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Location of the Protein of rsg6,a Predominantly Expressed Gene in Rice Sperm Cells

Wuhan University Journal of Natural Sciences 2004年第3期9卷 375-380页

作者： LanLi-qiong Miaochen Zengyu WangSheng-hua Xuying TangLin BAIYu ChenFang CollegeofLifeSciences SichuanUniversityChengdu610064SichuanChina

Using Western blot and immunohistochemistry analysis, here the localization ofrsg6 protein was determined in various tissues of rice. Western blot showed only a weak signal in mature pollen. Nevertheless, according to the result of immunohistochemistry with DAB and fluorescent staining, the expression ofrsg6 protein appeared to begin at the bicellular microspore stage, and then keep activity in the sperm cells of mature pollens. The fluorescence pattern showedrsg6 polypeptide was present close to or attached to the surface of the isolated sperm cells. And this suggested thatrsg6 might take an important part in the process of recognition of sperm cell and ovum. Key words Western blot - immunohistochemistry - location - protein - rsg6 - rice CLC number Q 939.91 Foundation item: Supported by the National Natural Science Foundation of China (30270090); the Doctoral Foundation of the Ministry of Education (98061001) and the Key Project of Natural Science Foundation of Sichuan Province.Biography: Lan Li-qiong (1967-) female, Ph. D; research direction: plant developmental biology and reproductive engineering.

关键词： Western blot immunohistochemistry location protein rsg6 rice

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水稻花粉及精细胞优势表达基因遗传转化

水稻花粉及精细胞优势表达基因遗传转化

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作者：陈兴春四川大学

学位级别：硕士

本实验室从水稻精细胞中克隆得到了3个在精细胞中优势表达的基因：rsg6、RSSG58和RSSG8，并对他们开展了很多研究。本论文进一步展开对rsg6基因的研究工作，在遗传转化方面进行试验，为揭示其生物学功能奠定基础。另外，分离得到了水稻... 详细信息

本实验室从水稻精细胞中克隆得到了3个在精细胞中优势表达的基因：rsg6、RSSG58和RSSG8，并对他们开展了很多研究。本论文进一步展开对rsg6基因的研究工作，在遗传转化方面进行试验，为揭示其生物学功能奠定基础。另外，分离得到了水稻单核、二核与三核花粉，提取RNA用于基因芯片研究。以下为本论文主要研究内容： 1．以水稻中花11号成熟胚为材料，诱导愈伤组织分化成苗，建立了一个较高效率的水稻愈伤组织再生系统，愈伤组织出苗率为89.6％，明显高于已报道的愈伤组织出苗率为81.7％的结果。同时对愈伤组织与再生苗的G-418耐受性做了试验，50mg／L的G-418即可抑制愈伤组织与小苗的生长，可使用此浓度筛选转基因植株。用农杆菌介导法将包含有rsg6反义基因的pBin19-fan质粒转入水稻愈伤组织中，诱导分化，得到了抗性小苗。 2．以水稻花穗为原材料，采用过滤结合蔗糖密度梯度离心的方法，分离得到纯度较高的单核、二核和三核花粉。所得单核、二核及三核花粉纯度分别为95.2％、90.3％和97.6％，高活力花粉的所占的比率依次为60.3％、86.7％和92.3％。分离到的花粉用Rneasy Plant Mini Kit提取得到了高质量的RNA，已用于基因芯片分析水稻花粉优势表达基因;分离得的花粉还可以继续培养，作为细胞生物学研究的材料，来对水稻花粉进行研究。 3．本实验室已经对水稻精细胞优势表达基因rsg6开展了很多研究。为了进一步了解rsg6在体外的表达情况，将其阅读框连入双元载体pBI121中，由35S启动子调控基因。用农杆菌浸染法将重组质粒转入拟南芥中。卡那霉素筛选抗性植株，得到抗性植株并培养收取第二代种子，以用于进一步的实验。为

关键词：水稻花粉 rsg6 拟南芥植物表达载体

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