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rab1a对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

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华西口腔医学杂志 2020年第3期38卷 245-249页

作者：孙学辉范欣胡凯莉胡温庭潍坊医学院附属医院口腔颌面外科潍坊261000 潍坊医学院附属医院口腔科潍坊261000 潍坊医学院口腔医学院潍坊261021

目的探讨rab1a对人舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移影响的分子机制。方法应用Western blot检测rab1a蛋白在人正常舌上皮细胞Hacat、舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、转染敲除rab1a质粒后Sirab1a/Tca8113的表达改变;检测Sirab1a/Tca8113细胞... 详细信息

目的探讨rab1a对人舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移影响的分子机制。方法应用Western blot检测rab1a蛋白在人正常舌上皮细胞Hacat、舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、转染敲除rab1a质粒后Sirab1a/Tca8113的表达改变;检测Sirab1a/Tca8113细胞中上皮-间质转化(EMT)相关标志物的变化;分别采用CCK-8、Transwell、伤口愈合实验检测Sirab1a/Tca8113细胞的增殖、侵袭、转移能力。结果 Western blot显示Tca8113中rab1a的表达量显著高于Hacat组,Sirab1a/Tca8113细胞中rab1a显著降低;CCK-8增殖实验结果显示,Sirab1a/Tca8113细胞增殖能力明显降低;Transwell实验结果亦显示其侵袭能力明显降低;伤口愈合实验结果显示其转移能力明显降低;Western blot结果显示Sirab1a/Tca8113中钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著增加,波形蛋白(Vimentin)的表达显著受到了抑制。结论 rab1a能够促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移。

关键词：舌鳞状细胞癌 rab1a 增殖侵袭转移上皮-间质转化

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rab1a在肿瘤发生发展中的作用研究进展

现代肿瘤医学 2022年第20期30卷 3794-3799页

作者：卫诗蕙廖争光杨梅孙立袁胜涛中国药科大学江苏省新药筛选中心江苏南京210009

rab1a是一种小三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)酶,是内质网和高尔基体之间囊泡转运的重要调节成分,可以在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间转化。rab1a除了在囊泡转运中的作用外,还参与营养感应、信号转导、细胞迁移和... 详细信息

rab1a是一种小三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)酶,是内质网和高尔基体之间囊泡转运的重要调节成分,可以在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间转化。rab1a除了在囊泡转运中的作用外,还参与营养感应、信号转导、细胞迁移和自噬调节。rab1a更多是作为癌基因发挥作用,主要通过激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)信号通路,调节肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和转移。研究表明,rab1a的异常激活与结直肠癌、HCC、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。本文主要就rab1a的结构与功能、在肿瘤发生发展中的作用及相关信号通路进行综述。

关键词： rab1a mTORC1 肿瘤研究进展

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rab1a与肿瘤发生发展的研究进展

医学研究生学报 2018年第1期31卷 73-76页

作者：程正武王子康何宋兵苏州大学附属第一医院普外科苏州医学硕士研究生215006

rab1a是rab家族的一员,是一种小三磷酸鸟苷(GTP)酶,是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)的激活因子,已经被证实参与调节内质网至高尔基体的囊泡运输。随着rab1a研究的不断深入,很多学者发现rab1a蛋白还参与信号传导、细胞迁移以及... 详细信息

rab1a是rab家族的一员,是一种小三磷酸鸟苷(GTP)酶,是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)的激活因子,已经被证实参与调节内质网至高尔基体的囊泡运输。随着rab1a研究的不断深入,很多学者发现rab1a蛋白还参与信号传导、细胞迁移以及自体吞噬的调节。同时rab1a异常表达也与一些临床疾病的发生发展有关,如帕金森氏病、原发性心肌病及阿司匹林加重性呼吸道疾病等。而近年来人们逐渐开始关注rab1a在肿瘤发生发展中的作用,在包括舌癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、胃癌及子宫颈癌等多种恶性肿瘤中rab1a均有不同程度的高表达,且在肿瘤的发生发展中扮演着重要角色。文章就rab1a在肿瘤发生发展及信号通路等方面的研究进展进行综述。

