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P19 of Tomato Bushy Stunt Virus Suppresses rna Silencing Induced by Short Hairpin rna in Mammal Cells

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中国病毒学 2007年第3期22卷 199-206页

作者： Wei-xian CHEN　 Juan CHEN　 Zhen-zhen ZHANG　 Ai-long HUANG　 Institute for Viral Hepatitis Key Laboratory on Infectious Disease of Ministry of Education Chongqing University of Medical Science Chongqing 400016 China

To counteract the immune system in parasitic hosts,some viruses encode proteins to suppress the rna interference(rnai)*** this report,we established two rnai systems to be easily observed with strong and obvious *** function of the P19 of tomato bushy stunt virus,which suppresses rnai in mammal cells,was then studied using these two *** hairpin rnas targeting green fluorescence protein(pshrna-GFP)and firefly luciferase(pshrna-luc)were designed and inserted into a eukaryotic transcriptional vector pTZU6+1,*** shrna expressing vectors were co-transfected with plasmids containing the target gene with or without *** GFP expression level was assayed by fluorescence microscopy,Western blotting and *** luciferase expression level was analyzed by the dual-luciferase assay *** designed in this study down-regulated the target gene specifically and efficiently,with a decrease of expression of both genes of about 70%,*** P19 was introduced into the rnai systems,the expression of both GFP and the luciferase were mostly recovered compared with the control *** rnai systems of GFP and luciferase were constructed successfully,demonstrating that P19 of tomato bushy stunt virus has the ability to counteract the rnai effect induced by shrna in mammal cells.

关键词：哺乳动物 rna干涉番茄丛矮病毒 P19 rna抑制

丹参4-羟基苯丙酮酸还原酶基因rnai表达载体的构建

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药物生物技术 2012年第6期19卷 480-484页

作者：谈荣慧张金家赵淑娟胡之璧上海中医药大学中药研究所国家中医药管理局中药新资源与品质评价重点实验室上海市中药复方重点研究室上海201203

为研究丹参4-羟基苯丙酮酸还原酶基因(SmHPPR)在丹酚酸类化合物生物合成中的作用,构建SmHPPR的rnai植物表达载体。根据SmHPPR的序列,设计4对含有酶切位点的特异性引物,以丹参无菌苗叶片cDNA为模板,分别扩增两段目的基因的正反向片段(约4... 详细信息

为研究丹参4-羟基苯丙酮酸还原酶基因(SmHPPR)在丹酚酸类化合物生物合成中的作用,构建SmHPPR的rnai植物表达载体。根据SmHPPR的序列,设计4对含有酶切位点的特异性引物,以丹参无菌苗叶片cDNA为模板,分别扩增两段目的基因的正反向片段(约402 bp和346 bp),经T-载体克隆并测序后,将正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置(正向目的片段插人中间载体pKANNIBAL内含子左侧,反向目的片段插入该载体内含子右侧),构建了含有发夹结构的rnai植物表达载体pART27-HPPR1sa、pART27-HPPR2sa和阴性对照载体pART27-Intron。利用三亲杂交法,将这3个载体导入到发根农杆菌LBA9402中。酶切鉴定和PCR扩增结果表明rnai表达载体构建成功并成功导入到发根农杆菌LBA9402中,为下一步研究SmHPPR基因的功能奠定基础。

关键词：丹参 4-羟基苯丙酮酸还原酶基因 rna抑制载体

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鸡胚电转染-rna干扰技术在体模型的建立

中国实验动物学报 2010年第5期18卷 390-393,I0006,I0007页

作者：陈大为李瑞国刘佳利中国农业大学生物学院农业生物技术国家重点实验室北京100193 中国生物技术发展中心北京100036

目的建立在体鸡胚电转染-rna干扰技术(rnai)模型。方法通过SOE-PCR方法,利用shrna中的Loop环作为交叠区序列成功的建立了一种方便的shrna表达序列构建方法,将Isl-1特异性的shrna序列插入到pEGFP-H1-shrna质粒中,通过注射后电转染,利用... 详细信息

目的建立在体鸡胚电转染-rna干扰技术(rnai)模型。方法通过SOE-PCR方法,利用shrna中的Loop环作为交叠区序列成功的建立了一种方便的shrna表达序列构建方法,将Isl-1特异性的shrna序列插入到pEGFP-H1-shrna质粒中,通过注射后电转染,利用免疫组织化学方法检测Isl-1在鸡胚神经管和背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)中的表达。结果鸡胚神经管和DRG中Isl-1的表达受到明显抑制。结论成功建立了在体鸡胚电转染-rnai模型,为以鸡胚为模式动物研究神经管和DRG发育相关基因的功能提供了有力的工具。

关键词：鸡胚神经管背根神经节 rna抑制在体电转染

Regulation of microrna on plant development and viral infection

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Chinese Science Bulletin 2006年第3期51卷 269-278页

作者： DUAN Chengguo WANG Chunhan GUO Huishan National Key Laboratory of Plant Genomics Institute of MicrobiologyChinese Academy of Sciences Beijing 100080 China

Micrornas (mirnas ) 是非编码规章的 rnaswhich 的约 22 nt 的一个班在优核质是通用的。他们为劈开或翻译压抑由 targetingmrnas 充当基因表示的否定管理者。mirnas 广泛地参予与植物联系的基因表示的规定发展过程，例如在植物的机关... 详细信息

