检索结果-南通市图书馆

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

rp2致病突变蛋白降解的分子机制研究

RP2致病突变蛋白降解的分子机制研究

作者：高红英河南大学

学位级别：硕士

视网膜色素变性（Retinitis pigmentosa,rp）是一种遗传性的视网膜退行性疾病,世界范围内发病率约为四千分之一,是儿童致盲的主要原因之一。视网膜色素变性以视网膜感光细胞（视锥细胞和视杆细胞）的退变为主要症状,其临床表现为病人早... 详细信息

视网膜色素变性（Retinitis pigmentosa,rp）是一种遗传性的视网膜退行性疾病,世界范围内发病率约为四千分之一,是儿童致盲的主要原因之一。视网膜色素变性以视网膜感光细胞（视锥细胞和视杆细胞）的退变为主要症状,其临床表现为病人早期出现夜盲,后期视力逐渐下降,最终完全失明。眼底成像可观察到视网膜呈现明显的骨针样色素沉积、血管萎缩、视盘蜡状苍白等表型,视网膜电图（ERG）也可检测到感光细胞电信号振幅显著降低或消失等现象。视网膜色素变性的遗传方式主要有三种,分别为常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传和伴X连锁隐性遗传,其中伴X连锁隐性遗传方式的发病概率约占全部视网膜色素变性的10%～20%。rp2基因位于X染色体,是X-连锁视网膜色素变性的主要致病基因,其突变约占X-连锁视网膜色素变性的15%。目前世界范围内仍缺乏有效的治疗视网膜色素变性的方法。我们前期结果和其他研究人员的结果表明,大多数rp2致病突变会导致rp2蛋白不稳定,发生泛素化介导的蛋白降解,这极可能是疾病发生的原因。尽管蛋白酶体抑制剂如MG132可抑制rp2致病突变蛋白降解,但特异性低等特点限制了该类抑制剂在临床上的使用。因此,本研究拟鉴定参与rp2致病突变蛋白降解的关键因子,进而筛选相关的抑制剂,特异性抑制rp2突变蛋白降解,为rp2相关视网膜色素变性的治疗提供新的思路。本研究首先利用野生型rp2和突变型rp2（Q158P）质粒在HEK293T细胞中进行免疫沉淀,对沉淀蛋白进行质谱分析,通过筛选和验证发现了与突变型rp2特异相互作用的三个E3泛素连接酶（HUWE1、Trim28和UBR5）及E3泛素连接酶互作伴侣蛋白BAG6。利用免疫荧光实验证明了这四个蛋白与rp2-Q158P存在共定位现象。通过免疫共沉淀实验明确了该四个蛋白与其它rp2致病突变同样存在特异性相互作用。为了验证这四个蛋白是否参与rp2致病突变的蛋白降解过程,我们利用si RNA分别干扰BAG6、HUWE1、Trim28和UBR5的表达,发现敲低BAG6和HUWE1可以部分恢复rp2致病突变蛋白的水平及其蛋白稳定性。以往研究发现BAG6作为互作伴侣蛋白可以募集E3泛素连接酶参与靶蛋白的泛素化降解过程。我们通过免疫共沉淀实验,发现敲低BAG6导致HUWE1与rp2突变相互作用减弱。反之,敲低HUWE1不影响BAG6与rp2突变的相互作用,因此BAG6是通过募集HUWE1参与rp2突变蛋白的降解。利用免疫沉淀和质谱分析,我们发现rp2的268位赖氨酸（K268）通过介导与BAG6/HUWE1的相互作用参与rp2蛋白的泛素化蛋白降解过程。我们发现HUWE1特异性抑制剂BI8622处理可以恢复HEK293T细胞中的rp2突变蛋白水平,也可以恢复视网膜色素上皮细胞系ArpE-19中的rp2突变蛋白水平,并增加rp2与其伴侣蛋白ARL3的相互作用。本研究鉴定发现BAG6/HUWE1可特异性与rp2致病突变蛋白相互作用,并且敲低BAG6/HUWE1可恢复rp2突变蛋白水平。HUWE1抑制剂在体外实验中可恢复rp2突变蛋白水平,可作为rp2相关视网膜色素变性的一种潜在治疗方法。

