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X射线辐照对小鼠睾丸组织中rnf146表达的影响及机制研究

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X射线辐照对小鼠睾丸组织中RNF146表达的影响及机制研究

作者：杨慧莹宁夏医科大学

学位级别：硕士

电离辐射对男性生殖健康的影响,已受到了广泛关注。睾丸作为对电离辐射高度敏感的器官,在接受一定剂量以上的电离辐射后会出现不同程度的结构和功能损伤,引起精子发生障碍,健康精子数量显著减少,从而形成暂时甚至永久不育[1]。目前普遍... 详细信息

电离辐射对男性生殖健康的影响,已受到了广泛关注。睾丸作为对电离辐射高度敏感的器官,在接受一定剂量以上的电离辐射后会出现不同程度的结构和功能损伤,引起精子发生障碍,健康精子数量显著减少,从而形成暂时甚至永久不育[1]。目前普遍认为精原细胞损伤是睾丸接受一定剂量以上射线辐照后生精障碍的重要原因[2],因此,阐明电离辐射所致精原细胞损伤的分子机制,有助于深入理解睾丸辐射损伤的发生机理。前期研究中我们发现了一种特异性表达于小鼠睾丸组织的E3泛素连接酶—rnf146。泛素化是一种广泛存在于真核生物中的蛋白质翻译后修饰方式,不同的E3泛素连接酶能够作用于不同的蛋白底物,催化特定的氨基酸残基被泛素分子标记,进而被蛋白酶体识别,特异性降解[3]。rnf146作为一种DNA损伤反应蛋白,序列高度保守[4]。研究提示,rnf146能够特异性识别结合凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF),促进AIF发生泛素化修饰,进而在胞质中诱导其降解,修复各种因素引起的DNA损伤,抑制细胞的凋亡[5]。我们前期的研究发现rnf146的表达水平与小鼠性腺发育密切相关,在新生小鼠睾丸组织中rnf146表达极低,随着性发育其表达水平迅速升高[4]。组织病理学研究显示睾丸组织中rnf146主要定位于精原细胞和精母细胞中。RN F146在DN A复制非常活跃的睾丸组织中高表达的意义是什么?大剂量X线辐照后睾丸组织中rnf146表达下调对睾丸功能的影响如何?其分子机制是什么?上述问题的回答,有助于我们深入理解rnf146在睾丸辐照损伤进程中的作用和意义。为此,我们进行了下列两部分研究工作:第一部分X射线辐照对小鼠睾丸损伤及rnf146表达的影响目的观察不同剂量X射线辐照对正常小鼠睾丸组织形态和功能以及rnf146表达的影响。方法取成年雄性C57小鼠240只,随机分为6组,每组40只,分别给予0、0.1、0.5、1.0、2.0和4.0 G y X射线辐照,通过HE染色观察不同剂量X射线辐照后16h、48h及45d小鼠睾丸组织形态变化;Tunel染色评价X射线辐照后16 h及48 h小鼠睾丸生精细胞的凋亡情况;q-PC R实验检测RN F146 16h和48 h m RN A的表达;45d后雄鼠与雌鼠1∶2合笼,根据辐照后雄鼠致正常雌鼠的受孕情况评价辐照对小鼠生育能力的影响。取成年雄性C57小鼠50只,随机分为5组:B la nk,2G y 16 h,2 G y 48 h,4 G y 16 h以及4G y 48 h,每组10只。所有小鼠全部摘取左侧睾丸,-80℃冻存,术毕1周后分别给予0、2、4 Gy X射线辐照,辐照后16h和48h取小鼠右则对应睾丸,Western-blot分析评价X射线辐照对小鼠睾丸组织中rnf146蛋白表达的影响。结果HE染色结果显示,X射线辐照后16h,各组睾丸组织无明显形态学改变;辐照后48h,1Gy组可见胞核深染、固缩及碎裂,2Gy以上剂量组睾丸组织出现生精细胞形态异常,数量减少;45天后2Gy以下辐射剂量睾丸组织组织形态变化不大,2Gy有明显损伤,4Gy睾丸生精小管有严重的空管,管腔皱缩变小。合笼结果提示2Gy及以下辐射损伤对小鼠生育能力无明显影响,4Gy辐照后小鼠生育能力显著降低。Tunel染色提示4Gy射线辐照后睾丸细胞凋亡主要发生于外层的精原细胞及精母细胞。q-PCR、Western-blot实验表明2Gy和4Gy射线辐照后48h rnf146表达水平整体出现下降趋势。结论小鼠在接受2Gy以上剂量的X射线辐照后睾丸组织会出现损伤,且短期内无法修复,4Gy辐照后损伤严重,雄性小鼠绝育率高达96%,射线辐照诱导生精细胞凋亡,同时伴随着rnf146表达下调。第二部分X射线辐照诱导小鼠精原细胞GC1凋亡及凋亡诱导因子AIF核转位目的本实验以GC1小鼠精原细胞为细胞模型,研究X射线辐照所引起的GC1小鼠精原细胞的凋亡及凋亡诱导因子(AIF)细胞定位的变化。方法将对数生长期的精原细胞细胞株GC1,分别接种至培养瓶和培养板中,分别给予0、3、6、9 Gy X射线辐照,通过溴脱氧尿苷(Brd U)掺入实验检测辐射对细胞增殖速率的影响;辐射后48 h,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核凝集情况,免疫荧光细胞化学染色检测证胞质及胞核中AIF蛋白定位的变化,Western blot分析细胞总蛋白、胞质蛋白及核提取物中AIF蛋白的水平、rnf146总蛋白的变化以及二者表达水平的相关性;通过慢病毒过表达GC1细胞中的rnf146,给予9Gy射线辐照,Western blot检测验证rnf146对AIF定位的影响。结果随着辐射剂量的增加,GC1细胞增殖速率显著减慢,细胞活性降低。6Gy及9 G y X射线辐照后

