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rab11a效应因子FIP5在FLCN-rab11a结合中的作用

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Rab11A效应因子FIP5在FLCN-Rab11A结合中的作用

作者：李琳西北农林科技大学

学位级别：硕士

Birt-Hogg-Dubé（BHD）综合征是一种动物遗传疾病,目前认为FLCN突变是导致BHD综合征的一个主要遗传因素,然而FLCN的生物学功能与BHD综合征的关系至今仍未阐明。有证据表明,FLCN能够结合多种rab家族蛋白调节细胞内囊泡运输过程。我们的... 详细信息

Birt-Hogg-Dubé（BHD）综合征是一种动物遗传疾病,目前认为FLCN突变是导致BHD综合征的一个主要遗传因素,然而FLCN的生物学功能与BHD综合征的关系至今仍未阐明。有证据表明,FLCN能够结合多种rab家族蛋白调节细胞内囊泡运输过程。我们的近期研究发现,FLCN是回收运输关键调节因子rab11a的一个结合蛋白,FLCN通过DENN蛋白结构域与rab11a结合,抑制氨基酸转运蛋白PAT1向溶酶体运输,促进PAT1向细胞表面运输,这有助于维持溶酶体内的氨基酸水平,从而正向调控mTORC1信号通路。该发现揭示出FLCN在回收运输中的一项新功能,并为阐明FLCN的生物学功能提供了新线索。为了深入调查FLCN与rab11a作用的分子机理,在本项研究中,我们使用体外培养的人源胚胎肾细胞HEK293为模型,采用多种生物化学的研究方法调查了FLCN与rab11a的结合情况,获得了以下主要结果。（1）为了调查FLCN能否直接结合rab11a,我们使用原核表达系统分别制备了人源FLCN蛋白,使用真核系统表达了rab11a蛋白,然后使用纯化的FLCN和rab11a蛋白开展了体外pull down实验。结果发现FLCN在体外不能与rab11直接结合,提示FLCN可能通过其它效应因子结合rab11a。（2）FIP5是在体内广泛表达的一个rab11a的效应因子,为了研究FIP5是否是帮助FLCN与rab11a结合的一个桥梁蛋白,我们制备了稳定干扰FIP5的HEK293细胞系（shFIP5）,发现抑制FIP5的表达对mTORC1的活性没有显著影响,免疫共沉淀的实验结果显示抑制FIP5的表达不影响FLCN与rab11a结合。（3）为了明确FIP5在FLCN-rab11a结合中的作用,我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备了FIP5基因敲除的HEK293细胞系。结果发现,敲除FIP5对mTORC1活性没有显著影响,FLCN与rab11的相互作用也没有显著变化。根据以上结果,我们认为FLCN可能通过某种未知的桥梁蛋白与rab11结合,在这个过程中,FIP5没有起主要的作用。

关键词： FLCN rab11a FIP5 mTORC1 免疫共沉淀

rab11a对宫颈癌SiHa细胞系增殖、迁移、侵袭及自噬相关基因的影响

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RAB11A对宫颈癌SiHa细胞系增殖、迁移、侵袭及自噬相关基因的影响

作者：杨小艳延安大学

学位级别：硕士

研究背景:宫颈癌(Cervical Cancer),是发生在子宫颈部位的女性生殖道最常见的恶性肿瘤,虽然研究表明它的发病率与死亡率近年来虽呈下降趋势,但是发病人群却愈加年轻化,这一现象促使众多学者们更加锲而不舍的想要攻克宫颈癌这一难题。HPV... 详细信息