Micrornas (mirnas ) 是非编码规章的 rnaswhich 的约 22 nt 的一个班在优核质是通用的。他们为劈开或翻译压抑由 targetingmrnas 充当基因表示的否定管理者。mirnas 广泛地参予与植物联系的基因表示的规定发展过程，例如在植物的机关形态发生和 signaltransduction 小径。类似于在植物的抗病毒的 rna silencing， mirna 小径被 silencing 也介入压制病毒编码的 ors。在这评论，我们给调停 mirna 的规章的小径和调停 sirna 的 rna silencing 之间的差别的一篇简短摘要。Inparticular，我们在 mirna 上考察最近的研究规章的角色在种发展进程，以及干扰病毒在 mirna 小径压制 ors，试图在真核细胞的有机体把卓见装入基因表达式规定的复杂性。

关键词：植物发育病毒感染 mirnas 真核细胞 rna抑制病毒抑制物

小rna技术干扰p21联合环磷酰胺对HepG_2细胞增殖及凋亡的影响

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山西医科大学学报 2013年第11期44卷 837-840页

作者：刘红云包永芬单士刚湖北科技学院基础医学院医学免疫学教研室咸宁437100 湖北科技学院基础医学院医学微生物学教研室湖北科技学院基础医学院医学细胞生物学与遗传学教研室

目的探讨小rna干扰p21表达联合环磷酰胺对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的sirna序列转染至HepG2细胞,将HepG2细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、rna抑制组、环磷酰胺组、联合组(rna抑制+环磷酰... 详细信息

目的探讨小rna干扰p21表达联合环磷酰胺对HepG2细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的sirna序列转染至HepG2细胞,将HepG2细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、rna抑制组、环磷酰胺组、联合组(rna抑制+环磷酰胺)。采用MTT比色法、流式细胞术和分光光度法分别检测HepG2细胞增殖、细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员caspase-9、caspase-3和caspase-6的活化程度。结果 p21 sirna转染后,相对于环磷酰胺单独处理组,联合处理组HepG2细胞增殖率显著降低,而细胞凋亡率则率明显升高(Prna抑制作用联合环磷酰胺处理显著促进了HepG2细胞凋亡,p21可作为肝癌基因治疗的后选新靶点。

关键词： HepG2细胞 p21 rna抑制环磷酰胺 caspase家族

帕金森病多巴胺细胞凋亡与Fas基因表达的机制研究

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中国医药导报 2019年第34期16卷 4-6,30,I0002页

作者：夏欢罗琴王玉玲高华杨新玲新疆医科大学附属肿瘤医院核医学科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属肿瘤医院呼吸神经内科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院内科VIP一病区新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第五附属医院神经内科新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第二附属医院神经内科新疆乌鲁木齐830063

目的探讨Fas基因mrna抑制后对帕金森病(PD)大鼠模型中多巴胺细胞的抗细胞凋亡作用。方法将75只SD大鼠按随机数字表法分为五组,每组15只。空白对照组:大鼠脑黑质内注入生理盐水;PD组:脑黑质内注射6-OHDA;Fas sirna组:脑黑质内注射Fas基... 详细信息

目的探讨Fas基因mrna抑制后对帕金森病(PD)大鼠模型中多巴胺细胞的抗细胞凋亡作用。方法将75只SD大鼠按随机数字表法分为五组,每组15只。空白对照组:大鼠脑黑质内注入生理盐水;PD组:脑黑质内注射6-OHDA;Fas sirna组:脑黑质内注射Fas基因抑制剂Fas sirna,2 d后注射同剂量的6-OHDA;阳性对照组及阴性对照组:脑黑质内分别注射Fas sirna阳性对照物、阴性对照物,2 d后注射同剂量的6-OHDA。采用免疫组化、聚合酶链反应和蛋白印迹杂交技术检测多巴胺阳性细胞数、Fas-mrna及Fas-蛋白相对表达量。结果PD组大鼠的TH阳性细胞计数少于空白对照组(Prna组和阳性对照组大鼠的TH阳性细胞计数多于PD组(Prna及Fas-蛋白相对表达量均高于空白对照组(Prna组和阳性对照组大鼠的Fas-mrna及Fas-蛋白相对表达量均低于PD组(Prna组和阳性对照组大鼠的Fas-mrna及Fas-蛋白相对表达量均低于阴性对照组(P抑制后可有效减少多巴胺细胞的凋亡。

关键词：帕金森病凋亡 Fas基因 rna抑制

p21基因沉默联合表阿霉素促进乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其机制的研究

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浙江创伤外科 2014年第5期19卷 694-697页

作者：全基春董树枫金玮泉浙江省绍兴市妇保院绍兴312000

目的研究si rna沉默p21基因表达联合表阿霉素对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的si rna序列转染至MCF-7细胞,将MCF-7细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、rna抑制组、表阿霉素组、联合组(rna沉默+... 详细信息

目的研究si rna沉默p21基因表达联合表阿霉素对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。方法将化学合成的针对p21的si rna序列转染至MCF-7细胞,将MCF-7细胞分为5组:空白对照组、阴性对照组、rna抑制组、表阿霉素组、联合组(rna沉默+表阿霉素)。采用MTT比色法、流式细胞术和分光光度法分别检测MCF-7细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族成员Caspase-9、Caspase-3和Caspase-6的活化程度。结果 p21 si rna转染后,相对于表阿霉素单独处理组,联合组细胞死亡率明显升高(Prna抑制联合表阿霉素处理显著促进了MCF-7细胞凋亡,p21可作为乳腺癌基因治疗的后选新靶点。

关键词： MCF-7细胞 p21 si rna抑制表阿霉素 Caspase家族