关键词： X射线辐照睾丸生精细胞 rnf146 凋亡 X射线辐照凋亡诱导因子 GC1小鼠精原细胞株 rnf146

rnf146真核表达载体的构建及其对非小细胞肺癌细胞系生物学行为的影响

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山西医药杂志 2014年第7期43卷 723-726,I0001页

作者：高英惠林萍宋成洋徐慧慧王睿田大力邱雪杉王恩华中国医科大学附属第四医院病理科沈阳110032 中国医科大学附属第四医院中心实验室沈阳110032 中国医科大学附属第四医院胸外科沈阳110032 中国医科大学基础医学院病理学教研室中国医科大学附属第一医院病理科

目的构建E3泛素连接酶环指蛋白146(rnf146)基因真核表达载体,研究rnf146对非小细胞肺癌细胞系体外生物学行为的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法筛选rnf146低表达细胞系。构建pEX4-rnf146真核表达载体,经酶切和... 详细信息

目的构建E3泛素连接酶环指蛋白146(rnf146)基因真核表达载体,研究rnf146对非小细胞肺癌细胞系体外生物学行为的影响。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法筛选rnf146低表达细胞系。构建pEX4-rnf146真核表达载体,经酶切和测序后瞬时转染LTE细胞,荧光显微镜观察、蛋白印迹法检测转染效率。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测肿瘤细胞体外增殖能力,划痕实验评价肿瘤细胞体外迁移能力,Buyden小室实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果酶切和基因测序证实重组质粒pEX4构建正确。MTT比色实验显示转染pEX4-rnf146组细胞增殖速度明显高于转染空载体组和未转染组(Prnf146基因转染能促进非小细胞肺癌LTE细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力,可能是一个潜在的促肿瘤增殖、侵袭和转移的相关基因。

关键词：癌,非小细胞肺泛素蛋白连接酶类 rnf146 增殖 rnf146

非小细胞肺癌中过表达rnf146对Axin和β-catenin表达和定位的影响

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现代肿瘤医学 2014年第4期22卷 737-741页

作者：高英徐慧慧李锐王睿惠林萍邱雪杉王恩华中国医科大学附属第四医院病理科辽宁沈阳110032 中国医科大学附属第四医院中心实验室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院病理教研室及附属第一医院病理科辽宁沈阳110001

目的:观察E3泛素连接酶rnf146表达对Axin和β-catenin蛋白表达的影响,探讨rnf146与Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EnVision法检测133例NSCLC患者肺癌中rnf146、Axin和β-catenin... 详细信息

