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rna干涉PtBRC1基因增加杨树分枝

RNA干涉PtBRC1基因增加杨树分枝

作者：史晓霞贵州大学

学位级别：硕士

分枝是植物复杂的发育性状,少分枝品种能提高木材的利用率,多分枝品种能调节树冠形态,培育合理株型的木本植物具有重要的经济效益和生态效益。TCP家族的BRC1基因在生物素极性运输中是一个核心调节基因,对于植物分枝发育具有极其重要的... 详细信息

分枝是植物复杂的发育性状,少分枝品种能提高木材的利用率,多分枝品种能调节树冠形态,培育合理株型的木本植物具有重要的经济效益和生态效益。TCP家族的BRC1基因在生物素极性运输中是一个核心调节基因,对于植物分枝发育具有极其重要的作用。本文以毛白杨为材料,通过rnai技术降低Pt BRC1基因表达,研究其对毛白杨分枝和生物量的影响,从而达到培育理想分枝新品种的目的,取得如下结果:1.生物信息学分析与拟南芥BRANCHED1(BRC1)基因相比,毛果杨中比对到两个同源基因,分别为Potri.015G050500.1和Potri.012G059900.1,氨基酸序列同源性为51.4%和69.94%,陆地棉中比对到Gohir.D11G006200.1、Gohir.A11G007100.1、Gohir.A12G265400.1、Gohir.D12G265600.1同源性分别为58.3%、58.3%、59.2%、53.8%,水稻Os03g49880.1同源性为57.1%,番茄中比对到Solyc06g069240.1、Solyc03g119770.2同源性为59.2%、62.9%。多序列比对均含有TCP domain和R domain结构域。杨树Pt BRC1基因起始密码子上游2000bp序列预测结果显示:其启动子区域中存在厌氧、昼夜、脱落酸、赤霉素响应等顺式作用元件。2.Pt BRC1的毛白杨组织器官差异表达分析BRC1基因在毛白杨不同组织中表达量不同,根>腋芽>老叶>茎>顶芽>嫩叶。3.构建植物干涉载体,遗传转化毛白杨分别利用35S和ATC085启动子构建两个植物干涉载体p BWA-35S-Pt BRC1和p BWA-ATC085-Pt BRC1。通过根癌农杆菌介导的叶盘法遗传转化毛白杨叶片。经PCR鉴定获得6株35S-rnai-Pt BRC1转基因杨树和4株ATC085-rnai-Pt BRC1转基因杨树。4.野生型和转基因毛白杨农艺性状测定研究发现转基因杨树分枝数明显多于野生型,发芽时间提前,35S-rnai-Pt BRC1转基因杨树的分枝数多于ATC085-rnai-Pt BRC1转基因杨树,35S-rnai-6、ATC085-rnai-2、ATC085-rnai-3转基因植株鲜重分别比野生型增加了37%、34%、1.6%,干重分别增加了30%、-8%、35%。经打顶处理后,35S-rnai-4转基因植株的分枝增加了21个,明显高于野生型增加的8个,35S-rnai-4植株的鲜重和干重分别是是野生型的2.2倍和2.7倍。定量PCR检测发现转基因植株体中Pt BRC1表达量均比野生型低,为野生型的0.1-0.7倍左右,推测Pt BRC1表达量降低是引起分枝数增加的原因。5.差异基因表达分析通过转录组测序,对差异基因进行GO和KEGG分析,发现干涉植株与野生型的主要差异表达基因被富集在植物激素信号转导、植物MAPK信号通路及氨基糖和核苷酸糖代谢等代谢通路上。推测干涉毛白杨中Pt BRC1基因可能通过碳水化合物代谢和MAPK信号通路途径调控分枝发育。

