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甲肝病毒减毒株(H_2)RNA的全长RT-PCR扩增

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生物化学与生物物理进展 1998年第5期25卷 472-475页

作者：周翔谭德勇赖建华昝瑞光云南大学生物系昆明医学院生物教研室

通过ＲＴＰＣＲ技术扩增了甲肝病毒减毒株（Ｈ２）全长ＲＮＡ，并对长片段ＲＴＰＣＲ扩增进行了方法学上的探讨．采用抗血清特异沉淀病毒；盐酸胍酸性酚、氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ，可得到高质量的ＲＮＡ样品；以此ＲＮＡ为... 详细信息

通过ＲＴＰＣＲ技术扩增了甲肝病毒减毒株（Ｈ２）全长ＲＮＡ，并对长片段ＲＴＰＣＲ扩增进行了方法学上的探讨．采用抗血清特异沉淀病毒；盐酸胍酸性酚、氯仿一步法分离纯化病毒ＲＮＡ，可得到高质量的ＲＮＡ样品；以此ＲＮＡ为模板，在无ＲＮＡ酶的逆转录酶作用下，合成单链ｃＤＮＡ；继续以此ｃＤＮＡ为模板，利用３２ｍｅｒ寡核苷酸引物，在Ｔａｑ和ＤｅｅｐＶｅｎｔＤＮＡ多聚酶的作用下进行ＰＣＲ扩增。

关键词：甲肝病毒全长RNA RT-PCR扩增

长链RT-PCR扩增我国登革2型病毒5′半分子

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军事医学科学院院刊 2000年第4期24卷 274-274页

作者：范宝昌赵卫胡志君杨佩英秦鄂德于曼耿丽卿苑锡同军事医学科学院微生物学流行病学研究所北京100071

山茱萸萜类甲羟戊酸合成途径关键酶CoHMGS基因的克隆与分析

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中草药 2021年第18期52卷 5716-5721页

作者：侯典云王瑶瑶刘晓冉张佳琪马占强胥华伟王笑尘河南科技大学农学院河南洛阳471023 洛阳市道地药材繁育与创新利用工程技术研究中心河南洛阳471023 南阳市山茱萸研究所河南南阳474550

目的克隆得到山茱萸Cornus officinalis萜类合成途径的关键酶CoHMGS基因的cDNA序列,并进行相应的生物信息学分析,为深入研究CoHMGS基因的功能奠定基础。方法以山茱萸转录组筛选出的c102453_g2序列为参考序列设计特异引物,以山茱萸叶片总... 详细信息

目的克隆得到山茱萸Cornus officinalis萜类合成途径的关键酶CoHMGS基因的cDNA序列,并进行相应的生物信息学分析,为深入研究CoHMGS基因的功能奠定基础。方法以山茱萸转录组筛选出的c102453_g2序列为参考序列设计特异引物,以山茱萸叶片总RNA,通过RT-PCR扩增获得CoHMGS基因序列,序列纯化回收后连接到pTOPO-T载体上,转化至大肠杆菌DH10B,选取阳性克隆测序。利用生物信息学软件预测CoHMGS基因及其编码蛋白质的功能。结果克隆得到长度为1645 bp的CoHMGS序列,包含1413 bp的完整开放阅读框,编码470个氨基酸。蛋白整体带负电荷,为不稳定亲水性蛋白,定位于细胞质内,不含跨膜结构。结论首次克隆得到山茱萸CoHMGS基因,对其编码蛋白质进行了初步的分析和预测,为深入揭示CoHMGS基因在山茱萸萜类物质合成途径中的功能奠定了基础。

关键词：山茱萸甲羟戊酸途径 CoHMGS RT-PCR扩增基因克隆

新疆绵羊肺腺瘤病理学诊断与全基因组序列分析

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病毒学报 2015年第3期31卷 217-225页

作者：杨素芳梁田赵庆亮张殿卿司俊强张静杨霞盛金良石河子大学动物科技学院石河子832003

为了完成新疆绵羊肺腺瘤病毒诊断及全基因组序列测定,本研究采用兽医临床病理学和组织病理学观察疑似患病羊,并提取病毒悬液进行透射电镜观察,从患病绵羊的肺脏组织中提取基因RNA反转录为cDNA。参照GenBank中外源性绵羊肺腺瘤病毒美国... 详细信息