关键词： rab1a 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1 信号通路肿瘤

草鱼rab1a基因的克隆表达、抗体制备及对微囊藻毒素-LR的响应

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核农学报 2021年第9期35卷 2035-2043页

作者：何丽刘林阮记明周颖梁惜梅林长高隗黎丽江西农业大学动物科学技术学院江西南昌330045

为了解草鱼(Ctenopharygodon idella)小分子三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白家族成员rab1a的分子结构特点及其在微囊藻毒素-LR(MC-LR)胁迫中的作用,本研究根据草鱼肝脏(MC-LR诱导)转录组测序获得的unigenes序列,采用RACE技术克隆了草鱼rab1a基... 详细信息

为了解草鱼(Ctenopharygodon idella)小分子三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白家族成员rab1a的分子结构特点及其在微囊藻毒素-LR(MC-LR)胁迫中的作用,本研究根据草鱼肝脏(MC-LR诱导)转录组测序获得的unigenes序列,采用RACE技术克隆了草鱼rab1a基因cDNA,其全长序列为806 bp,开放阅读框为609 bp,编码202个氨基酸。同源性分析结果表明,rab1a与鲤鱼(Cyprinus carpio)rab1a3相似性最高。系统进化分析表明草鱼rab1a与鲤鱼、斑马鱼(Danio rerio)等鱼类聚为一大支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现rab1a在草鱼各组织中广泛分布,在血液和鳃等组织中的表达较丰富。构建了pGEX-4T-1-rab1a重组表达载体,并制备了rab1a多克隆抗体,通过酶联免疫(ELISA)检测抗体效价为1∶512000以上,Western blot检测显示抗体具有特异性。草鱼肝脏经微囊藻毒素-LR(MC-LR)染毒,发现25和75μg·g^(-1)感染96 h后对rab1a基因和蛋白表达的影响不明显(P>0.05),但100μg·kg^(-1)可导致草鱼肝脏rab1a基因和蛋白表达显著下降(Prab1a在参与草鱼抵御MC-LR胁迫过程中起着重要的作用。本研究为进一步了解rab1a基因的功能及其在MC-LR胁迫过程中所发挥的作用奠定了基础。

关键词：草鱼微囊藻毒素-LR rab1a 基因克隆多克隆抗体表达

MiR-150-5p通过靶向调控rab1a抑制乳腺癌细胞MDA-231的上皮-间质转化

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中国生物化学与分子生物学报 2018年第9期34卷 997-1003页

作者：李平任斌李洪利尹崇高山东省潍坊护理职业学院病理病原教研室山东潍坊261053 山东省潍坊医学院临床学院外科学教研室山东潍坊261053 山东省潍坊医学院医学研究实验中心山东潍坊261053 山东省潍坊医学院护理学院山东潍坊261053

先前的研究表明,miR-150-5p发挥抑癌基因的作用,调控肿瘤细胞的侵袭与转移。然而,关于其在乳腺癌细胞侵袭与转移中的机制尚不明确。本实验旨在研究miR-150-5p负向调控rab1a在乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition... 详细信息

先前的研究表明,miR-150-5p发挥抑癌基因的作用,调控肿瘤细胞的侵袭与转移。然而,关于其在乳腺癌细胞侵袭与转移中的机制尚不明确。本实验旨在研究miR-150-5p负向调控rab1a在乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用。双荧光素酶的结果显示,miR-150-5p可负向调控rab1a。荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,miR-150-5p在乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231(MDA-231)中的表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A;在MDA-231中过表达miR-150-5p后,qRT-PCR结果显示,rab1a mRNA的表达水平明显降低。Western印迹结果显示,过表达miR-150-5p后,miR-150-5p组细胞中的rab1a、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的表达水平相对于对照组(NC)细胞明显降低,而E-钙黏着蛋白(Ecadherin)的表达水平明显增加。Transwell侵袭和划痕实验显示,与miR-150-5p+Con组细胞相比,miR-150-5p+rab1a组细胞的侵袭和迁移能力明显增加。qRT-PCR结果显示,miR-150-5p+rab1a组细胞的rab1a mRNA表达水平明显增加。Western印迹结果显示,miR-150-5p+rab1a组细胞中的波形蛋白、N-钙黏着蛋白表达水平明显增加,而E-钙黏着蛋白表达明显降低,过表达rab1a后显著逆转了miR-150-5p对EMT的影响。综上所述,miR-150-5p可以通过负向调控rab1a抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。