关键词：视网膜色素变性 rp2 HUWE1 BAG6 降解 BI8622

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

rp2 基因的连锁分析定位

高技术通讯 1998年第9期8卷 46-49页

作者：刘木根魏勇黄达蔷金磊刘立王莉丝柴建华周久模复旦大学遗传学研究所人类基因组实验室华西医科大学第一医院眼科

为寻找视网膜色素变性相关基因ＲＰ２所在的染色体位点，采用染色体Ｘｐ２１．１－ｐ１１．２区段的８个微卫星ＤＮＡ标记，对Ｘ－连锁ＲＰ（ＸＬＲＰ）家系进行连锁分析。家系ＪＧ的ＲＰ相关位点被定位于Ｘ染色体位标ＤＸＳ１０６８与... 详细信息

为寻找视网膜色素变性相关基因ＲＰ２所在的染色体位点，采用染色体Ｘｐ２１．１－ｐ１１．２区段的８个微卫星ＤＮＡ标记，对Ｘ－连锁ＲＰ（ＸＬＲＰ）家系进行连锁分析。家系ＪＧ的ＲＰ相关位点被定位于Ｘ染色体位标ＤＸＳ１０６８与ＤＸＳ１１２６之间。该区间可能是ＲＰ２所在部位，其跨度约５—７ｃＭ。可以认为该家系之视网膜色素变性病与ＲＰ２基因相关。该家系对寻找和克隆ＲＰ２基因非常有用。

关键词：视网膜色素变性 rp2 连锁分析基因定位

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

菲律宾蛤仔rp2基因的克隆与组织表达分析

菲律宾蛤仔RP2基因的克隆与组织表达分析

鹑鹑小筑——基于树莓派rp2040的宠物箱

2014年中国水产学会学术年会

作者：裴爱君赵祥吉秦艳杰闫喜武李霞王福景大连海洋大学辽宁省贝类良种繁育工程技术研究中心

本实验首次采用反转录PCR（RT-PCR）与c DNA末端快速克隆（RACE）法首次从菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）外套膜中克隆出rp2基因（Gene Bank登录号:KF826881）。该基因c DNA序列长度为1158bp,包括62bp的5’端非编码区,41bp的3... 详细信息

本实验首次采用反转录PCR（RT-PCR）与c DNA末端快速克隆（RACE）法首次从菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）外套膜中克隆出rp2基因（Gene Bank登录号:KF826881）。该基因c DNA序列长度为1158bp,包括62bp的5’端非编码区,41bp的3’端非编码区,开放阅读框1053bp,编码350个氨基酸。推导的氨基酸序具有TBCC（57-175aa）和CArp（65-102aa）保守结构域,并为非跨膜糖蛋白。在NCBI中Blast同源性比较表明,基因氨基酸序列与太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）XPR2具有较高相似性（56%）,与高等哺乳动物、鸟类、鱼类、两栖类及节肢动物的各模式动物之间相似性在43-53%之间,与非洲眼线虫（Loa loa）的相似性较低为33%。利用实时定量PCR技术检测rp2基因在蛤仔不同组织中的表达,结果显示,PR2基因在菲律宾蛤仔雄性性腺表达量最高,其次为鳃、水管和外套膜,在斧足和闭壳肌中表达量很少,在雌性性腺中没有表达。这说明rp2基因表达较广泛,但不同组织表达量存在明显差异。

关键词：菲律宾蛤仔 rp2 分子克隆组织表达分析

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

无线电 2023年第11期 28-33页

作者：朱广俊不详

女儿喜欢小动物,但是养小猫、小狗的成本太高,养小鱼又缺乏互动,最终,我选择了养鹑和芦丁鸡(蓝胸鹑)。一开始我使用铁笼子饲养这些鹑和芦丁鸡,可是清理粪便很麻烦,然后我购买了芦丁鸡饲养箱(见图1),但是夏天饲养箱内的温度比较高。于是... 详细信息

女儿喜欢小动物,但是养小猫、小狗的成本太高,养小鱼又缺乏互动,最终,我选择了养鹑和芦丁鸡(蓝胸鹑)。一开始我使用铁笼子饲养这些鹑和芦丁鸡,可是清理粪便很麻烦,然后我购买了芦丁鸡饲养箱(见图1),但是夏天饲养箱内的温度比较高。于是,我决定制作一个宠物箱。