目的:观察E3泛素连接酶rnf146表达对Axin和β-catenin蛋白表达的影响,探讨rnf146与Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展中的作用。方法:应用免疫组织化学EnVision法检测133例NSCLC患者肺癌中rnf146、Axin和β-catenin的表达。构建rnf146过表达质粒,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和细胞免疫荧光方法研究rnf146在肺癌细胞株A549和LTE中过表达对Axin和β-catenin表达及定位的影响。结果:NSCLC患者肺癌组织中rnf146高表达72例(54.1%)中49例(68.1%)显示Axin表达减弱或缺失,19例(26.4%)出现β-catenin细胞核阳性表达;rnf146低表达61例(45.9%)中只有26例(42.6%)显示Axin表达减弱或缺失,7(11.5%)例出现β-catenin细胞核阳性。rnf146与Axin的表达呈明显的负相关(P=0.003),与β-catenin的细胞核表达呈正相关(P=0.047)。肺癌细胞系中过表达rnf146能够下调Axin蛋白的表达,诱导β-catenin蛋白表达和核内分布,但对Axin和β-catenin mRNA水平没有影响。结论:rnf146可能通过Wnt/β-catenin通路参与肺癌的发生发展。

关键词：非小细胞肺癌 E3泛素连接酶 rnf146 Axin B-catenin

shRNA沉默环指蛋白146基因对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及其相关蛋白表达的影响

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现代肿瘤医学 2014年第6期22卷 1245-1249页

作者：高英王睿徐慧慧李锐惠林萍邱雪杉王恩华中国医科大学附属第四医院病理科辽宁沈阳110032 中国医科大学附属第四医院中心实验室辽宁沈阳110032 中国医科大学基础医学院病理教研室及附属第一医院病理科辽宁沈阳110001

目的:shRNA沉默环指蛋白146(rnf146)基因,观察非小细胞肺癌细胞中rnf146沉默对肺癌细胞迁移和侵袭及其相关蛋白表达的影响。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法用于筛选rnf146高表达肺癌细胞系。构建shRNA-rnf146真核... 详细信息

目的:shRNA沉默环指蛋白146(rnf146)基因,观察非小细胞肺癌细胞中rnf146沉默对肺癌细胞迁移和侵袭及其相关蛋白表达的影响。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法用于筛选rnf146高表达肺癌细胞系。构建shRNA-rnf146真核表达载体,瞬时转染A549和H1299肺癌细胞,Western blot检测转染效率。划痕实验评价肺癌细胞体外迁移能力;Buyden小室实验检测肺癌细胞体外侵袭能力。Western blot检测肺癌细胞中迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果:RT-PCR和Western blot方法筛选rnf146高表达肺癌细胞系,显示A549和H1299细胞中rnf146蛋白均高于其它细胞系。shRNA-rnf146转染A549和H1299细胞系后,划痕实验显示转染组细胞24小时迁移率明显低于空载体组和未转染组(Prnf146后A549细胞中MMP2和MMP7表达明显减少,而MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等蛋白的表达变化不明显。结论:rnf146可能通过调控MMP2和MMP7的蛋白水平促进肺癌细胞迁移和侵袭。

关键词：非小细胞肺癌 rnf146 E3泛素连接酶迁移侵袭

利用人全基因组CRISPR SAM激活文库筛选禽流感病毒宿主限制性因子

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利用人全基因组CRISPR SAM激活文库筛选禽流感病毒宿主限制性因子

作者：王玉鑫华中农业大学

学位级别：硕士

禽流感病毒(Aivan influenza virus,AIV)宿主广泛,不仅可以感染禽类造成养殖业经济损失,还能感染人、猪、犬等哺乳动物,导致严重的公共卫生安全问题。在长期进化过程中病毒的毒力不断增强,适应性突变也不断增多并稳定遗传,这都无疑是一... 详细信息