研究背景:宫颈癌(Cervical Cancer),是发生在子宫颈部位的女性生殖道最常见的恶性肿瘤,虽然研究表明它的发病率与死亡率近年来虽呈下降趋势,但是发病人群却愈加年轻化,这一现象促使众多学者们更加锲而不舍的想要攻克宫颈癌这一难题。HPV(人乳头瘤病毒)感染、初次性生活小于16岁、不洁性生活史、多产及吸烟等多种因素会导致宫颈癌发生,其中以HPV感染为主,但是最新的宫颈癌研究现状报告时刻提醒着我们一个不容乐观的现象,由于文化水平不足和宣传不到位等因素,全球仍然有将近2/5的女性不清楚HPV在宫颈癌中扮演的重要角色,这些将会降低HPV疫苗接种率进而在一定程度上影响宫颈癌的发病率与死亡率。近年来国内外关于宫颈癌相关研究的进展可谓是突飞猛进,现阶段已经进入了更加精细化的分子与基因水平。例如经研究发现许多微小RNA都参与了宫颈癌的发生和发展,它们表达量的异常与宫颈癌症密切相关,它们有些可以显著改变HPV DNA的复制,进而对宫颈癌的发生和发展产生重要影响,而rab11作为众多微小RNA的靶基因也逐渐步入了大家的研究视野。rab11a是rab11家族的主要亚型之一,它之所以能够参与人类多种肿瘤的发生发展,这依赖于其作为主要成员参了多种独立的分子机制,如形成运动蛋白复合物,胞囊运输,在GTP与GDP结合状态之间相互转换而影响细胞中的磷酸化过程,进而抑制肿瘤的发生发展等。虽然自噬早在1963年就被提出,但是由于科学技术限制,对其研究的进展十分缓慢,所以并未引起广泛关注。直到1990年其复杂的发生过程被严谨而又直观地展现后,它的热度就再未消退,尤其是在各类肿瘤发生及预后中的研究,当然也包括宫颈癌。不同于传统的实验方法,生物信息学分析近年来可谓是炙手可热,发展的如火如荼。它是一种多学科融合的新技术,主要是利用计算机科学和生物学原理把基因学、组织学、微生物学等多个领域的庞大数据非常快速地获取、处理、分析、可视化,最后进行结果解释和应用。我们课题组前期已研究了mi R-543对宫颈癌SiHa细胞的生物学功能及自噬的影响,发现它可能是通过调控自噬去影响宫颈癌的发生发展,并且通过生物信息学技术预测了mi R-543与自噬相关的靶基因:rab11a。本研究将基于GEPIA2数据库分析rab11a在宫颈癌中的表达情况及其与宫颈癌患者的生存分析,通过TCGA数据库分析其与宫颈癌临床病理资料之间的关系,进一步佐证其是否参与了宫颈癌的进展,探究其可能的作用机制,为早期预防、诊治宫颈癌提供新的研究思路。研究目的:1.通过生物信息学技术分析预测rab11a在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌患者生存率的影响;2.在宫颈癌组织及细胞中检测rab11a表达水平,探究rab11a表达水平的改变对宫颈癌SiHa细胞的生物学功能的影响;3.分析rab11a表达水对自噬相关基因的影响。研究方法:1.通过GEPIA2数据库分析rab11a在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌患者生存率的影响;应用TCGA数据库进行数据的收集与分析,最终选择254例宫颈癌患者,进行rab11a的表达水平与临床病理资料相关性的分析;2.检测选取的23例宫颈癌患者癌组织、相应正常宫颈组织中rab11a表达水平,分析其与临床病理学资料之间的相关性;构建rab11a低表达的SiHa细胞系,通过qRT-PCR技术、CCK8实验、细胞划痕实验、细胞集落形成实验、Transwell实验验证敲低rab11a的表达后对宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭的影响;3.通过qRT-PCR技术检测敲低rab11a后宫颈癌SiHa细胞系自噬相关基因Beclin1、LC3、P62 m RNA的表达水平。研究结果:1.经数据库分析发现,高表达rab11a后宫颈癌患者的生存率显著下降,即rab11a参与了宫颈癌的发生发展;***-PCR结果表明rab11a在宫颈癌细胞、组织中高表达;CCK8实验、划痕实验、细胞集落形成实验、Transwell实验表明敲低rab11a的表达可以抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖、迁移及侵袭;***-PCR结果表明低表达rab11a表达,自噬相关蛋白Beclin1、LC3 m RNA的表达水平显著升高,选择性自噬受体P62 m RNA的表达水平显著降低,敲低rab11a的表达后宫颈癌中自噬被激活。研究结论:1.生物信息学分析结果显示,rab11a在宫颈癌患者中高表达,且与宫颈癌患者的生存率相关;2.本研究初步验证了rab11a在宫颈癌中起到的促癌基因作用,低表达rab11a后能够非常有效地抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的能力;3.抑制rab11a的表达,宫颈癌SiHa细胞的自噬活性增高。

关键词：宫颈癌 rab11a 自噬

miR-125在甲状腺癌组织中的表达及通过靶向负调控rab11a促进甲状腺癌细胞活性的研究

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现代肿瘤医学 2021年第13期29卷 2244-2248页