关键词：饲养箱树莓派宠物铁笼子芦丁 rp2

三个中国视网膜色素变性家系临床及分子遗传学研究

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

三个中国视网膜色素变性家系临床及分子遗传学研究

作者：吴晓飞天津医科大学

学位级别：硕士

目的研究三个中国视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,rp)家系rp-01、rp-02及rp-03的临床表型特征及其遗传学病因。对其中两个X连锁视网膜色素变性家系rp-01、rp-02进行rp2、rpGR基因突变筛查,对常染色体显性遗传视网膜色素变性家系rp... 详细信息

目的研究三个中国视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,rp)家系rp-01、rp-02及rp-03的临床表型特征及其遗传学病因。对其中两个X连锁视网膜色素变性家系rp-01、rp-02进行rp2、rpGR基因突变筛查,对常染色体显性遗传视网膜色素变性家系rp-03进行全外显子测序,以筛查其致病突变。方法1.临床研究:获取知情同意后,对三个家系进行病史采集及临床检查,包括:视力、屈光状态、眼前节裂隙灯检查、直接及间接眼底镜检查、眼底照相、视网膜电图(ERG)、视野检查等。2.分子遗传学研究:2.1抽取家系成员外周静脉血5ml,采用美国Roche公司的DNA分离试剂盒进行基因组DNA提取。2.2对rp-01及rp-02家系中全部患者进行rp2、rpGR基因序列分析,将其外显子扩增后进行直接双向测序;对rp-03家系进行全外显子测序,筛出候选致病基因,并对候选基因进行直接测序,验证候选基因突变结果是否全外显子测序结果一致。结果1、rp-01家系共3代,16名家系成员,7例患者,其中男性3例,女性4例。通过对该家系进行rpGR基因测序分析,发现其外显子ORF15 c DNA第2002出现一个C碱基的插入突变c.2002dup C(p.H668Pfs X4),该突变可产生一个含671个氨基酸的截短蛋白,100例正常人对照未检测出此突变。2、rp-02家系共4代,14名家系成员,5例患者,其中男性2例,女性3例。对rpGR基因进行突变筛查,发现在外显子ORF15 c DNA第2899位均出现一个G碱基的缺失突变c.2899del G(p.F967Lfs X121),该突变产生一个含1087个氨基酸的截短蛋白,100例正常人对照未检测出此突变。3、rp-03家系共3代29人,5例患者,均为女性。其致病突变发生在TOPORS基因第2外显子,在c DNA第2371位出现一个无义突变,c.2371A>T(p.K791X),该突变可产生一个含790个氨基酸的截短蛋白。100例正常人对照未检测出此突变。结论1、rpGR基因exon ORF15 c.2002dup C突变是引起rp-01家系发生X连锁视网膜色素变性的主要原因;rpGR基因exon ORF15 c.2899del G突变是引起rp-02家系致发生X连锁视网膜色素变性的主要原因;TOPORS基因exon 2c.2371A>T突变是引起rp-03家系发生常染色体显性遗传视网膜色素变性的主要原因。2、3个家系所发生突变均为新突变,在国内外未曾报导过。

关键词：视网膜色素变性 rp2 rpGR ORF15 TOPORS 突变全外显子测序

ARL3基因复合杂合变异导致常染色体隐性视杆-视锥细胞营养不良的机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

ARL3基因复合杂合变异导致常染色体隐性视杆-视锥细胞营养不良的...

作者：付乐铭河南大学

学位级别：硕士

目的:ARL3（ADP-ribosylation factor-like protein 3）基因变异通常导致常染色体显性遗传性视网膜色素变性（autosomal dominant retinitis pigmentosa,ad rp）或常染色体隐性遗传性Joubert综合征。我们发现了一个典型的视杆-视锥细胞... 详细信息

