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鸡rac1基因真核表达载体的构建及其在颗粒细胞中的表达验证

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中国家禽 2021年第8期43卷 8-13页

作者：秦宁吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

为构建鸡rac1基因真核表达载体并观察该载体是否在鸡卵泡颗粒细胞中表达,试验采用PAS方法合成rac1基因,先将其克隆至pUC57-simple载体中,然后再亚克隆至表达载体pYr-adshuttle-4上,将重组载体瞬时转染至鸡卵泡颗粒细胞中,通过荧光定量PC... 详细信息

为构建鸡rac1基因真核表达载体并观察该载体是否在鸡卵泡颗粒细胞中表达,试验采用PAS方法合成rac1基因,先将其克隆至pUC57-simple载体中,然后再亚克隆至表达载体pYr-adshuttle-4上,将重组载体瞬时转染至鸡卵泡颗粒细胞中,通过荧光定量PCR和Western Blot进行验证。结果表明,rac1基因正确地插入到了载体pYr-adshuttle-4的多克隆位点,且重组载体转染成功。试验成功构建了鸡源pYr-adshuttle-4-rac1真核表达载体,并成功将其转入到鸡卵泡颗粒细胞中。该载体的构建为进一步研究rac1的生物学功能提供了重要工具。

关键词：鸡 rac1基因真核表达载体颗粒细胞

rac1基因真核表达质粒的构建及其对结肠癌细胞生物学功能的影响

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中华普通外科学文献（电子版） 2014年第3期8卷 10-13页

作者：叶志强陈怡陈亚琼刘波中山大学附属第三医院急诊科广州510630 中山大学附属孙逸仙纪念医院甲乳外科中山大学附属第三医院检验科广州510630 中山大学第三附属医院萝岗分院普外科

目的应用分子生物学技术构建rac1基因真核表达质粒及小分子RNA(siRNA)干扰片段,通过调控其表达,研究rac1蛋白对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法从结肠癌细胞中扩增rac1基因,构建pCDNA3.1(+)-rac1和pEGFP-rac1真核表达质粒实现过表达R... 详细信息

目的应用分子生物学技术构建rac1基因真核表达质粒及小分子RNA(siRNA)干扰片段,通过调控其表达,研究rac1蛋白对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法从结肠癌细胞中扩增rac1基因,构建pCDNA3.1(+)-rac1和pEGFP-rac1真核表达质粒实现过表达rac1基因;通过小分子RNA干扰抑制rac1基因表达。利用侵袭实验、划痕实验研究rac1基因对结肠癌细胞侵袭和迁移能力的改变;通过Pull-Down实验,研究调控rac1表达对癌细胞中GTPase活性的影响。结果成功构建rac1基因真核表达质粒。通过调控rac1蛋白的表达证实其与结肠癌细胞中rac1GTPase的活化程度,以及肿瘤细胞的迁移和侵袭能力呈正性关联。结论通过抑制rac1的表达,可以有效阻止rac1 GTPase的激活,从而抑制肿瘤细胞的迁移及侵袭,为抑制结肠癌进展提供新的干预靶点,也为进一步免疫生物过继治疗提供了必要的实验基础。

关键词：结肠癌 rac1基因真核表达质粒 GTPase

RNA干扰rac1基因表达对结直肠癌LoVo细胞骨架和细胞周期的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2012年第5期19卷 486-490页

作者：赵世义徐胜平李桂云李晓东栾祖鹏黎晓鹃济南市第三人民医院肿瘤科山东济南250101 济南市疾病预防控制中心免疫预防所山东济南250001

目的:观察rac1蛋白在结直肠癌细胞中的表达,并分析其与结直肠癌LoVo细胞骨架、细胞周期和细胞凋亡的相关性。方法:Western blotting测定5种结直肠癌细胞株(LoVo,SW480,SW620,SW1116,HT29)中rac1蛋白的表达;rac1-shR-NA质粒转染LoVo细胞... 详细信息