禽流感病毒(Aivan influenza virus,AIV)宿主广泛,不仅可以感染禽类造成养殖业经济损失,还能感染人、猪、犬等哺乳动物,导致严重的公共卫生安全问题。在长期进化过程中病毒的毒力不断增强,适应性突变也不断增多并稳定遗传,这都无疑是一种警示,禽流感病毒仍然是潜在的大流行病原。禽流感病毒的易突变性和高重组率为其跨种传播和免疫逃逸提供了基础,而宿主因子在防范病毒突破种间屏障中起重要作用。因此,通过挖掘决定禽流感病毒宿主谱的关键宿主因子并探究其机制,能够建立起宿主因子限制病毒感染的作用模式。全基因组筛选技术为我们提供了新的思路,本研究便是基于CRISPR SAM(CRISPR synergistic activation mediator)激活系统对人全基因组中禽流感病毒的宿主限制因子进行了筛选,并鉴定到多个新的抗病毒因子。主要研究内容如下:1.A549-SAM文库细胞系的构建首先利用慢病毒包装人全基因组sgRNA文库质粒,并测定包装后的慢病毒滴度。接着将sgRNA文库慢病毒以MOI=0.3转导A549-MPH-d Cas9-VP64多克隆细胞,通过抗性药物对阳性细胞进行筛选,构建出了A549-SAM文库细胞。该SAM激活文库靶向人全基因组中23,728个基因,包含70,297条sgRNA序列。高通量测序(Next generation sequencing,NGS)显示构建好的文库细胞mapping率达74%,去重后的sgRNA数为70,204条,可覆盖文库99.87%sgRNA,表明该A549-SAM文库细胞构建成功,且具有良好的均一性和覆盖率,符合筛选要求。2.禽流感病毒感染A549-SAM文库细胞筛选宿主限制因子将禽流感病毒A/Quail/Hong Kong/G1/97(G1/H9N2)毒株以MOI=1.0分别感染A549-SAM文库细胞和A549-MPH-d Cas9-VP64对照组细胞,至对照组细胞完全死亡后,收集感染后存活的文库细胞扩大培养并再次感染相同剂量病毒,以此重复感染5轮,并设置有三批平行样本。在每一轮感染中,三批A549-SAM细胞上清血凝价均较对照组细胞低,且血凝价差距随着感染轮次增加而加大。基因和sgRNA数量随着感染轮次大幅减少至第4轮进入平台期,且基因富集趋势逐渐显著,基因之间激活倍数拉开差距。Venn图分析显示三批平行样本间重复性良好,同时通过基因本体论分析(Gene ontology analysis,GO analysis)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析表明筛选到的基因参与了多种生物学进程、分子功能等。3.候选靶基因对禽流感病毒的增殖影响对于富集程度靠前的12个基因,本研究构建了其开放阅读框(Open reading frame,ORF)过表达质粒,将各基因过表达质粒以不同剂量转染A549细胞后,感染表达荧光蛋白的禽流感病毒H9N2-G1-NA-EGFP并利用流式细胞术分析荧光率。其中转录翻译相关因子EEF、E2F;膜蛋白C1o、DER、STE;泛素连接酶rnf146和RNA结合蛋白PSP过表达后均对病毒产生不同程度的抑制效果。4.靶基因rnf146抑制流感病毒复制在探究候选基因对病毒增殖影响的试验中,rnf146抑制效果较佳,因此对其进行进一步研究。为了确定rnf146对病毒增殖的抑制是否具有亚型特异性,在过表达或敲除rnf146的情况下,感染G1/H9N2和人流感病毒A/Puerto Rico/8-SV14-1934(PR8/H1N1)。通过噬斑试验和Western blot检测发现rnf146可抑制上述两种A型流感病毒(influenza A virus,IAV)复制。进一步探究发现,rnf146剂量依赖性地促进仙台病毒(Sendai virus,Sev)刺激下干扰素β(Interferonβ,IFN-β)、干扰素刺激反应原件(Interferon stimulated response element,ISRE)启动子活性,并显著提高IFN-β的转录水平。同时,在rnf146敲除情况下干扰素刺激基因(IFN-stimulated gene,ISG)IFIT1、ISG15、OAS3、OASL、MX1的转录水平均显著降低,表明rnf146是通过干扰素途径调控病毒复制。综上,本研究通过人全基因组CRISPR SAM激活文库对禽流感病毒G1/H9N2宿主限制性因子进行了筛选,并鉴定到EEF、C1o、rnf146等多个宿主抗病毒因子。在对rnf146进行进一步探究时,发现rnf146可通过天然免疫途径抑制流感病毒的增殖。本研究旨在为后续预防病毒跨种感染、宿主

关键词：流感病毒 CRISPR SAM 激活筛选宿主限制性因子 rnf146

E3泛素连接酶环指蛋白146调控非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制

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E3泛素连接酶环指蛋白146调控非小细胞肺癌增殖和迁移的分子机制

作者：卫聪慧中国医科大学

学位级别：硕士

目的:目前,恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的一大类疾病,而肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症之一。从发病人数看,肺癌仍居我国恶性肿瘤发病首位,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的75-80%。因此对肺癌发生发展、转移机制及作... 详细信息