目的:ARL3（ADP-ribosylation factor-like protein 3）基因变异通常导致常染色体显性遗传性视网膜色素变性（autosomal dominant retinitis pigmentosa,ad rp）或常染色体隐性遗传性Joubert综合征。我们发现了一个典型的视杆-视锥细胞营养不良（rod-cone dystrophy,RCD）的中国家系,并通过对该家系临床表型与基因型的相关性分析以及体外功能实验研究,进一步了解新发ARL3基因变异的可能致病机制。方法:对先证者和其他家系成员行全面的眼科检查,包括扫频光学相干断层扫描（swept source optical coherence tomography,SS-OCT）和全视野视网膜电流图（electroretinogram,ERG）检查。使用特制的基因panel对先证者进行靶向捕获的二代测序（next generation sequencing,NGS）,该panel包含了376个与遗传性视网膜疾病相关的已知基因。在家系成员中进行Sanger测序和共分离分析。利用在线预测软件预测和评估这些变异可能导致的蛋白结构和功能的变化。应用环己酰亚胺（cycloheximide,CHX）追踪实验和免疫共沉淀（co-immunoprecipitation,Co-IP）实验,检测ARL3蛋白的稳定性以及ARL3与rp2蛋白的相互作用。结果:本家系的先证者是一名18岁的男性患者,双眼视力:右眼0.25,左眼0.20,他的非近亲父母和妹妹视力均正常。先证者表现为RCD的典型症状,包括夜盲症、周围视野缺损、视网膜骨细胞样色素沉着和ERG反应重度降低。本家系另一名患者,先证者的父亲,50岁,双眼视力均为1.0。与先证者不同的是,他表现为迟发的、轻度的视锥-视杆细胞营养不良（cone-rod dystrophy,CRD）,包括黄斑视网膜萎缩、视野中央暗点、明适应ERG反应中度降低。所有家系成员均无听力异常、智力发育异常或步态不稳等全身异常表现。我们在先证者的基因组DNA中鉴定出ARL3基因上的复合杂合变异（c.91A＞G,p.T31A;c.353G＞T,p.C118F）,而先证者的父亲携带c.91A＞G杂合变异,母亲和妹妹均携带c.353G＞T杂合变异。生物信息学分析结果显示,这两种变异编码的氨基酸序列在不同物种之间高度保守,且多个预测软件的结果表明,这两个杂合变异可能是有害的。蛋白质结构预测分析结果表明,这两种变异可能引起蛋白质结构和功能的改变。根据美国医学遗传学与基因组学学会（The American College of Medical Genetics and Genomics,ACMG）的遗传变异分类标准与指南,这两种变异可能是致病的。此外,我们的体外实验结果显示ARL3基因突变c.91A＞G和.353G＞T均降低ARL3蛋白的稳定性,且c.353G＞T突变破坏HEK293T细胞中ARL3蛋白与rp2蛋白的相互作用。结论:我们发现ARL3基因新发的复合杂合变异（c.91A＞G,p.T31A;c.353G＞T,p.C118F）与早发的常染色体隐性RCD有关,而c.91A＞G可能与晚发型常染色体显性CRD有关。ARL3中的两个新的错义变异可能是通过破坏ARL3蛋白的稳定性和破坏其与rp2蛋白的相互作用而致病的。

关键词： ARL3 复合杂合变异视杆-视锥细胞营养不良视锥-视杆细胞营养不良 rp2

我国X连锁型视网膜色素变性家系的基因连锁定位及突变的分析研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

我国X连锁型视网膜色素变性家系的基因连锁定位及突变的分析研究

作者：朱静第三军医大学

学位级别：硕士

背景视网膜色素变性(Retinitis pigmentosa,rp)是一种常见的遗传性致盲眼病。群体患病率在不同的种族人群中较为相似,约1/3500-4000。在该病中,患者的视网膜感光细胞和色素上皮细胞变性导致夜盲和进行性视野缺损。rp有多种遗传方式,大... 详细信息