目的:观察rac1蛋白在结直肠癌细胞中的表达,并分析其与结直肠癌LoVo细胞骨架、细胞周期和细胞凋亡的相关性。方法:Western blotting测定5种结直肠癌细胞株(LoVo,SW480,SW620,SW1116,HT29)中rac1蛋白的表达;rac1-shR-NA质粒转染LoVo细胞后,激光共聚焦显微镜观察LoVo细胞骨架的变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:5种结直肠癌细胞株中均有rac1蛋白的高表达。rac1基因沉默后,LoVo细胞中交联状态的F-actin网明显减少且紊乱,G0/G1期细胞比例较对照组显著增加[(74.63±4.40)%vs(56.46±3.09)%,P12.87±1.77)%vs(29.66±1.92)%,Prac1-shRNA转染组LoVo细胞凋亡率较对照组显著增加[(25.31±2.05)%vs(9.38±1.16)%,Prac1基因的表达影响了LoVo细胞骨架的形成和细胞周期,为以rac1为靶点治疗结直肠癌提供了实验依据。

关键词：结直肠癌 RNA干扰 rac1基因细胞骨架细胞周期凋亡

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灰葡萄孢菌rac1基因的生物信息学分析

河南农业科学 2014年第6期43卷 98-102页

作者：兰俊董德成张雷李安达张传博贵阳市白云区农业水利局贵州贵阳550014 贵州师范大学生命科学学院贵州贵阳550001

利用多种不同序列分析软件,基于生物基因组学数据库,对灰葡萄孢菌rac1基因进行生物信息学分析,以预测BCrac1基因编码产物的理化性质、结构与功能,同时构建rac1基因同源系统进化树。结果表明:BCrac1基因编码产物由150个氨基酸构成,为亲... 详细信息

利用多种不同序列分析软件,基于生物基因组学数据库,对灰葡萄孢菌rac1基因进行生物信息学分析,以预测BCrac1基因编码产物的理化性质、结构与功能,同时构建rac1基因同源系统进化树。结果表明:BCrac1基因编码产物由150个氨基酸构成,为亲水性蛋白,没有信号肽,二级结构以α-螺旋与无规则卷曲为主,推测其主要在细胞核中发挥生物学作用。结构功能域分析表明,BCrac1基因编码产物可能主要具有生长因子的功能,对灰葡萄孢菌的激素调节有影响。构建的rac1基因编码产物系统进化树显示,BCrac1基因与核盘菌、稻瘟病菌、炭疽菌等物种rac1基因遗传距离较近,具有高度同源性。

关键词：灰葡萄孢菌 rac1基因生物信息学

PAK3、rac1基因多态性与秦巴山区儿童精神发育迟滞相关性研究

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PAK3、RAC1基因多态性与秦巴山区儿童精神发育迟滞相关性研究

作者：王廷曦西北大学

学位级别：硕士

秦巴山区是我国精神发育迟滞病症的高发区之一。调查发现，秦巴山区精神发育迟滞具有一定的家族聚集性，提示遗传因素可能是其病因之一。因此，在秦巴山区人群中查找精神发育迟滞相关致病基因对防治该地区的精神发育迟滞有重要实际意义... 详细信息

秦巴山区是我国精神发育迟滞病症的高发区之一。调查发现，秦巴山区精神发育迟滞具有一定的家族聚集性，提示遗传因素可能是其病因之一。因此，在秦巴山区人群中查找精神发育迟滞相关致病基因对防治该地区的精神发育迟滞有重要实际意义。多年以来就已观察到MR患者存在异常的树突和树突棘。可能这些异常的结构影响了细胞和网络水平的信息处理。PAK3蛋白是连接Rho GTP酶与细胞骨架重组及核信号的重要效应因子，在树突发育和涉及突触可塑性的树突棘中参与细胞骨架的重组。为了研究PAK3基因在秦巴山区MR患病中可能的遗传作用，在PAK3基因处选择了三个常见SNPs(rs17327259，rs17327273，rs11152658)进行病例对照研究，rs17327273位于PAK3基因第五内含子中，rs17327259位于基因的上游区，rs11152658位于基因的下游区。采用PCR-SSCP对各位点多态性进行研究。所有基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。病例对照分析结果表明各SNP无论在等位基因还是基因型上在病例组和对照组之间均无显著性差异。连锁不平衡分析表明三点间不存在较显著的连锁不平衡。 rac1基因编码的蛋白为Rho家族小G蛋白，参与调节包括细胞生长、细胞骨架重组、蛋白激酶活化在内的一系列细胞事件，且rac1为PAK3的上游调控因子。为了研究rac1基因在秦巴山区MR患病中可能的遗传作用，在基因内选择了三个常见SNPs(rs1647224、rs836488、rs702482)进行病例对照研究。利用PCR-SSCP技术对各位点多态性进行研究。各点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡。连锁不平衡分析表明三点处于连锁不平衡。病例对照分析结果表明各SNP无论在等位基因还是基因型分布上在病例组和对照组之间均无显著性差异，但在单倍型分析中表明G-C-A单倍型在病例组和对照组之间存在显著性差异，提示rac1基因G-C-A单倍型为秦巴山区儿童精神发育迟滞的易感单倍型。

