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Efficient silencing.of Endogenous Micrornas Using Artificial Micrornas in Arabidopsis thaliana

Molecular Plant 2011年第1期4卷 157-170页

作者： Andrew L. Eamens Claire Agius Nell A. Smith Peter M. Waterhouse Ming-Bo Wang CSIRO Plant Industry GPO Box 1600 Canberra ACT 2601 Australia School of Molecular Bioscience University of Sydney Sydney NSW 2006 Australia

We report here that the expression of endogenous micrornas （mirnas） can be efficiently silenced in Arabi- dopsis thaliana （Arabidopsis） using artificial mirna （amirna） technology. We demonstrate that an amirna designed to target a mature mirna directs silencing.against all mirna family members, whereas an amirna designed to target the stem-loop region of a mirna precursor transcript directs silencing.against only the individual family member targeted. Furthermore, our results indicate that amirnas targeting both the mature mirna and stem-loop sequence direct rna silencing.through cleavage of the mirna precursor transcript, which presumably occurs in the nucleus of a plant cell during the initial stages of mirna biogenesis. This suggests that small rna （srna）-guided rna cleavage in plants occurs not only in the cytoplasm, but also in the nucleus. Many plant mirna gene families have been identified via sequencing and bio- informatic analysis, but, to date, only a small tranche of these have been functionally characterized due to a lack of ef- fective forward or reverse genetic tools. Our findings therefore provide a new and powerful reverse-genetic tool for the analysis of mirna function in plants.

关键词： Microrna artificial microrna rna silencing.

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