新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐836001

目的探讨人乳头瘤病毒E6蛋白(human papillomavirus E6 protein,HPV E6)对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在分子机制。方法基于Illumina Hiseq 4000转录组测序技术检测12例不同程度的宫颈病变组织之间的基因表达特征,筛选与... 详细信息

目的探讨人乳头瘤病毒E6蛋白(human papillomavirus E6 protein,HPV E6)对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在分子机制。方法基于Illumina Hiseq 4000转录组测序技术检测12例不同程度的宫颈病变组织之间的基因表达特征,筛选与HPV相关的差异基因;利用GO、KEGG Pathway方法对差异基因进行生物学功能富集分析;Western blotting检测正常宫颈上皮细胞HCerEpic、宫颈癌细胞Hela中rap、rap1GAP蛋白表达水平;通过平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测其增殖、侵袭及迁移能力;通过sh-E6慢病毒转染下调细胞内HPV E6表达,分为对照组(Hela细胞)、空载组(sh-NON)和sh-E6组(低表达HPV E6);下调HPV E6表达,采用平板克隆和CCK-8实验分别检测每组细胞增殖能力和细胞活力;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western blotting检测各组细胞中E6、rap1、rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达水平。在sh-E6组基础上过表达rap1,Western blot检测细胞中rap1通路及相关蛋白的表达水平;平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果测序结果显示,与正常宫颈HPV阴性比较,HPV阳性的正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中差异上调表达的基因分别有340、864和1036个;3个数据集寻找共有差异基因共24个。GO|KEGG富集分析24个差异表达基因主要富集在rap1相关信号通路。与HCerEpic细胞相比,Hela细胞内rap1表达升高,rap1GAP表达降低(Prap1、CyclinD1、N-cadherin蛋白表达降低,rap1GAP和E-cadherin蛋白表达升高(Prap1组(sh-E6/OE rap1)细胞内rap1/rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达被恢复(P通过激活rap1信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移。

关键词： HPV E6 宫颈癌 rap1通路增殖侵袭迁移

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