关键词：乳腺癌 miR-150-5p rab1a 上皮-间质转化侵袭迁移

rab1a在结直肠癌中的表达及其临床意义的研究

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Rab1A在结直肠癌中的表达及其临床意义的研究

作者：王子康苏州大学

学位级别：硕士

目的通过实验室方法探讨rab1a在结直肠恶性肿瘤中的表达,并通过统计学软件明确rab1a蛋白的表达在结直肠癌患者诊断及预后中的临床意义,为结直肠癌的诊断及治疗进一步奠定基础。方法选取2009年10月至2014年4月间就诊于苏州大学附属第二... 详细信息

目的通过实验室方法探讨rab1a在结直肠恶性肿瘤中的表达,并通过统计学软件明确rab1a蛋白的表达在结直肠癌患者诊断及预后中的临床意义,为结直肠癌的诊断及治疗进一步奠定基础。方法选取2009年10月至2014年4月间就诊于苏州大学附属第二医院普通外科的100例结直肠癌组织及29例正常结直肠组织(至少距离肿瘤边缘5cm以上)作为研究对象,利用免疫组化及western blotting来观察rab1a在结直肠癌组织中蛋白水平的表达,再利用统计学软件分析rab1a蛋白的表达与结直肠癌患者临床病理参数之间的关系。结果与人正常结直肠组织相比,在结直肠恶性肿瘤组织中rab1a蛋白呈现高表达状态(P1),同时rab1a蛋白高表达状态与结直肠恶性肿瘤的TNM分期(P=0.010)、淋巴结转移(P=0.037)、腹膜转移(P=0.032)呈正相关。另外,多因素分析显示结直肠癌中rab1a表达阳性(P=0.047)与TNM分期(P=0.013)为结直肠癌患者预后的独立危险因素。更重要的是,通过Kaplan-Meier生存分析表明rab1a高表达组患者的生存期要明显短于rab1a低表达组(P=0.001)。结论相比较正常结直肠组织,rab1a在结直肠癌中呈现出明显高表达状态。rab1a可做为结直肠恶性肿瘤诊断的肿瘤标志物之一,rab1a可作为结直肠癌患者预后不佳的指标之一。

关键词：结直肠癌 rab1a 免疫组化腹膜转移

rab1a的泛癌分析及其在胃癌中与自噬的相关性研究

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RAB1A的泛癌分析及其在胃癌中与自噬的相关性研究

作者：赵鑫延安大学

学位级别：硕士

研究背景:恶性肿瘤是我国居民当前的主要死亡原因之一,其中胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤,也是第三大肿瘤致死因素,胃癌的全球的生存数据仍不乐观。随着高通量基因芯片和基因测序等生物信息学技术的飞速进步,生物信息学分析在阐明肿瘤... 详细信息