背景视网膜色素变性(Retinitis pigmentosa,rp)是一种常见的遗传性致盲眼病。群体患病率在不同的种族人群中较为相似,约1/3500-4000。在该病中,患者的视网膜感光细胞和色素上皮细胞变性导致夜盲和进行性视野缺损。rp有多种遗传方式,大多数为单基因遗传,包括常染色体显性遗传rp、常染色体隐性遗传rp、X染色体连锁遗传rp(X-linked retinitis pigmentosa, XLrp)及线粒体连锁遗传rp。其中XLrp约占所有rp患者的6-20%,患者发病年龄早、损害最为严重、预后甚差,是青少年致盲的常见原因之一,目前已在X染色体上定位了6个与XLrp相关的基因位点,分别是:rp2、rp3、rp6、rp23、rp24和最近新定位的rp34。其中已被先后成功克隆的有两个基因:rp2和rp3。家系连锁分析表明约10%-20%的XLrp与位点rp2连锁,约70%-80%的XLrp与位点rp3连锁。这表明rp2基因和rp3基因是XLrp的主要致病基因。 rp3基因又名rpGR基因,它在不同的组织细胞中有不同的选择性剪接产物,其中在视网膜细胞中以rpGRORF15转录子为主。该转录子包括原来确定的rpGR的19个外显子的前14个外显子和外显子ORF15(原外显子15和部分内含子15的区域)。近年来在英国、北美、德国及日本等地人群的研究表明,外显子ORF15是XLrp的一个突变热点区,约60%-80%的XLrp患者在该外显子内都存在致病突变。同时在这个长达1706bp的序列中,包含了一段至少1000bp的AG高度重复的嘌呤区,使得对该区域的测序无论是在引物设计上还是在延伸过程中都变得异常困难。目前有关XLrp的分子遗传学研究仍主要集中在白种人群,亚洲人群的报道则主要来自于日本,而有关中国人XLrp相关基因突变的系统研究还未见报道,只有一些零散家系的个案报道,且突变筛选的范围很少涉及到外显子ORF15的难测区域。目的通过连锁分析和单倍型分析的方法对一例新收集到的XLrp家系进行致病基因定位分析,进一步确定家系的X性连锁遗传模式,初步判定该家系的女性携带者,为该家系的女性亲属及其子女提供该病的基因诊断和遗传咨询。对在课题组前期工作中经基因定位基本判定为rp2型或rp3型XLrp的家系及新收集到的疑似XLrp的10例散发患者进行rp2基因和rp3基因的突变的筛选和检测,以寻找相关致病突变和SNP多态性位点。通过基因突变的分析研究,了解我国XLrp患者的基因突变状况,并提供更多的有关基因型和表型相关联的数据。方法本课题组前期工作应用微卫星多态性位点通过连锁分析和单倍型分析对4例中国疑似XLrp家系的致病基因进行了定位分析并确定其中有3个家系为rp2或rp3型XLrp家系。本次研究主要分两部分阐述:第一部分首先阐述我们应用微卫星多态性位点对新收集到的1例中国疑似XLrp家系进行基因定位分析,确定其致病基因位点。第二部分阐述我们结合课题组前期成果,对基因定位基本判定为rp2型或rp3型XLrp的共计3个家系及10例疑似XLrp散发患者进行侯选基因rp2和rpGR的突变筛选,尤其针对既是突变热点区又是测序困难区的外显子ORF15进行相关的序列测定和基因突变分析研究。在第一部分基因定位分析中,我们应用微卫星多态性位点(根据rp2、rp3、rp6、rp23和rp24位点的连锁定位信息,其中重点针对rp2和rp3共选取位点附近的12个微卫星多态标记)用多点参数分析方法计算其最大优势对数值(LOD score),对新收集到的1例疑为X连锁型视网膜色素变性家系进行遗传连锁分析和单倍型分析。在第二部分的基因突变分析中,我们主要针对定位后的侯选基因rp2基因和rpGR基因在视网膜中主要的选择性剪接产物rpGRORF15,尤其针对突变热点区外显子ORF15进行相关的序列测定和基因突变分析研究。首先对全体男性患者的rp2基因和rpGR基因进行序列测定,经比对后寻找突变位点,再针对其突变位点对其家系成员进行该区域的序列测定以进一步确定突变与疾病共分离,并作出相关的家系突变分析。结果第一部分的基因定位分析结果:确定了ZSC家系致病基因的大致范围:rp23或rp6基因,同时验证了该家系的X性连锁遗传模式。第二部分的基因突变分析结果:在对基因定位于rp2或rp3基因位点的3个XLrp家系和10例疑似XLrp的散发患者进行rp2基因和rpGR基因的测序比对分析后发现,在rp2基因未发现有基因突变;在rpGR基因的1-14号外显子及部分外显子的侧翼内含子区域中发现了6个已有报道的SNP多态性位点;在外显子ORF15发现了两个致病突变***15+48384delGA和***15+82122delGG(前者已有报道,后者至今未见相关

关键词：视网膜色素变性性连锁 rp3 rp2 微卫星DNA 连锁分析单倍型单核苷酸多态性