关键词：毛白杨 PtBRC1基因农艺性状分枝 rna干涉转录组

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rna干涉分子机制研究进展

生物化学与生物物理进展 2002年第5期29卷 678-681页

作者：孙建国廖荣霞陈正堂第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆400037 第三军医大学基础部生物化学教研室重庆400038

rna干涉 (rnainterference ,rnai)是生物体内的一种通过双链rna (dsrna)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链rna与同源mrna互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近... 详细信息

rna干涉 (rnainterference ,rnai)是生物体内的一种通过双链rna (dsrna)来抵抗病毒入侵和抑制转座子活动的自然机制 .双链rna与同源mrna互补结合而使特定基因失活 ,这一过程已经在包括拟南芥、线虫和真菌等多种模式生物中得到揭示 .近来研究表明 ,2 1～ 2 5nt的小干涉rna (smallinterferencerna ,sirna)可介导哺乳动物细胞特异性基因沉默 .rnai具有高效性和高度特异性。

关键词： rna干涉分子机制研究进展基因沉默

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rna干涉和小干涉rna

浙江大学学报（工学版） 2005年第7期39卷 1096-1100页

作者：张芹王勇钱凯先浙江大学生命科学学院浙江杭州310027

rna干涉(rnainterference.rnai)可以抑制诸多真核基因的表达,小干涉rna(smallintmferencerna,sirna)是rna干涉的引发物,不同的sirna可以引导不同水平的rna干涉,不同种细胞中sirna的寡核苷酸链的性质也有很大的不同.非编码rna中的微小rna... 详细信息

rna干涉(rnainterference.rnai)可以抑制诸多真核基因的表达,小干涉rna(smallintmferencerna,sirna)是rna干涉的引发物,不同的sirna可以引导不同水平的rna干涉,不同种细胞中sirna的寡核苷酸链的性质也有很大的不同.非编码rna中的微小rna(micnorna,mirna)与sirna在结构及作用方式等方面有很多区别和联系.rnai的作用机制大致有两种:在Drosophila中的一般作用模式和在C.elegans中的扩大作用模式.利用rna干涉技术可以通过抑制基因的表达来研究其功能;rna干涉作为基因治疗的工具,在肝炎和AIDS的治疗过程中有一定的作用.rnai的高特异性、高效性、放大效应和无细胞特异性等特点在科研中得到了广泛的应用.

关键词： rna干涉小干涉rna 微小rna

rna干涉抑制宫颈癌HPV16E6基因的研究

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四川大学学报（医学版） 2006年第1期37卷 14-18页

作者：牛晓宇彭芝兰段伟强王和陈悦悦范余娟程易凡钱晓蕾四川大学华西第二医院妇产科成都610041 四川大学华西医院烧伤整形科浙江大学附属妇产科医院

目的采用rna干涉(rnaI)技术干扰宫颈癌HPV16E6基因转录,通过体外和体内实验了解其特异性抑制HPV16E6基因的效率。方法设计合成针对HPV16E6的小干扰rna(SIrna),借脂质体转染宫颈癌CASKI细胞,通过测定转染后不同时间点的细胞凋亡率、HPV16... 详细信息

目的采用rna干涉(rnaI)技术干扰宫颈癌HPV16E6基因转录,通过体外和体内实验了解其特异性抑制HPV16E6基因的效率。方法设计合成针对HPV16E6的小干扰rna(SIrna),借脂质体转染宫颈癌CASKI细胞,通过测定转染后不同时间点的细胞凋亡率、HPV16E6Mrna及蛋白表达变化了解基因抑制的效率。体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将E6SIrna直接注入瘤体,观察肿瘤体积的变化,肿瘤切片HPV16E6免疫组化染色,观察肿瘤坏死和细胞的凋亡。结果HPV16E6SIrna转染细胞后24H、48H、5D和9D时凋亡率分别为7.7%、11.8%、37.4%和12.6%。RT-PCR显示转染后24H、48H、5D和9D HPV16E6Mrna量减少了77%、83%、59%和41%。WESTERN BLOT显示转染后的HPV16E6蛋白表达在24H、48H、5D明显减少,9D时有所恢复;流式细胞仪HPV16E6蛋白定量测定结果显示,转染后24H、48H、5D和9D蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%、71.3%和57.4%。体内实验瘤内注射HPV16E6SIrna明显抑制肿瘤的生长,HPV16E6蛋白表达明显受抑,肿瘤组织坏死和细胞凋亡增加,重复给药较单次给药效果更好。结论体内和体外实验均表明rna干涉HPV16E6基因的效果具有特异性和高效性。