作者：郭颖俞铭文雷铭上海交通大学医学院附属瑞金医院甲状腺血管外科上海200020

目的:探讨miR-125在甲状腺癌组织中的表达及促进甲状腺癌细胞增殖的相关机制。方法:采用RT-PCR法检测26例甲状腺乳头状癌(PTC)标本和4株PTC细胞株中miR-125的表达水平。采用CCK-8法、细胞集落形成实验、Transwell实验以及流式细胞法验证... 详细信息

目的:探讨miR-125在甲状腺癌组织中的表达及促进甲状腺癌细胞增殖的相关机制。方法:采用RT-PCR法检测26例甲状腺乳头状癌(PTC)标本和4株PTC细胞株中miR-125的表达水平。采用CCK-8法、细胞集落形成实验、Transwell实验以及流式细胞法验证miR-125在PTC细胞中的作用。采用双荧光素酶实验验证rab11a是否是miR-125的直接靶点。结果:miR-125在甲状腺癌组织中的相对表达水平显著高于癌旁正常组织(Prab11a是miR-125的直接靶点。将miR-125模拟物、抑制剂或miRNA NC(100 nmol/L)转染KTC-1细胞后,rab11a mRNA水平均无明显改变。但Western blot检测显示,与对照组相比,miR-125 mimics组rab11a蛋白表达显著降低,miR-125 inhibitor组rab11a蛋白表达显著增加。表明miR-125不影响rab11a mRNA的稳定性,但在转录后水平调节rab11a蛋白的表达。结论:miR-125通过在转录后水平负调控rab11a蛋白的表达而发挥促甲状腺癌的作用。miR-125有望成为PTC患者诊断和治疗的新靶点。

关键词：甲状腺癌 miRNA rab11a

宿主蛋白rab11a调控牛病毒性腹泻病毒复制的作用研究

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宿主蛋白Rab11a调控牛病毒性腹泻病毒复制的作用研究

作者：权冉新疆农业大学

学位级别：硕士

牛病毒性腹泻病(BVD)由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)而引起的,该病在全球肉牛和奶牛养殖业中普遍存在,感染BVDV能引起牛多种临床症状,如高热、腹泻、呼吸系统疾病、流涎、停食、产死胎或者畸形胎、粘膜出血等,并且对犊牛造成持续性感染和免... 详细信息

