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rybp基因稳定沉默的HL-60细胞系的构建

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白血病．淋巴瘤 2012年第10期21卷 577-580页

作者：周家砚邓晖王春丽张玉平应逸许艳丽王顺清广州医学院附属广州市第一人民医院血液科 510180

目的利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术，建立rybp基因稳定沉默的HL．60细胞系。方法设计针对rybp基因的5条短发夹状RNA（shRNA）序列，构建rybpshRNA慢病毒重组载体，分别包装成慢病毒颗粒，直接感染HL-60细胞，同时设空载体和阴性... 详细信息

目的利用慢病毒介导的RNA干扰（RNAi）技术，建立rybp基因稳定沉默的HL．60细胞系。方法设计针对rybp基因的5条短发夹状RNA（shRNA）序列，构建rybpshRNA慢病毒重组载体，分别包装成慢病毒颗粒，直接感染HL-60细胞，同时设空载体和阴性对照shRNA慢病毒对照组。通过观察绿色荧光蛋白表达以监测感染效率，经嘌呤霉素（终质量浓度8μg／ml）筛选出稳定感染细胞。Westernblot实验初步鉴定出蛋白水平最低的rybpshRNA组，用实时定量聚合酶链反应（PCR）进一步检测该组细胞mRNA表达水平。结果慢病毒感染的HL-60细胞经嘌呤霉素筛选成功，与对照组比较，5条rybpshRNA组细胞rybp表达均有不同程度减低（P〈0．01），其中以shRNA2沉默效果最佳，且shRNA2组的rybp基因mRNA水平降低了95％以上（P〈0．05）。结论慢病毒介导的shRNA2能高效、稳定地沉默rybp基因的表达，成功构建了rybp基因稳定沉默的HL-60细胞系。

关键词： rybp基因短发夹状RNA HL-60细胞慢病毒属 RNA干扰

rybp基因对秦川牛成肌细胞分化作用的研究

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Rybp基因对秦川牛成肌细胞分化作用的研究

作者：赵艳芳西北农林科技大学

学位级别：硕士

随着人们生活水平不断提高,牛肉作为一种高蛋白低胆固醇的健康食品越来越受到人们的青睐,市场牛肉的需求量越来越大,供给不足,牛肉价格持续上涨。如何提高牛肉产量和改善牛肉品质成为广大育种工作者关注的热点,而对肉牛肌肉组织生长发... 详细信息

随着人们生活水平不断提高,牛肉作为一种高蛋白低胆固醇的健康食品越来越受到人们的青睐,市场牛肉的需求量越来越大,供给不足,牛肉价格持续上涨。如何提高牛肉产量和改善牛肉品质成为广大育种工作者关注的热点,而对肉牛肌肉组织生长发育调控机制的研究将从分子水平揭示影响肉牛产肉性能和牛肉品质形成的机理,为肉牛的分子育种工作奠定基础。Ring和YY1结合蛋白(Ring and YY1 binding protein,rybp)已在小鼠上被证实对肌生成具有抑制作用,而在牛上还未见相关报道,仍需要进一步研究。本研究以rybp基因为目标基因,利用实时定量PCR技术,检测了该基因在秦川牛16种组织、5个不同发育阶段肌肉、脂肪组织以及不同分化阶段牛成肌细胞中表达水平,利用腺病毒介导该基因在成肌细胞中过量表达,探究rybp基因对牛成肌细胞分化的作用,通过转录组测序,筛选和鉴定过量表达rybp基因后的差异表达基因,初步揭示了rybp基因在牛成肌细胞分化过程中的功能及其对一些重要的成肌细胞分化相关基因的影响。获得的主要研究结果如下:1.秦川牛rybp基因表达特性分析结果表明,rybp基因在成年秦川牛睾丸组织中表达量最高,而在背最长肌、里脊、心脏等组织中的表达量相对较低;随着秦川牛年龄的增加,rybp基因在肌肉组织中的表达水平逐渐升高,在脂肪组织中的表达水平显著下降;在不同分化阶段成肌细胞中,随着成肌细胞分化进程的推进,rybp基因表达水平逐渐升高,而当分化减速后,rybp基因表达水平逐渐降低。2.克隆得到秦川牛rybp基因的CDS区序列,其长度为687bp,编码229个氨基酸残基,然后成功构建并获得了高滴度牛rybp基因腺病毒过表达载体,病毒滴度为1×109pfu/mL。3.在牛成肌细胞中过表达rybp基因,可显著抑制肌管的形成,这种差异从过表达后2d开始出现,到6d达到最显著。将过表达rybp基因6d后的成肌细胞与对照组细胞进行转录组测序,结果共筛选出1311个差异表达基因,其中有707个基因表达水平上调,604个基因表达水平下调,许多参与肌肉发育相关的功能基因表达水平均下调,且差异表达基因显著富集到32条信号通路,包括Wnt等与肌肉发育相关通路。