关键词： rna干涉 HPV16 E6 宫颈癌基因治疗

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小鼠胚胎干细胞中rna干涉现象

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第3期35卷 238-246页

作者：孟国良汤富酬张俊争赵文宁尚克刚丁明孝薛友纺北京大学生命科学学院北京大学生命科学学院北京100871

报道了不同品系小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )系MESPU13、B3和R1中存在的rna干涉 (rnai)现象。应用脂质体法 ,将转录绿色荧光蛋白 (GFP)基因双链rna(dsrna)的载体 (pdsGFP)转染GFP标记的ES细胞 ,dsrna的瞬时表达可引起ES细胞中的rnai效应 ,... 详细信息

报道了不同品系小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )系MESPU13、B3和R1中存在的rna干涉 (rnai)现象。应用脂质体法 ,将转录绿色荧光蛋白 (GFP)基因双链rna(dsrna)的载体 (pdsGFP)转染GFP标记的ES细胞 ,dsrna的瞬时表达可引起ES细胞中的rnai效应 ,即质粒转录的GFP基因的dsrna能够显著降低ES细胞内相应的外源GFP基因的表达 ;同时 ,用电穿孔转染法将线性化的pdsGFP puro导入ES细胞中 ,筛选后 ,在 3 0 %左右的抗性克隆中GFP表达量明显降低 ,少数细胞内的干涉效率达到RT PCR检测不到的程度。在此基础上 ,构建了可转录ES细胞特异标记基因OCT 4基因片断dsrna的载体 ,经基因打靶和抗性筛选得到了稳定整合的ES细胞克隆 ,随机扩增了 5 1个克隆 ,并对其中的 48个阳性克隆进行了PCR半定量检测 ,结果显示 :在 11个ES细胞克隆中具有显著的rnai效应 ,干涉效率达到RT PCR检测不到的程度。这一结果表明 ,应用rnai在不同品系ES细胞中研究哺乳动物及人的基因功能是可行的

关键词： rna干涉 ES细胞双链rna 反义rna

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rna干涉

江西科学 2006年第2期24卷 111-114页

作者：龚熹罗玉萍李思光南昌大学生命科学学院江西南昌330047

rna干涉是指双链rna引发的同源mrna的降解过程,由于其多发生于转录水平,因此又称为转录后基因沉默。rna干涉现象是在线虫中首次发现的,通过几年的研究发现它广泛存在于生物体中(包括单细胞生物、后生动物和哺乳动物)。本文对rna干涉现... 详细信息

rna干涉是指双链rna引发的同源mrna的降解过程,由于其多发生于转录水平,因此又称为转录后基因沉默。rna干涉现象是在线虫中首次发现的,通过几年的研究发现它广泛存在于生物体中(包括单细胞生物、后生动物和哺乳动物)。本文对rna干涉现象的发现、作用机制、相关基因等作了简单的论述。

关键词： rna干涉转录后基因沉默小分子干涉rna 依赖于rna的rna聚合酶

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rna干涉

生命科学仪器 2004年第2期2卷 39-41页

作者：曹国军邵宁生军事医学科学院基础医学研究所

本文首先简要综述了rnai的发现,发展和越来越广泛的应用。随后介绍了目前公认的rnai的作用机制,双链rna被Dicer剪切成sirna,在体内组装咸蛋白复合体,在sirna的引导下切割靶rna,或者以靶rna为模板合成新的双链rna,进一步被Dicer识别和剪... 详细信息