牛病毒性腹泻病(BVD)由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)而引起的,该病在全球肉牛和奶牛养殖业中普遍存在,感染BVDV能引起牛多种临床症状,如高热、腹泻、呼吸系统疾病、流涎、停食、产死胎或者畸形胎、粘膜出血等,并且对犊牛造成持续性感染和免疫耐受等,是一种复杂的接触性传染疾病。BVD的致病机制复杂,缺乏有效的治疗手段,对养牛业造成严重的经济损失。世界动物卫生组织(WOAH)将其列在必须上报疫病的列表内,因此农业部发布公告将BVD定为三类动物疫病。所以,探索BVDV复制机制对BVD防控的药物和疫苗具有重要的意义。前期研究发现,敲除OCLN(Occludin,OCLN)能够抑制BVDV的入侵,使用蛋白邻近标记技术BIOID调取与OCLN互作的关键宿主因子,结果发现rab小分子GTP酶家族的成员rab11a(Member Ras Oncogene Family,rab11a)与OCLN相互作用,rab11a是内吞再循环过程的关键因子,主要参与再循环内体的形成。而rab11a是否影响BVDV复制,rab11a是否与OCLN相互作用进而影响BVDV,尚未见报道。本试验利用CRISPR/Cas9技术敲除rab11a基因,探究rab11a是否影响BVDV的体外复制,使用分子对接技术预测蛋白互作位点,探索BVDV复制的机制。具体内容如下:***/Cas9技术敲除rab11a对BVDV复制的研究为探索rab11a对BVDV复制的影响,使用CRISPR/Cas9技术成功构建慢病毒感染介导的rab11a KO细胞系,并通过实时荧光定量PCR(Real-time quantitive PCR,q PCR)、Western blot、免疫荧光染色技术、细胞病变效应(Cytopathic effect,CPE)现象以及子代病毒滴度的试验发现,在感染BVDV后rab11a的表达量增加,与Scramble组相比,感染12 h后rab11a KO就开始出现了BVDV m RNA水平显著性降低的情况,36 h Scramble细胞出现皱缩、空泡、脱落死亡等CPE现象,同时显著性降低了BVDV ds RNA水平的积累。表明rab11a缺失可以显著性抑制BVDV的复制。***11a和紧密连接蛋白OCLN相互作用的研究为研究rab11a与OCLN蛋白之间是否发生相互作用,使用分子对接技术预测了rab11a与紧密连接蛋白Occludin(OCLN)的互作位点,并通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)验证了rab11a与OCLN存在相互作用,发现OCLN与rab11a I44、rab11a F47两个位点存在互作,rab11a与OCLN Y113、OCLN Y119、OCLN Y121三个位点存在互作;通过共定位方法证明了rab11a与OCLN存在共定位现象,并且在感染BVDV后,共定位现象更加明显。表明rab11a与OCLN蛋白之间存在相互作用。***11a影响BVDV复制的作用机制研究为探究rab11a影响BVDV复制的作用机制,慢病毒感染介导的方法成功构建rab11a KO的单克隆细胞系,通过基因回补试验回补,Western blot检测发现rab11a WT、rab11a I44A、rab11a F47A回补成功,并通过q PCR、CPE现象以及子代病毒滴度的试验检测发现,感染BVDV后,通过q PCR检测发现回补后rab11a I44A和rab11a F47A的病毒载量相较于rab11a WT是降低的,相较于对照组,敲除细胞和回补细胞在感染BVDV后,出现少量的核固缩、脱落死亡等CPE现象,子代病毒滴度也是显著性降低。表明rab11a I44、rab11a F47是影响BVDV复制的关键位点。以上研究结果表明,本试验成功获得rab11a KO细胞系,且敲除细胞内吞的关键因子rab11a能够抑制BVDV的体外复制;同时利用分子对接技术预测了rab11a与OCLN的互作位点,通过Co-IP试验验证了rab11a与OCLN蛋白之间存在相互作用;激光共聚焦显微镜也证实了rab11a与OCLN存在共定位现象,并且感染BVDV后,共定位现象更为明显;通过基因回补试验发现rab11a I44、rab11a F47是rab11a与OCLN互作的直接关键位点,突变后直接影响BVDV复制,为后续rab11a介导BVDV感染的分子机制的研究提供理论依据。

关键词：牛病毒性腹泻病毒 rab11a CRISPR/Cas9 紧密连接蛋白OCLN 慢病毒

抑制SNARE复合物表达激活rab11a-myosin9通路引起头颈癌外泌体分泌减弱及MVB样EV簇释放

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抑制SNARE复合物表达激活Rab11a-myosin9通路引起头颈癌外泌体分...

作者：刘蓉安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:头颈癌是一大类发生在头颈部的癌症的总称,它们严重地影响人们的生活质量和生命健康,不断上升的患病率和死亡率使得其发病机制和治疗方法成为人们研究的焦点。肿瘤细胞外泌体应用于人类疾病的诊断也是近年来一个重要的研究方向,而... 详细信息