为了完成新疆绵羊肺腺瘤病毒诊断及全基因组序列测定,本研究采用兽医临床病理学和组织病理学观察疑似患病羊,并提取病毒悬液进行透射电镜观察,从患病绵羊的肺脏组织中提取基因RNA反转录为cDNA。参照GenBank中外源性绵羊肺腺瘤病毒美国株基因序列(AF105220)设计六对引物,对病料样品进行RT-PCR扩增和测序分析。结果表明,"小推车试验"时有鼻液流出,显微镜下观察,患病羊的肺脏有大小不一的腺瘤灶,且肺泡上皮细胞呈乳头状增生,肺泡腔内充满巨噬细胞,病灶中央的细胞核溶解。透射电镜观察到病毒颗粒直径大小约为88nm^125.4nm。RT-PCR扩增病毒基因组片段,获得完整的基因组序列全长7 456bp。与美国代表株(AF105220)和英国代表株(AF357971)BLAST在线比对核苷酸同源性结果分别为96%和95%,与内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)内蒙株(DQ838493)和美国株(EF680300)的核苷酸同源性分别为89.8%和89.9%。获得的全基因组序列的TM区的氨基酸序列中具有外源性绵羊肺腺瘤病毒(exJSRV)特有的致病性"YXXM"序列。说明此基因序列具有致瘤作用,这是我国新疆首次报道的外源性绵羊肺腺瘤病毒的全基因组序列,为更深入的研究新疆绵羊肺腺瘤病毒的生物学特性和致病机理奠定基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒病理组织学观察 RT-PCR扩增序列分析

一株塞内卡病毒A全基因组序列测定与致病性分析

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畜牧兽医学报 2020年第4期51卷 820-826页

作者：赖隆永刘小龙谭礼宁叶盛聪邱灵姗陈盛勇刘楚楚徐磊派生特(福州)生物科技有限公司福州350500 福建农业职业技术学院福州350303

本研究旨在明确塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的同源性关系,并了解SVA-FJLY株的致病性。以分离自福建省某养殖场中的一株SVA-FJLY株为研究对象,参照其原型毒株SVV-001(GenBank No.DQ641257.1)全基因... 详细信息

本研究旨在明确塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的同源性关系,并了解SVA-FJLY株的致病性。以分离自福建省某养殖场中的一株SVA-FJLY株为研究对象,参照其原型毒株SVV-001(GenBank No.DQ641257.1)全基因组序列设计5对引物,通过RT-PCR扩增、测序、拼接,获得SVA-FJLY株全基因组序列并进行序列分析;并通过滴鼻攻毒3~4周龄仔猪。结果表明,SVA-FJLY株基因组全长7275 bp(不包括PolyA),SVA-FJLY株基因组存在一个多聚蛋白、VP1蛋白和VP2蛋白。SVA-FJLY株与参考毒株之间的基因组一级结构有较高的相似性,与HeB01-2017株(MF967574.1)相似性最高,达98.5%;而与SVA原型毒株SVV-001株(DQ641257.1)的相似性较低,为93.9%。SVA-FJLY株与国内几个毒株属于同一个分支,与国内的HeB01-2017株亲缘关系最近,同时与国外Colombia-2016株(KX857728.1)的亲缘关系最近。通过动物试验发现试验组猪攻毒10 d后,试验组2/3发病,对照组3/3正常,未出现仔猪死亡。通过全基因组序列测定获得了SVA-FJLY株全基因组序列并进行序列分析,明确SVA-FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的相似性关系,了解了SVA-FJLY株的致病性,为SVA的反向遗传学和疫苗的研制提供参考依据,同时也丰富了SVA的基因组信息数据库。

关键词：塞内卡病毒A RT-PCR扩增序列分析遗传进化树同源性 SVA-FJLY株致病性

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1株塞内卡病毒A型的基因组序列与演化分析

畜牧兽医学报 2021年第2期52卷 553-559页

作者：李宁郭慧芳王白玉乔麒龙黄庆李永涛王增赵军河南农业大学牧医工程学院郑州450046

旨在分析塞内卡病毒A型(Senecavirus A,SVA)CH-HNCY-2019株的基因组特性和演化,参考SVA毒株SVV-001(GenBank No.NC011349)全基因组序列设计8对引物,通过RT-PCR扩增和测序获得SVA CH-HNCY-2019株全基因序列并进行序列分析。结果显示,SVA分离株CH-HNCY-2019基因组全长为7294个核苷酸,与中国分离株核苷酸相似性为95.9%~99%,与美国经典株SVV-001核苷酸相似性最低。CH-HNCY-2019与大多数中国2017—2018年分离毒株亲缘关系较近,处于同一分支,而与中国2015—2016年分离株亲缘关系较远。与包括2019年中国广东4个SVA分离株在内的其他国内外分离株相比,CH-HNCY-2019的VP1蛋白的722位氨基酸由L突变为Q;VP3蛋白的499位氨基酸由A突变为V,528位氨基酸由P突变为S,582位氨基酸由E突变为K。本研究成功获得1株SVA CH-HNCY-2019全基因组序列,研究结果提示,SVA中国流行株具有多样性,而且在不断地演变,应加强SVA的分子流行病学调查、生物安全措施和疫苗研发以防止SVA在我国猪群中的广泛传播。