研究背景:恶性肿瘤是我国居民当前的主要死亡原因之一,其中胃癌是全球第五大常见恶性肿瘤,也是第三大肿瘤致死因素,胃癌的全球的生存数据仍不乐观。随着高通量基因芯片和基因测序等生物信息学技术的飞速进步,生物信息学分析在阐明肿瘤的发生机制、预测相关作用靶点、提示预后等方面发挥着越发重要的作用。同时生物信息学在基因表达谱分析和分子机制中的研究也更加普及。在本研究中,作者尝试在公共数据库中筛选相关数据集并分析rab1a在恶性肿瘤发生、进展、免疫浸润及预后的价值。自噬是一个细胞内稳态维持的一个重要过程,对肿瘤的进展有着重要的影响。通过在线数据库构建PPI网络后,发现rab1a在肿瘤中与自噬相关基因联系十分密切。但是当前尚未发现rab1a在胃癌中与自噬存在明确相关性。研究目的:通过生物信息学技术研究rab1a在不同肿瘤中对临床特征、遗传特征、免疫浸润的影响。验证rab1a基因对胃癌患者的影响。探究胃癌中rab1a与自噬的相关性。研究方法:本研究主要运用R语言及TIMER、COSMIC、STRING等在线数据分析工具对癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和GTEx(Genotype-Tissue Expression)数据库中rab1a数据进行泛癌分析。收集2021年5月至2022年5月临床病理资料完整的30例胃癌患者胃癌组织、癌旁组织和正常胃组织分别作为实验组和对照组通过qRT-PCR、免疫组化等实验方法验证rab1a和自噬相关蛋白在不同组织的表达情况,并分析其表达水平与患者的临床特征的关系;选择转染生长状态良好处于对数生长期的MKN28胃癌细胞系,对比NC组,进而分析rab1a与自噬的影响。结果:***1A在多种实体肿瘤和其对应癌周、正常组织中存在差异表达;并且在多种肿瘤的不同T、N、M分期存在差异表达。并且在多种肿瘤的异质性、免疫评分、免疫浸润、预后等方面存在显著差异。但在胃癌的预后分析中不同数据库对rab1a对胃癌预后影响存在分歧。2.通过qRT-PCR和免疫组化方法发现,我院胃癌患者组织及胃癌细胞系、胃正常上皮细胞系中发现,胃癌组织中rab1a表达水平对比癌旁和正常组织存在显著差异(prab1a后,通过qRT-PCR对比NC组的rab1a和自噬相关基因mRNA水平,发现rab1a表达抑制后自噬水平也明显降低(p1.本研究所得出的与多种肿瘤临床特征和遗传异质性特征密切相关性为肿瘤的治疗和预后研究提供新的依据,在临床样本中rab1a表达与胃癌的大体类型、分化程度和肿瘤大小有显著相关。2.初步证实了rab1a在胃癌的细胞自噬中发挥着不可忽视的作用,并且可能成为抗肿瘤治疗的重要靶点。3.通过生物信息学工具分析认为rab1a基因对免疫细胞浸润的不同影响,可能为肿瘤免疫治疗提供新的研究思路。

关键词： rab1a 泛癌胃癌自噬

rab1a通过活化ERK MAPK信号通路促进胃腺癌细胞恶性生物学行为的实验研究

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Rab1A通过活化ERK MAPK信号通路促进胃腺癌细胞恶性生物学行为的...

作者：黄波上海交通大学

学位级别：硕士

研究目的探讨rab1a蛋白在胃腺癌细胞恶性生物学行为中的作用及机制。研究方法1.应用组织芯片(HStm-Ade180Sur-01)技术,收集80例胃腺癌患者手术标本,每个病例包括一处胃腺癌组织和一处癌旁粘膜组织。运用免疫组化技术检测rab1a蛋白表达水... 详细信息