背景:头颈癌是一大类发生在头颈部的癌症的总称,它们严重地影响人们的生活质量和生命健康,不断上升的患病率和死亡率使得其发病机制和治疗方法成为人们研究的焦点。肿瘤细胞外泌体应用于人类疾病的诊断也是近年来一个重要的研究方向,而外泌体对肿瘤细胞恶性生物学行为的调控作用也逐渐被人们了解。据报道肿瘤细胞外泌体的释放量明显高于正常细胞,通过调控外泌体的生物发生与释放治疗肿瘤有望成为一种有效的治疗手段。在对外泌体的深入研究中发现肿瘤细胞外泌体能够通过激活肿瘤细胞内多条信号通路促进肿瘤的恶性生物学行为。同时,研究表明抑制肿瘤外泌体的分泌能够部分抑制肿瘤的发生发展。在头颈癌的前期研究中,我们发现抑制头颈癌细胞外泌体分泌导致细胞凋亡水平增强、增殖能力减弱,但不能完全杀死肿瘤细胞。我们将探讨头颈癌细胞抵抗由于外泌体分泌抑制而带来的损伤的机制。方法:利用免疫荧光检测抑制N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体(Nethylmaleimide sensitive factor attachment protein receptor,SNARE)复合物后多囊泡体(Multivesicular bodies,MVB)与自噬体共定位的情况;利用透射电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析检测包裹外泌体的囊泡粒径以及浓度;通过细胞化学染色或蛋白免疫印迹检测囊泡CD63抗原、囊泡相关膜蛋白2(Vesicle-associated membrane protein 2,VAMP2)蛋白的表达水平、特异性siRNA的敲低效率以及自噬相关蛋白的表达水平;利用TUNEL实验检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻情况;利用蛋白质组学分析与RAS致癌基因家族成员(member RAS oncogene family,rab11a)相互作用的蛋白;利用细胞划痕检测抑制MVB样EV簇释放对头颈癌细胞系HN4和CNE2细胞迁移能力的影响;利用Transwell检测抑制MVB样EV聚集体释放对头颈癌细胞系HN4和CNE2细胞侵袭能力的影响;利用CCK-8检测抑制MVB样EV聚集体释放对头颈癌细胞系HN4和CNE2细胞增殖能力的影响;利用流式细胞术检测抑制MVB样EV聚集体释放对头颈癌细胞系HN4和CNE2细胞凋亡水平的影响。结果:(1)敲低SNARE复合物组分突触小体相关蛋白25(Synaptosome associated protein 25,SNAP25)和VAMP2使头颈癌细胞HN4的外泌体释放被抑制后,胞内自噬途径未被激活。(2)头颈癌细胞HN4外泌体的释放被抑制后,细胞释放大囊泡被证实属于MVB样的EV聚集体。(3)蛋白质谱分析发现与rab11a相互作用相关的蛋白肌球蛋白(Myoglobulin,Myosin9)(4)头颈癌细胞HN4外泌体的释放被抑制后,rab11a-Myosin9复合物介导细胞膜内的磷脂酰丝氨酸发生外翻以诱导MVB样的EV聚集体释放。(5)头颈癌细胞HN4外泌体的释放被抑制后,敲低头颈癌细胞rab11a、Myosin9蛋白水平表达,使得MVB样的EV聚集体无法释放,该聚集体在胞内累积导致细胞迁移、侵袭以及增殖能力减弱、凋亡增强,而且PLSCR1蛋白在磷脂酰丝氨酸外化过程中能发挥协同促进作用。结论:头颈癌细胞因SNARE复合物组分SNAP25和VAMP2被敲低而导致外泌体释放抑制后,细胞内堆积的MVB没有与溶酶体融合降解,而是通过MVB样的EV聚集体的形式被分泌至胞外,分泌过程是通过rab11a-Myosin9复合物携带利用磷脂酰丝氨酸外翻将包裹腔内囊泡的MVB样聚集体释放到胞外,从而减轻因细胞内MVB聚集导致的细胞损伤,维持细胞的稳态。

关键词： MVB 外泌体 rab11a 头颈癌 MYH9 SNARE复合物

对C9ORF72-SMCR8-WDR41调控rab8a和rab11a分子机制的研究

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对C9ORF72-SMCR8-WDR41调控Rab8a和Rab11a分子机制的研究