目的:目前,恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的一大类疾病,而肺癌是全球发病率和死亡率最高的癌症之一。从发病人数看,肺癌仍居我国恶性肿瘤发病首位,其中非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌总数的75-80%。因此对肺癌发生发展、转移机制及作用靶点的研究,对肺癌进一步的治疗及预防有着重要的指导意义。rnf146作为一种E3泛素连接酶,其基因位于人类染色体6q22,33上。由rnf146基因编码的蛋白质是一种进化上保守的蛋白质,广泛表达于胞质。它含有WWE和N末端RING finger结构域。研究表明,rnf146作为PARsylation(聚ADP核糖基化作用)调控下的E3泛素连接酶,调节tankyrase(PARP5)依赖的Axin的降解,从而正向调控Wnt信号通路。前期研究结果表明,在临床非小细胞肺癌标本和细胞系中rnf146的表达明显上调,并且其表达水平与患者的临床病理因素有关;在细胞系中rnf146蛋白的表达与Axin的表达呈负相关,与β-catenin的表达呈正相关;过表达rnf146可以促进细胞的增殖、侵袭、迁移能力。而rnf146调控Wnt信号通路的分子机制尚未明确,我们的研究旨在探讨rnf146是否通过WWE或RING finger结构域调节β-catenin的表达,调控Wnt信号通路,从而促进肺癌细胞的增殖、迁移能力。研究方法:1.A549细胞株中进行质粒(pCDNA4-TO、rnf146△RING、rnf146△WWE、siRNA-resistant full-length rnf146)瞬时转染。*** Blot检测质粒转染情况及β-catenin的表达情况。3.通过细胞划痕实验、transwell迁移实验及MTT试验检测质粒转染后对A549株细胞增殖、迁移能力的影响。结果:1.A549细胞株质粒转染后β-catenin的表达pCDNA4-TO组低于rnf146△RING组、rnf146△WWE组、siRNA-resistant full-length rnf146组,且rnf146△WWE组的表达略高于rnf146△RING组,组间差异具有统计学意义(P﹤0.05)。2.质粒转染rnf146△RING组、rnf146△WWE组、siRNA-resistant full-length rnf146组均可以促进细胞增殖、迁移能力,siRNA-resistant full-length rnf146组促进作用最显著,且组间差异具有统计学意义(P﹤0.05),而rnf146△WWE组作用较rnf146△RING组促进作用更明显,两者之间差异无统计学意义。结论:***146包含的WWE和RING finger结构域在调节β-catenin的表达过程中均发挥作用,从而进一步调节Wnt信号通路,促进肺癌细胞的增殖、迁移能力。***146的WWE和RING finger结构域联合作用,促进肺癌细胞的增殖、迁移能力;RING finger结构域在调节肺癌细胞系增殖、迁移过程中可能发挥更主要的作用。

关键词：非小细胞肺癌 rnf146 WWE结构域 RING finger结构域

小鼠活体生物荧光成像在锌指蛋白146促脑胶质瘤增殖研究中的应用

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小鼠活体生物荧光成像在锌指蛋白146促脑胶质瘤增殖研究中的应用

作者：戈锐宁夏医科大学

学位级别：硕士

研究背景DNA损伤的累积是导致细胞癌变的重要影响因素[1-2],与癌症早期的发生密切联系。DNA损伤修复相关基因,被称为肿瘤三大基因之一,共同存在于正常的细胞中,参与调节细胞正常的生长、分化和增殖。有报道表明DNA损伤修复基因异常[3-5]... 详细信息