关键词： PAK3基因精神发育迟滞 rac1基因单核苷酸多态性关联分析

猪rac1基因表达规律及真核表达载体的构建

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猪Rac1基因表达规律及真核表达载体的构建

作者：王泽艺山西农业大学

学位级别：硕士

肌肉中肌纤维的数量在出生时期就已经固定,出生后数量不再发生变化。肌肉的发育不仅仅在于肌细胞的增殖,更与肌细胞的融合相关Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, rac1)是Rho GTP酶家族里rac亚家族中... 详细信息

肌肉中肌纤维的数量在出生时期就已经固定,出生后数量不再发生变化。肌肉的发育不仅仅在于肌细胞的增殖,更与肌细胞的融合相关Ras相关的C3肉毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, rac1)是Rho GTP酶家族里rac亚家族中的一员,可调控细胞极性、吞噬作用、细胞迁移、囊泡的转运以及调节肌动蛋白骨架的形成等。该基因与成肌细胞的融合密切相关,在肌纤维增粗和肌肉产量增多的过程中发挥重要作用。采用qRT-PCR和Western blot技术检测racl基因在出生1日龄的马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、胰脏、舌、小肠、下丘脑、胃、背最长肌等组织的mRNA和蛋白表达谱,以及racl基因在马身猪和大白猪从1日龄到180日龄背最长肌中的表达,了解racl基因的表达规律;成功构建了pAcGFP-rac1真核表达载体,为研究racl的功能奠定基础。主要结果如下：(1)racl基因mRNA在出生1日龄马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺、肾、胰脏、舌、小肠、胃和背最长肌组织中均有表达,其中,racl基因mRNA在肺组织中的表达量最高,极显著高于其他组织(Pracl的表达量最低。racl蛋白在出生1日龄的马身猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾、脊髓、小脑、下丘脑、胃、背最长肌、腰大肌、股二头肌以及背部脂肪中表达,其中脊髓、下丘脑和背脂中表达量最高,与其他组织差异极显著(Pracl基因mRNA在大白猪和马身猪背最长肌中的发育性表达模式中发现,大白猪1日龄、120日龄和180日龄时表达量最高,与其他日龄相比差异极显著(Pracl基因的表达量呈下降趋势且维持在较低的表达水平,150日龄时表达量最低。同一发育阶段两品种间进行比较,mRNA水平上,除了30日龄外,其他几个日龄的表达量差异极显著(Pracl蛋白每个阶段的表达量都高于大白猪,其中1日龄和60日龄的表达量差异极显著(Pracl基因克隆片段与pAcGFP-N1载体连接,通过PCR反应、单酶切和双酶切鉴定以及测序结果表明,pAcGFP-rac1真核表达载体构建成功。

关键词：猪 rac1基因表达谱发育性表达 pAcGFP-N1构建

siRNA干扰rac1基因表达及其抑制大鼠视网膜新生血管生成机制的研究

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siRNA干扰Rac1基因表达及其抑制大鼠视网膜新生血管生成机制的研究

作者：李娟娟四川大学

学位级别：硕士

目的：在眼部疾病中，血管增生过度是一大类致盲性眼病的根本原因，其中视网膜新生血管性疾病占据较大比例。视网膜新生血管的生长及其所致的出血、渗出、增生等是多种致盲眼病的主要病理过程。血管新生是多种分子共同作用的结果，而... 详细信息