作者：盛靖雯四川大学

学位级别：硕士

C9ORF72(Chromosome 9 open reading frame 72),一个能与 SMCR8(Smith-Magenis syndrome chromosomal region candidate gene 8)和WDR41(WD40 repeat-containing protein 41)形成稳定复合体的蛋白,参与体内多种细胞进程,其功能的异常与 ALS(Amyotrophic lateral sclerosis)和 FTD(Frontotemporal dementia)疾病的发生密切相关。ALS是一种进行性神经退行性疾病,影响患者的上下运动神经元,导致肌肉无力和呼吸系统活动障碍,一般患者确诊后的存活时间仅为2-4年。目前的研究表明家族性ALS和FTD最常见的遗传致病因素是C9ORF72基因非编码区内GGGGCC六核苷酸的重复扩增突变,该突变可能是通过产生神经毒性物质和影响C9ORF72基因的表达从而参与疾病进程。然而,C9ORF72异常与ALS疾病发生之间的具体关联机制尚不明确,其生理功能也还有待更深入的研究。自噬是一种维持细胞稳态的信号通路,对于清除错误折叠的蛋白质和受损的细胞器至关重要,并且与神经退行性疾病密切相关。已有研究表明,C9ORF72-SMCR8-WDR41复合体(以下简称CSW复合体)通过与ULK1(Unc-51-like kinase 1)复合体相互作用参与自噬进程的调控。此外,SMCR8的磷酸化也受到自噬相关激酶TBK1(TANK binding kinase 1)的调控。C9ORF72和SMCR8 都属于 DENN(Differentially Expressed in Normal and Neoplastic cells)家族蛋白,主要作为小G蛋白家族中rab GTPase的鸟核苷酸交换因子(GEF,Guanine Nucleotide Exchange Factor)发挥功能,多项研究表明,C9ORF72不仅影响自噬的起始,还在溶酶体运输和自噬体-溶酶体融合进程中起关键作用,而其信号下游的rab GTPase对于胞内广泛的囊泡运输事件至关重要。因此,C9ORF72可能通过调节rab GTPase的活性从而参与膜转运的调控。目前已有研究报道,CSW复合体可在体外调节多种rab GTPase上GDP和GTP的交换速率,但CSW复合体的胞内下游效应蛋白及具体生理功能却仍然不清楚。因此,对CSW复合体的结构解析,以及在结构基础之上对其生理功能的探索具有重要意义。在本论文中,我们通过体外蛋白重组方法,得到了生理状态下的CSW蛋白复合体,并利用冷冻电镜技术解析了其三维结构,通过生物物理的方法对CSW复合体调控rab GTPase的分子机制进行了探索,为研究靶向C9ORF72-rab信号通路的小分子药物提供了可靠模型,并为寻找遗传性ALS和FTD新的治疗靶点做出了有益探索。首先,我们从Sf9昆虫细胞中成功表达并纯化了 C9ORF72-SMCR8蛋白复合体以及WDR41蛋白,并通过体外孵育的方法,使C9ORF72-SMCR8蛋白复合体与WDR41蛋白充分结合,在凝胶过滤层析的进一步分离后,成功得到了性质较好的CSW蛋白复合体,并利用冷冻电镜方法解析了 CSW复合体的三维结构。其次,为了探索CSW复合体的生理功能,我们针对文献报道的多种rab GTPase,从中选择了 rab7a、rab8a、rab11a、rab39a、rab39b 进行了基于生物发光的GTPase体外活性测定,发现CSW复合体只能提高rab8a和rab11a水解GTP的活性,并且WDR41对于提高rab GTPase的活性不是必需的。然而,基于MANT-GDP的核苷酸交换实验结果表明,CSW复合体并不能促进rab8a和rab11a上MANT-GDP的解离,提示我们CSW复合体不是rab8a和rab11a的GEF。我们将C9ORF72-SMCR8 复合体的结构与FLCN-FNIP2复合体的结构进行了三维模型对比,发现二者的空间结构高度相似,且SMCR8的Arg147与FLCN的Arg164在结构中高度保守,而后者是FLCN-FNIP2复合体GAP(GTPase-activating protein)活性的关键氨基酸残基。因此我们克隆并表达了C9ORF72-SMCR8R147A突变体,发现其不能像野生型C9ORF72-SMCR8复合体那样提高rab8a和rab11a水解GTP的活性。结合后续滴定实验的结果,我们最终证明了 CSW复合体对rab8a和rab11a的体外GAP活性,且SMCR8的Arg147 是影响 C9ORF72-SMCR8 复合体 GAP 活性的“Arginine finger”。最后,我们还对C9ORF72-S

关键词： ALS C9ORF72 SMCR8 WDR41 rab8a rab11a GAP GEF

rab11a通过PI3K/AKT和Ras/MEK/ERK信号通路调节胰腺癌细胞凋亡和侵袭

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现代生物医学进展 2021年第5期21卷 811-818页

作者：王云朱星枚罗玉梅王小云和水祥西安交通大学第一附属医院消化内科陕西西安710061 陕西中医药大学药学院陕西咸阳712046 西安交通大学第一附属医院感染科陕西西安710061

目的:探究rab11a在胰腺癌中的表达模式及其对肿瘤生长和转移的影响。方法:通过免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot检测60例胰腺癌患者的癌组织和癌旁组织中rab11a的表达。通过对人胰腺癌细胞系PANC1转染靶向rab11a的小干扰RNA或过表... 详细信息