本文首先简要综述了rnai的发现,发展和越来越广泛的应用。随后介绍了目前公认的rnai的作用机制,双链rna被Dicer剪切成sirna,在体内组装咸蛋白复合体,在sirna的引导下切割靶rna,或者以靶rna为模板合成新的双链rna,进一步被Dicer识别和剪切。还列举了rnai的可能应用领域,包括基础和应用研究方面,并简单介绍了rnai的应用方案。最后分析rnai机制中未能清楚的方面和应用中的困难。

关键词： rna干涉 rnai sirna 基因沉默 gene silencing RISC

rna干涉下调survivin基因对人肝癌细胞的生长抑制及促凋亡作用

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吉林大学学报（医学版） 2009年第1期35卷 73-77,195页

作者：李静蒋政陈丽孙海波辽宁医学院附属第一医院消化科辽宁锦州121000 吉林大学第一医院消化内科吉林长春130021 辽宁省锦州市第二医院骨科辽宁锦州121003

目的:探讨rna干涉技术下调survivin基因表达对人肝癌细胞的生长抑制及促凋亡的作用,为肝癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法:构建pSU6-si-survivin重组质粒,转染人肝癌细胞株Bel7402,设空白组、阴性组和治疗组,采用MTT法检测肝癌细... 详细信息

目的:探讨rna干涉技术下调survivin基因表达对人肝癌细胞的生长抑制及促凋亡的作用,为肝癌的基因治疗提供有效靶点及技术。方法:构建pSU6-si-survivin重组质粒,转染人肝癌细胞株Bel7402,设空白组、阴性组和治疗组,采用MTT法检测肝癌细胞的增殖活性,RT-PCR检测survivin基因mrna水平,Western blotting及免疫组化法检测survivin蛋白表达,流式细胞技术(FCM)及AO/EB染色观察细胞凋亡。结果:MTT法检测,治疗组24、48和72 h细胞生长抑制率(%)分别为21.43±1.67、39.07±3.80和59.72±7.05,与阴性组比较差异有显著性(Prna及蛋白水平上表达均下降,上述产物量与β-actin的比值与空白组和阴性组比较差异均有显著性(P<0.01)。FCM检测治疗组细胞阻滞于G0/G1期,凋亡率为(20.65±1.28)%,与空白组及阴性组比较差异有显著性(P<0.01)。AO/EB双染色治疗组细胞呈早中期凋亡。结论:重组质粒pSU6-si-survivin可抑制survivin基因在人肝癌细胞中的表达,抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡;survivin基因可作为肝癌基因治疗的重要靶点。

关键词：肝肿瘤 rna干涉细胞凋亡 survivin基因

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rna干涉技术及眼科应用

中华实验眼科杂志 2014年第4期32卷 370-374页

作者：孔怡淳赵堪兴天津市眼科医院天津市眼科学与视觉科学重点实验室(天津市眼科研究所)天津医科大学眼科临床学院 300384

rna干涉（rnai）是将细胞内引入与内源性mrna编码区某段序列同源的双链rna（dsrna）,使该mrna发生特异性降解,调控目标基因的表达.作为转录后基因沉默（PTGs）的一种,这种现象普遍存在于生物体内.眼科相关领域的研究表明,rnai对多种眼... 详细信息

rna干涉（rnai）是将细胞内引入与内源性mrna编码区某段序列同源的双链rna（dsrna）,使该mrna发生特异性降解,调控目标基因的表达.作为转录后基因沉默（PTGs）的一种,这种现象普遍存在于生物体内.眼科相关领域的研究表明,rnai对多种眼科疾病均有预防和治疗作用,包括眼科新生血管性疾病、抗青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化、眼内肿瘤、自身免疫性葡萄膜视网膜炎等.由于rnai能够高效地、特异性地抑制体内特定基因的表达,近年来逐渐受到人们的关注.就rnai干涉的基本概念、作用机制、作用特点以及在眼科领域的研究进展进行综述..

关键词： rna干涉 rna,小干涉基因学基因沉默基因疗法眼科