研究目的探讨rab1a蛋白在胃腺癌细胞恶性生物学行为中的作用及机制。研究方法1.应用组织芯片(HStm-Ade180Sur-01)技术,收集80例胃腺癌患者手术标本,每个病例包括一处胃腺癌组织和一处癌旁粘膜组织。运用免疫组化技术检测rab1a蛋白表达水平,评估胃腺癌组织和癌旁粘膜组织的rab1a蛋白表达水平的H-Score评分,并分析rab1a蛋白表达水平在胃腺癌组织和癌旁粘膜组织的统计学差异,分析淋巴结转移阳性病例和淋巴结转移阴性病例的胃腺癌组织rab1a表达的统计学差异。收集胃黏膜上皮细胞系和8种胃腺癌细胞系,应用Western blot检测胃黏膜上皮细胞系和胃腺癌细胞系rab1a蛋白的表达情况。收集上述80例胃腺癌病人的随访信息,根据rab1a蛋白的H-Score评分,按照中位数分为rab1a蛋白高表达组和低表达组,并绘制生存曲线,分析rab1a蛋白表达水平与胃腺癌病人生存期的关系。2.应用组织芯片(HStm-Ade076Met-01)技术,收集28个胃腺癌患者手术标本,其中13个病例包括一处胃腺癌原发灶、一处癌旁粘膜组织和一处转移灶,4个病例包括一处胃腺癌原发灶和两处转移灶,11个病例包括一处胃腺癌原发灶和一处转移灶。运用免疫组化技术检测病例原发灶和转移灶的rab1a蛋白表达水平,评估rab1a蛋白的H-Score评分,分析rab1a蛋白表达水平在原发灶和转移灶的统计学差异。选取rab1a蛋白表达水平较低的胃腺癌细胞系AGS和BGC823,构建稳定过表达rab1a蛋白的人胃腺癌细胞系AGS-rab1a和BGC823-rab1a。选取rab1a蛋白表达水平较高的胃腺癌细胞系MKN45和MKN28,构建稳定knockdown rab1a蛋白的人胃腺癌细胞系MKN45-rab1a-kd 和MKN28-rab1a-kd。应用Transwell迁移实验、Matrigel侵袭实验和软琼脂集落形成实验分别检测过表达rab1a蛋白和knockdown rab1a蛋白对胃腺癌细胞迁移侵袭能力和锚定非依赖条件下克隆形成能力的影响,并计数穿透到下层的细胞数和形成的克隆数,分析统计学差异。3.在rab1a表达水平较高的胃腺癌细胞系MKN45中,转染rab1a si RNA,转染48h后提取总蛋白,应用信号通路磷酸化抗体芯片筛选活性变化明显的信号通路,并应用生物信息学技术筛选出与rab1a蛋白关联密切的信号通路。选取稳定过表达rab1a蛋白的胃腺癌细胞系AGS-rab1a,BGC823-rab1a和稳定knockdown rab1a蛋白的胃腺癌细胞系MKN45-rab1a-kd,MKN28-rab1a-kd,应用Western blot技术验证rab1a对信号通路活性的调控。为进一步验证rab1a通过活化ERK MAPK信号通路促进胃腺癌细胞的恶性生物学行为,我们在稳定过表达rab1a的稳转细胞株BGC823-rab1a给予MEK抑制剂和DMSO作为对照,观察细胞的恶性生物学行为变化,并用Western blot技术检测细胞ERK MAPK信号通路活性的变化。在稳定过表达rab1a蛋白的胃腺癌细胞系BGC823-rab1a,应用免疫共沉淀技术pull down可能和rab1a蛋白相互结合的蛋白分子,再应用蛋白电泳和银染选取出有差异的条带,通过蛋白质谱分析技术鉴定出目的条带中与rab1a结合的蛋白分子,并进一步探讨与rab1a调控胃腺癌细胞恶性生物学行为有关的分子机制。研究结果1.在胃腺癌组织与癌旁粘膜组织的免疫组化结果对比,胃腺癌组织rab1a蛋白表达水平明显高于癌旁粘膜组织rab1a蛋白表达水平,并具有统计学差异。淋巴结转移阳性病例rab1a蛋白高表达率明显多于淋巴结转移阴性病例,并具有统计学差异。对比胃粘膜上皮细胞系和不同胃腺癌细胞系的rab1a蛋白表达情况,胃腺癌细胞的rab1a蛋白表达水平明显高于胃粘膜上皮细胞系。根据免疫组化结果及随访信息,绘制生存曲线,得出rab1a蛋白高表达病例的生存期明显短于rab1a蛋白低表达病例的生存期。2.在胃腺癌组织原发灶与转移灶的免疫组化结果对比中,转移灶rab1a蛋白表达水平明显高于原发灶rab1a蛋白表达水平,并具有统计学差异。稳定过表达rab1a蛋白后,与转染空载质粒细胞相比,人胃腺癌细胞系AGS-rab1a,BGC823-rab1a的恶性生物学行为明显增强,并具有统计学差异。稳定knockdown rab1a蛋白后,与转染空载质粒细胞相比,人胃腺癌细胞系MKN45-rab1a-kd,MKN28-rab1a-kd的恶性生物学行为明显减弱,并具有统计学差异。3.应用信号通路磷酸化抗体芯片筛选活性变化明显的信号通路,再通过生物信息学技术检索出与rab1a蛋白可能有关联的信号通路是PI3K/AKT信号通