研究背景DNA损伤的累积是导致细胞癌变的重要影响因素[1-2],与癌症早期的发生密切联系。DNA损伤修复相关基因,被称为肿瘤三大基因之一,共同存在于正常的细胞中,参与调节细胞正常的生长、分化和增殖。有报道表明DNA损伤修复基因异常[3-5],与恶性肿瘤的演变、侵袭以及对放化疗抵抗等均有着密切关联。锌指蛋白146（Ring Finger Protein 146,rnf146）是一种与DNA损伤和修复有关的因子,通过促使不同肿瘤相关蛋白,如Axin[8]、β-catenin[8-9]、PARP1[10-12]发生泛素化降解,参与调控多种恶性肿瘤生长、侵袭、转移的病理进程。然而rnf146与脑胶质瘤的关系鲜有报道。为了确认rnf146在促进人中枢神经系统胶质瘤增殖中的重要研究价值,本课题研究第一部分我们应用了美国癌症基因图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）[13-14]检索了rnf146的mRNA的表达与脑胶质瘤患者的相关临床数据进行相关性比较,利用脑胶质瘤组织芯片的免疫组化染色从蛋白水平对检索TCGA数据库所得的检索结果进行了确认,为后续的机制研究奠定了基础。小动物活体荧光成像是肿瘤动态研究的重要工具。目前常用的荧光成像原理主要集中在荧光蛋白或荧光染料标记下的直接成像或在肿瘤细胞标记荧光素酶（luciferase,luc）催化底物形成的间接成像等。后者因具有灵敏度高、穿透性强、非侵入和易操作等优势,被广泛应用于肿瘤增殖和转移的研究[15-17]中。为明确rnf146在胶质瘤增殖中的作用,本研究中我们以经萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase,Fluc）标记的小鼠胶质瘤稳转细胞株GL261-luc为对象复制荷瘤小鼠模型,通过体外基因修饰技术敲减rnf146在GL261-luc中的表达,根据表型变化明确rnf146与胶质瘤发生的关系（第三部分）。然而在外源性基因导入或目标基因敲除过程中常常出现脱靶或其他重要基因功能异常的风险。那些本应稳定表达荧光素酶或荧光蛋白的肿瘤细胞稳转株中荧光素酶或荧光蛋白表达常常不再稳定,酶活性降低、蛋白表达异常或多次传代后重要发光物质丢失[49],都会严重影响活体荧光检测效率。因此经体外基因修饰的肿瘤细胞在活体种植前有必要进行体外荧光成像能力的检测。我们在复制rnf146敲减的GL261-luc荷瘤小鼠模型前,为保证活体生物荧光成像效果,提前对luciferase标记的胶质瘤细胞GL261-luc进行荧光素酶表达效率、活性及稳定性鉴定（第二部分）。上述工作在了解rnf146在脑胶质瘤发生发展中作用的同时,为体外基因修饰对荧光标记细胞活体成像影响的研究提供理论补充。第一部分 DNA损伤修复因子rnf146在人脑胶质瘤发生发展中的作用目的研究DNA损伤修复因子rnf146表达水平与胶质瘤患者的年龄、不同病理分级和预后之间的相关性。方法从TCGA数据库中筛选515例低分级脑胶质瘤（Brain Lower Grade Glioma,LGG）（Ⅰ-Ⅲ级）和 152 例恶性胶质瘤（Glioblastoma multiforme,GBM）（Ⅳ级）RNA-seq Level3数据,脑胶质瘤样本中rnf146表达在不同年龄（≤46岁和＞46岁）、不同病理类别及不同病理级别（Ⅰ-Ⅲ级和Ⅳ级）间的差异性比较使用Mann-Whitney U检验法;rnf146表达的高低与临床病人数据资料的比较使用Spearman’s检验法;rnf146表达的高低对患者生存时间所产生的影响的检测方法使用Kaplan-Meier方法。对组织芯片（正常脑组织3例、低分级脑胶质瘤23例、高分级脑胶质瘤64例）分别进行rnf146免疫组化分析,然后采用Spearman’s检验法进一步验证rnf146在不同性别、年龄、病理分级中的表达差异及其与预后的相关性;Kaplan-Meier以及COX回归分析rnf146表达水平对脑胶质瘤病人生存期的直接影响。结果TCGA数据库分析提示,rnf146表达水平在＞46岁患者组中显著低于＜46岁组（P＜0.001）;rnf146表达水平在不同性别中无明显差异（P＞0.05）;GBM组rnf146的表达水平显著低于LGG组（P＜0.001）。胶质瘤芯片rnf146免疫组化染色表明中低级别（Ⅰ-Ⅱ级）脑胶质瘤中rnf146的表达水平显著高于高级别（Ⅲ-Ⅳ级、GBM）脑胶质瘤（P＜0.001）。按照IHC评分把rnf146表达水平划分为高、低表达两组,87%（20/23）的中、低级别的胶质瘤病例中rnf146为高表达,91%（58/64）的高级别脑胶质瘤病例中rnf146显著地低表达。Kaplan-Meier分析结果表明rnf146低表达的脑胶质瘤病人总的生存时间比rnf146高表达的脑胶

关键词： rnf146 脑胶质瘤 TCGA 免疫组化生存期慢病毒感染 GL261-luc 荧光素酶 RNA干涉荷瘤小鼠小动物荧光成像