目的：在眼部疾病中，血管增生过度是一大类致盲性眼病的根本原因，其中视网膜新生血管性疾病占据较大比例。视网膜新生血管的生长及其所致的出血、渗出、增生等是多种致盲眼病的主要病理过程。血管新生是多种分子共同作用的结果，而已往的研究多是针对单分子来控制血管新生，这些方法虽然显示出一定抑制作用，但毕竟单分子作用是微弱的，故抗血管新生的作用也是有限的。近年来的研究表明racl可能是调控多种血管生成相关因素的关键分子。为探讨racl对于视网膜新生血管的调控作用，本研究采用RNA干扰技术抑制racl基因表达，观测其对视网膜新生血管生成及其相关生长因子表达的抑制作用。方法： 1．第一部分 racl—siRNA表达载体构建

关键词：视网膜新生血管 RNA干扰 rac1基因 HIF-1α siRNA载体构建视网膜新生血管动物模型血管内皮细胞生长因子 NF-κB FITC心内灌注视网膜铺片 RT-PCR HE染色免疫组织化学

RNA干扰rac1基因表达抑制胃癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究

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临床和实验医学杂志 2017年第13期16卷 1279-1282页

作者：张瑞瑞周武碧潘振国刘海燕南京医科大学附属淮安第一医院病理科江苏淮安223300 淮安市第一人民医院病理科江苏淮安223300

目的 RNA干扰抑制rac1基因的表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中rac1基因的蛋白表达;将NC-siRNA、rac1-siRNA转染至人胃癌SGC-7901细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,... 详细信息

目的 RNA干扰抑制rac1基因的表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测胃癌组织及相应的癌旁组织中rac1基因的蛋白表达;将NC-siRNA、rac1-siRNA转染至人胃癌SGC-7901细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组,48 h后,Western blot检测各组细胞中rac1的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测ki67、PCNA、Cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果 rac1在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P1);RNA干扰SGC-7901细胞中rac1基因后能显著降低rac1的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,rac1-siRNA组细胞存活率及ki67、PCNA、Notch1、Hes1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P1)。结论 rac1基因在胃癌组织中高表达,RNA干扰抑制rac1基因表达后能显著降低细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Notch1信号通路有关。

关键词：胃癌 RNA干扰 rac1基因增殖凋亡 Notch1信号通路

马身猪和大白猪背最长肌rac1基因发育性表达研究

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山西农业大学学报（自然科学版） 2016年第11期36卷 827-831页

作者：王泽艺石建中刘郑煜高鹏飞浦忠得杨青春郭晓红李步高曹果清山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 大同市种猪场山西大同037000

[目的]探究rac1基因mRNA和蛋白质在马身猪和大白猪背最长肌组织中的发育性表达规律,揭示rac1基因与猪肌肉发育之间的关系。[方法]采用qRT-PCR和Western blot技术检测马身猪和大白猪从1日龄到180日龄(1、30、60、90、120、150和180日龄)... 详细信息

[目的]探究rac1基因mRNA和蛋白质在马身猪和大白猪背最长肌组织中的发育性表达规律,揭示rac1基因与猪肌肉发育之间的关系。[方法]采用qRT-PCR和Western blot技术检测马身猪和大白猪从1日龄到180日龄(1、30、60、90、120、150和180日龄)阶段背最长肌中rac1基因的表达规律。[结果]rac1基因mRNA在大白猪1日龄、120日龄和180日龄时表达量较高,与其他日龄相比差异极显著(P1),其他日龄表达量均维持在较低水平;马身猪60日龄时rac1 mRNA表达量最高,极显著地高于其他日龄(P1),90日龄次之,其他日龄表达水平较低,且日龄间表达量无显著差异。在蛋白质水平上,从1日龄到180日龄,大白猪rac1表达量整体呈先降低后升高的趋势,在1日龄时表达量最高,120日龄表达量最低;马身猪整体呈先升高后降低的趋势,60日龄时表达量最高,极显著高于其他日龄(P1),随后几个月龄的表达量处于较低水平,显著低于1日龄和30日龄(Prac1蛋白表达量始终高于大白猪,且在1日龄和60日龄,差异极显著(P1),在120日龄和150日龄,差异显著(Prac1基因mRNA和蛋白质的表达量与猪的年龄及遗传背景有关。

关键词：猪 rac1基因发育性表达