检索结果-南通市图书馆

生物工程学报 2023年第7期39卷 2695-2705页

作者：龚成思林亚秋胡婷婷王永李艳艳王友利西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 西南民族大学青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部/四川省重点实验室四川成都610041

本研究旨在克隆简州大耳羊rpl29基因并分析其分子特性及对肌内脂肪细胞脂质生成的影响。利用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法克隆山羊rpl29基因序列,用生物信息学方法分析该基因序列... 详细信息

本研究旨在克隆简州大耳羊rpl29基因并分析其分子特性及对肌内脂肪细胞脂质生成的影响。利用反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法克隆山羊rpl29基因序列,用生物信息学方法分析该基因序列特征,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测其在山羊各种组织和不同分化阶段肌内脂肪细胞中的mRNA表达水平。利用基因重组法构建的pEGFP-N1-rpl29过表达载体转染进山羊肌内前体脂肪细胞并诱导分化,用油红O和Bodipy染色方法从形态学上揭示过表达rpl29对脂滴积聚的影响,用qRT-PCR检测脂代谢相关基因表达水平的变化。结果显示,山羊rpl29长为507 bp,其中氨基酸编码区(coding sequence,CDS)为471 bp,编码156个氨基酸,是一种主要分布在细胞核、带正电荷且较稳定的亲水性蛋白质。组织表达谱表明该基因在山羊皮下脂肪组织及腹部脂肪组织中的表达水平显著高于其他组织(Prpl29促进山羊肌内脂肪细胞中的脂质积聚,且油红O染色后OD值显著增加(Prpl29基因后ATGL和ACC基因表达量极显著增加(Prpl29基因可能通过上调FASN、ACC和ATGL来促进山羊肌内脂肪细胞脂质沉积。

关键词：山羊 rpl29 基因克隆表达谱分析肌内前体脂肪细胞

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rpl29和RANKL表达与牙龈癌发生、进展及预后的相关性

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实用癌症杂志 2022年第8期37卷 1233-1236页

作者：董国伟辛宝琴冯小琼郑州大学附属洛阳中心医院 471000

目的研究核糖体蛋白L29(rpl29)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达与牙龈癌发生、进展及预后的相关性。方法选取87例牙龈癌患者作为研究对象,检测肿瘤组织和癌旁正常组织rpl29和RANKL表达阳性率,分析rpl29和RANKL在不同性别、年... 详细信息

目的研究核糖体蛋白L29(rpl29)和核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)表达与牙龈癌发生、进展及预后的相关性。方法选取87例牙龈癌患者作为研究对象,检测肿瘤组织和癌旁正常组织rpl29和RANKL表达阳性率,分析rpl29和RANKL在不同性别、年龄、饮酒史、吸烟史、临床分期、病理分级以及是否存在淋巴结转移的组织中的水平,对比rpl29和RANKL不同表达水平患者的平均预后生存时间。结果肿瘤组织rpl29阳性表达率为71.26%(62/87)、RANKL阳性表达率为72.41%(63/87),均显著高于癌旁正常组织的12.64%(11/87)和13.79%(12/87)(Prpl29和RANKL的阳性表达在TNMⅢ~Ⅳ期和存在淋巴结转移的组织中明显高于TNMⅠ~Ⅱ期和不存在淋巴结转移的组织(Prpl29和RANKL表达水平的升高,患者的平均预后生存时间随之降低(Prpl29和RANKL表达在牙龈癌发生和进展中发挥着重要的作用,同时与患者的预后生存时间具有一定的相关性。

关键词： rpl29 RANKL 牙龈癌预后相关性

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酵母双杂交技术筛选人95D细胞中肺癌转移相关蛋白1相互作用蛋白及其验证

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武警医学 2018年第9期29卷 895-900页

作者：李彦芹刘扬梁丽玲许阳解放军总医院呼吸内科北京100853

目的通过酵母双杂交实验、免疫共沉淀及GST pull down技术筛选并验证肺癌细胞系95D细胞中与肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1在肺癌发生发展中的作用提供科学依据。... 详细信息

目的通过酵母双杂交实验、免疫共沉淀及GST pull down技术筛选并验证肺癌细胞系95D细胞中与肺癌转移相关蛋白1(lung cancer metastasis-related protein 1,LCMR1)相互作用蛋白,为进一步研究LCMR1在肺癌发生发展中的作用提供科学依据。方法将诱饵质粒p GBKT7-LCMR转化AH109,应用酵母双杂交系统筛选出95D细胞中与LCMR1相互作用的候选克隆;应用反复划线法、X-α-Gal显色法和共转化回复验证法排除假阳性克隆,对真阳性克隆进行测序及生物学分析;构建含Myc标签的LCMR1融合蛋白的重组载体p CMV-Myc-LCMR1载体,以及带flag标签的目标相互作用蛋白载体,共转染细胞,利用免疫共沉淀技术验证LCMR1与相互作用蛋白之前的相互作用;融合蛋白沉降(GST pull-down)法进一步体外验证LCMR1与相互作用蛋白之间的作用。结果诱饵质粒p GBKT7-LCMR1与95D细胞c DNA文库共转化AH109,初步获得20个候选克隆;重复划线法后获得16个阳性克隆,X-α-Gal显色法获得12个蓝色阳性克隆,进一步将文库质粒与诱饵质粒共转化酵母菌回复验证,最终获得6个真阳性克隆;成功构建含标签重组载p CMV-Myc-LCMR1、pc DNA3.0-flag-rpl29及pc DNA3.0-flag-GNG5载体,经免疫共沉淀验证LCMR1与rpl29在细胞内有相互作用,与GNG5在细胞内无相互作用;GST pull-down实验验证LCMR1与rpl29在体外有相互作用,与GNG5在细胞外无相互作用。结论酵母双杂交技术筛选出95D细胞中相互作用蛋白6个,经免疫共沉淀和GST pull-down实验验证LCMR1与rpl29体内体外均有相互作用。

关键词：肺癌转移相关蛋白1 酵母双杂交免疫共沉淀 rpl29 融合蛋白沉降

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