目的:探究rab11a在胰腺癌中的表达模式及其对肿瘤生长和转移的影响。方法:通过免疫组织化学法、RT-PCR和Western blot检测60例胰腺癌患者的癌组织和癌旁组织中rab11a的表达。通过对人胰腺癌细胞系PANC1转染靶向rab11a的小干扰RNA或过表达rab11a的pcDNA3.1质粒考察rab11a对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。通过Western blot检测PANC1细胞中PI3K、AKT、Ras、MEK、ERK1/2和GSK3β的磷酸化水平。结果:胰腺癌组织中rab11a的表达水平均高于癌旁组织(Prab11a的表达水平与TNM分期和淋巴结转移有关(Prab11a抑制了PANC1细胞的增殖(Prab11a促进了PANC1细胞的凋亡(Prab11a抑制了PANC1细胞的迁移能力(Prab11a抑制了PANC1细胞的侵袭能力(Prab11a则促进了PANC1细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制了细胞凋亡(Prab11a抑制了PANC1细胞中PI3K/AKT和Ras/MEK/ERK信号通路的活化(Prab11a对细胞增殖的促进作用(Prab11a的高表达是胰腺癌预后恶化的潜在生物标志物。靶向抑制rab11a可通过抑制PI3K/AKT和Ras/MEK/ERK信号通路来降低胰腺癌的生长和转移能力。

关键词： rab11a 胰腺癌淋巴结转移 PI3K/AKT信号通路 Ras/MEK/ERK信号通路

miR-378通过靶向rab11a促进乳腺癌细胞系增殖和迁移

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浙江中西医结合杂志 2022年第5期32卷 411-415页

作者：凌晨卢毓方珍裕陆晓磊张叶飞浙江省嘉兴市第一医院检验科嘉兴314000

目的探讨miR-378在乳腺癌细胞系表达及作用机制。方法应用TargetScan分析miR-378的作用靶基因rab11a。应用RT-PCR检测乳腺癌细胞系miR-378和rab11a mRNA表达水平。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞miR-378,NC(normal control)对照,采用MTT法和Transwell法检测乳腺癌细胞增殖和迁移能力的变化;采用RT-PCR和Western blot检测rab11a表达。荧光素酶报告分析miR-378与靶基因rab11a之间的信号。结果miR-378在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231表达上调[(4.23±0.15)和(4.67±0.12)比(0.98±0.03),Prab11a在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中表达下调[(0.49±0.09)和(0.45±0.08)比(1.01±0.02),Prab11a蛋白表达水平明显增加[MCF-7:(0.88±0.12)比(1.32±0.11),P11),P均rab11a促进乳腺癌细胞增殖和迁移。

关键词： miR-378 rab11a 乳腺癌增殖迁移

miR-509-3p与rab11a在喉鳞状细胞癌中的表达及其意义

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黑龙江医药科学 2021年第5期44卷 79-81页

作者：金秀琳詹俊杰范宗宪佳木斯大学附属第一院耳鼻喉科黑龙江佳木斯154003

目的:探讨miR-509-3p和预测靶基因rab11a在喉癌发病中的作用。方法:通过实时荧光定量逆转录PCR检测15例喉癌组织及癌旁正常组织中miR-509-3p和预测靶基因rab11a的表达情况。用miR-509-3p mimics转染喉癌Hep-2细胞株后,检测预测靶基因rab... 详细信息

目的:探讨miR-509-3p和预测靶基因rab11a在喉癌发病中的作用。方法:通过实时荧光定量逆转录PCR检测15例喉癌组织及癌旁正常组织中miR-509-3p和预测靶基因rab11a的表达情况。用miR-509-3p mimics转染喉癌Hep-2细胞株后,检测预测靶基因rab11a的表达情况,并分析其相关性。结果:①实时荧光定量逆转录PCR检测结果显示,在喉癌组织中miR-509-3p表达低于癌旁正常组织;而rab11a的表达明显高于癌旁正常组织(Prab11a的表达较阴性对照组下调,差异有统计学意义(Prab11a在喉癌组织表达水平高于正常组;经转染miR-509-3p的喉癌Hep-2细胞株rab11a表达明显高于对照组。结论:miR-509-3p可能靶基因之一为rab11a,通过下调预测靶基因rab11a表达的负向调控机制,发挥抑癌作用。揭示miR-509-3p在喉癌中可能通过减少致癌基因rab11a表达发挥抑癌作用。

关键词：喉癌 miRNA miR-509-3p rab11a