关键词：牛 rybp基因成肌细胞肌管腺病毒转录组测序

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牛rybp基因的表达特性分析

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2018年第5期46卷 8-15,29页

作者：赵艳芳张乐王亚宁宁越王洪宝昝林森西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 国家肉牛改良中心陕西杨凌712100

【目的】研究牛rybp基因时空表达图谱,为rybp基因的功能研究奠定基础。【方法】利用实时定量PCR方法,检测rybp基因在秦川牛16种组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾丸、腹膜脂肪、心包脂肪、背最长肌、里脊、大肠、小肠、瘤胃、网胃... 详细信息

【目的】研究牛rybp基因时空表达图谱,为rybp基因的功能研究奠定基础。【方法】利用实时定量PCR方法,检测rybp基因在秦川牛16种组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾丸、腹膜脂肪、心包脂肪、背最长肌、里脊、大肠、小肠、瘤胃、网胃、皱胃和瓣胃)、5个不同发育阶段(6,12,18,24和60月龄)肌肉、脂肪组织以及不同分化阶段(第0,2,4,6,8和10天)牛成肌细胞中的表达特性。【结果】rybp基因在成年秦川牛睾丸组织中的表达量远远高于其他组织,是背最长肌的365倍,而在背最长肌、里脊、心脏等组织中的表达量相对较低。rybp基因在60月龄肌肉组织中表达量是6月龄的7倍,在6,12,18,24月龄表达量呈微弱上升趋势,但差异不显著;rybp基因在6,12,18,24月龄脂肪组织中的表达量分别是60月龄的8.5,6.5,5.6和2.1倍,差异达显著水平;rybp基因在成肌细胞分化第2,4,6,8,10天的表达量分别是第0天的3.6,5.0,9.9,7.0和4.3倍。【结论】随着秦川牛年龄的增加,rybp基因在肌肉组织中的表达水平逐渐升高,在脂肪组织中的表达水平显著下降;在不同分化阶段成肌细胞中,随着成肌细胞分化进程的推进,rybp基因表达水平逐渐升高,而当分化减速后,rybp基因表达水平逐渐降低。牛rybp基因可能对牛肌细胞分化起抑制作用。

关键词：牛 rybp基因实时荧光定量PCR 肌肉脂肪成肌细胞

家蚕rybp基因的结构与表达模式分析及转基因干涉系统的建立

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蚕业科学 2011年第4期37卷 623-629页

作者：张美蓉徐汉福许平震邓党军夏庆友西南大学蚕学与系统生物学研究所重庆400716 江苏科技大学江苏镇江212003

多梳蛋白(polycomb group,PcG)是一类对生物有机体生长发育很重要的转录抑制因子,参与有机体的发育调控。Ring和YY1结合蛋白(Ring and YY1 binding protein,rybp)是在小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)中推断的PcG蛋白成员。基于生物信息学分析方法,设计引物克隆了家蚕的rybp基因(Bmrybp);序列结构分析显示该基因有一个420 bp的完整ORF,由3个外显子和2个内含子组成,编码139个氨基酸,预测其蛋白质分子质量为15.4 kD,等电点为10.36,N端的20～44 aa有一个与蛋白间相互作用有关的锌指结构域(ZnF-RBZ);半定量RT-PCR分析显示,该基因在家蚕5龄3 d幼虫生殖腺中高水平转录;基于GAL4/UAS双元系统,构建了具有Bmrybp序列反向重复结构的转基因干涉表达载体,通过显微注射家蚕早期胚胎,获得了UAS系统的转基因家蚕后代,为研究Bmrybp在家蚕生长发育过程中行使的功能奠定了基础。

关键词：家蚕 rybp基因结构组织表达特征 GAL4/UAS系统转基因干涉

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rybp基因启动子区的甲基化水平分析

RYBP基因启动子区的甲基化水平分析