关键词： rab1a 胃腺癌迁移侵袭 ERK MAPK

rab1a的表达和结肠癌细胞增殖和迁移侵袭能力的相关性

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Rab1A的表达和结肠癌细胞增殖和迁移侵袭能力的相关性

作者：程正武苏州大学

学位级别：硕士

目的:探索rab1a基因在结直肠癌中的表达情况,通过调控rab1a基因的表达,研究调控rab1a表达后对结肠癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力的影响,为rab1a成为结直肠恶性肿瘤个体化治疗的重要靶点提供依据。方法:通过免疫组织化学方法（Immunohi... 详细信息

目的:探索rab1a基因在结直肠癌中的表达情况,通过调控rab1a基因的表达,研究调控rab1a表达后对结肠癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力的影响,为rab1a成为结直肠恶性肿瘤个体化治疗的重要靶点提供依据。方法:通过免疫组织化学方法（Immunohistochemistry,IHC）检测100例结直肠癌组织及癌旁正常组织中rab1a的表达情况,通过实时定量PCR技术检测15例结直肠组织（其中包括正常上皮组织、腺瘤以及腺癌组织分别五例）中rab1a的m RNA表达情况,通过检索Oncomine综合分析rab1a基因在结直肠癌、结直肠黏膜内癌及正常结直肠组织的表达情况。通过蛋白免疫印迹法（Western blotting,WB）检测常见的六种结肠癌细胞株rab1a蛋白表达情况,筛选出rab1a高表达的细胞株,通过si-RNA靶向下调rab1a高表达细胞株,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、Transwell实验及划痕实验被用来评估细胞的增殖和迁移侵袭能力。结果:我们通过免疫组化技术检测了100例结直肠癌及29例癌旁组织中rab1a的表达,发现rab1a基因的表达在肠癌组织中显著高于正常组织（癌旁组织）,rab1a在结直肠癌和癌旁标本中的阳性率分别为78%和24%,有明显差异,具有统计学差异（p＜0.001）。接着通过检索Oncomine综合分析表明rab1a在结直肠癌中表达明显高于正常组织,进一步亚组分析,发现在结肠黏膜内癌和直肠黏膜内癌中rab1a的表达强于正常结肠组织,差异具有统计学意义,p值分别为0.032、0.015。随后通过定量PCR技术检测15例结直肠标本（正常组织、腺瘤、结直肠癌各5例）中rab1a基因的m RNA表达情况,发现rab1a在结直肠癌组织表达明显高于正常组织和腺瘤组织,而rab1a的表达在正常组织和腺瘤之间未见明显差异。此外,通过Western blotting发现SW480表达较高,通过靶向下调rab1a表达后显著抑制SW480细胞的增殖和迁移侵袭能力。结论:rab1a是结直肠癌致癌基因,靶向下调rab1a基因表达后显著减弱肠癌细胞株的增殖和迁移侵袭能力,rab1a有望在结直肠癌的早期诊断上成为新的生物分子及个体化治疗中成为新的靶点。

关键词： rab1a 结直肠癌细胞增殖细胞迁移