关键词：塞内卡病毒A RT-PCR扩增 SVA CH-HNCY-2019 基因组序列分析遗传进化

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猪繁殖与呼吸综合征病毒ZB株的分离与鉴定

黑龙江畜牧兽医 2015年第9期 171-173,176,295页

作者：孟日增刘金华孟庆峰石建平王伟利吴连鹏吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心长春130062

为了确定从高度疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪内脏中分离得到的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的类型,试验进行了形态学观察、血清学分析、免疫学分析、RT-PCR扩增等一系列鉴定分析。结果表明:从疑似病料中分离获得的病毒可以使... 详细信息

为了确定从高度疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的猪内脏中分离得到的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)毒株的类型,试验进行了形态学观察、血清学分析、免疫学分析、RT-PCR扩增等一系列鉴定分析。结果表明:从疑似病料中分离获得的病毒可以使Marc-145细胞产生明显病变,而在Vero和PK-15细胞上不出现细胞病变,从而确定试验获得的病毒为PRRSV,命名为ZB株。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 形态学观察血清学分析免疫学分析 RT-PCR扩增

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四川某猪场猪蓝耳病感染情况检测分析

四川畜牧兽医 2021年第8期48卷 27-29页

作者：胡晓杨蕊内江市种猪场西南大学动物科学学院

为了解四川某猪场猪蓝耳病的感染和带毒情况,本试验采集未免疫过蓝耳病疫苗的3～4个月大架子猪的血液样本,用间接ELISA方法检测猪血清中的蓝耳病抗体,同时根据猪蓝耳病病毒ORF6基因设计引物,进行RT-PCR扩增。结果显示:蓝耳病ELISA抗体... 详细信息

为了解四川某猪场猪蓝耳病的感染和带毒情况,本试验采集未免疫过蓝耳病疫苗的3～4个月大架子猪的血液样本,用间接ELISA方法检测猪血清中的蓝耳病抗体,同时根据猪蓝耳病病毒ORF6基因设计引物,进行RT-PCR扩增。结果显示:蓝耳病ELISA抗体阳性率为63.4%(149/235);19份血液样本中,RT-PCR扩增出阳性1份,阳性率为5.26%。说明该猪场存在猪蓝耳病病毒感染,且架子猪的感染率较高,需要采取进一步防控措施。

关键词：猪蓝耳病 ELISA抗体 RT-PCR扩增

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猪在禽H9N2亚型流感病毒感染人中的作用

中华实验和临床病毒学杂志 2005年第2期19卷 106-109页

作者：郭元吉温乐英张烨王敏郭俊峰李梓舒跃龙中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所流感研究室北京100052

目的　了解猪在禽H9N2亚型流感病毒感染人中的作用。方法　用rt pcr扩增目的基因,用PGEM T Vector(美国Promega公司) 4℃过夜连接,重组质粒转入dH5α细菌,筛选阳性菌落,酶切鉴定,送六合通公司自动测序,然后进行进化树分析。结果　两株... 详细信息

目的　了解猪在禽H9N2亚型流感病毒感染人中的作用。方法　用rt pcr扩增目的基因,用PGEM T Vector(美国Promega公司) 4℃过夜连接,重组质粒转入dH5α细菌,筛选阳性菌落,酶切鉴定,送六合通公司自动测序,然后进行进化树分析。结果　两株山东猪H9N2毒株基因组与人及禽分离出的H9N2病毒均有差异,中国内地从人分离出的H9N2毒株的基因组接近鸡的毒株,而香港特区从人分离出的接近鹌鹑的毒株;禽H9N2毒株不仅宿主范围广,同时其基因组具有多样性。结论　禽H9N2亚型毒株是直接感染人,而不是通过所谓的中间宿主猪,然后再感染人。

关键词：流感病毒感染 H9N2亚型人中 RT-PCR扩增猪基因组目的基因重组质粒酶切鉴定自动测序中国内地香港特区直接感染亚型毒株中间宿主进化树离出多样性再感染公司