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坛紫菜叶状体rna提取方法的改良与比较

水产学报 2010年第2期34卷 220-226页

作者：谢潮添梅高尚陈昌生纪德华集美大学水产学院

为提取高质量的坛紫菜叶状体总rna,对常用的几种植物rna提取方法(CTAB法、SDS法、异硫氰酸胍法)按照去除多糖、多酚的方法进行了改良,并对分离的总rna根据吸光值、电泳图谱及RT-PCR检测等结果与两种试剂盒(离心柱试剂盒法,rnaiso法)的... 详细信息

为提取高质量的坛紫菜叶状体总rna,对常用的几种植物rna提取方法(CTAB法、SDS法、异硫氰酸胍法)按照去除多糖、多酚的方法进行了改良,并对分离的总rna根据吸光值、电泳图谱及RT-PCR检测等结果与两种试剂盒(离心柱试剂盒法,rnaiso法)的提取结果进行了比较。结果表明,SDS法、异硫氰酸胍法和rnaiso法3种方法提取的rna纯度低,质量差,部分rna已经发生了降解。而改良CTAB法和离心柱试剂盒法提取的总rna质量可靠,完整性好,纯度高,并且成功去除了可能影响逆转录酶活性的物质,可以进一步应用于cDNA文库构建,基因表达分析等后续实验,但这两种方法各有优缺点,应根据实际情况选用合适方法进行坛紫菜叶状体总rna的分离。

关键词：坛紫菜叶状体 rna提取 RT-PCR

林蛙输卵管总rna提取方法的优化及RT-PCR验证

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吉林大学学报（理学版） 2014年第3期52卷 605-610页

作者：李稼晖刘回民陈文超刘景圣吉林农业大学食品科学与工程学院长春130118

分别使用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、TRIzol法和rnaiso Plus法对林蛙的输卵管组织进行总rna提取,考察不同方法对总rna提取量的影响.结果表明:利用改良的rnaiso Plus法并经进一步纯化,获得总rna的A260/A280平均值为1.96,平均... 详细信息

分别使用改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、TRIzol法和rnaiso Plus法对林蛙的输卵管组织进行总rna提取,考察不同方法对总rna提取量的影响.结果表明:利用改良的rnaiso Plus法并经进一步纯化,获得总rna的A260/A280平均值为1.96,平均得率为56.1μg/g;通过反式多聚酶链式反应(RT-PCR)获得了林蛙GAPDH基因和EF-1-α基因的部分序列.

关键词：林蛙输卵管 rna提取优化 RT-PCR 验证

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少量造血细胞rna提取方法学探讨

中华血液学杂志 2009年第5期30卷 349-350页

作者：秦亚溱王亚哲李金兰李玲娣常艳刘艳荣北京大学人民医院、北京大学血液病研究所 100044

骨髓中的造血细胞是一个包括了从多能造血干细胞至成熟细胞不同分化阶段及粒系、淋系等不同分化系列的复杂群体。为了解不同细胞群体各种基因的表达情况，需要采用流式细胞术或磁珠分选出特定的细胞群，再进行rna提取、PCR等过程。不过... 详细信息

骨髓中的造血细胞是一个包括了从多能造血干细胞至成熟细胞不同分化阶段及粒系、淋系等不同分化系列的复杂群体。为了解不同细胞群体各种基因的表达情况，需要采用流式细胞术或磁珠分选出特定的细胞群，再进行rna提取、PCR等过程。不过造血干／祖细胞等细胞群往往数目不多，而TRIzol等常规rna提取方法要求细胞数应该在10^5以上，因此需要采用特殊的少量细胞rna提取方法。我们将对两种少量细胞rna提取方法作一比较。

关键词： rna提取造血细胞方法学多能造血干细胞造血干/祖细胞细胞群体流式细胞术成熟细胞

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棉花幼苗根总rna提取的改进热酚法

西北植物学报 2005年第4期25卷 723-726页

作者：王友华卢孟柱段留生中国农业大学农学与生物技术学院北京100094 中国林业科学院林业研究所生物技术室北京100091

获得高质量的植物总rna比较困难,rna的提取方法会因植物材料的不同而又有较大差异.棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此rna提取难度较大.本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根rna热酚提取法,该... 详细信息

获得高质量的植物总rna比较困难,rna的提取方法会因植物材料的不同而又有较大差异.棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此rna提取难度较大.本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根rna热酚提取法,该法可获得高质量棉根总rna,并能成功进行反转录,制备cDNA.

关键词：棉花根 rna提取热酚法改进

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油菜种子高质量总rna提取的一种有效方法

华中农业大学学报 2006年第5期25卷 465-468页

作者：丁勇刘英杨鸯鸯甘莉华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室武汉430070 东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室哈尔滨150040

设计了1种从油菜种子中分离高质量总rna的方法，有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总rna经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测，可见28S和18Srrna的2条清晰的带型，完整无降解，其A260／A280在1．8～2．0之间... 详细信息

设计了1种从油菜种子中分离高质量总rna的方法，有效的排除了种子中富含的多酚、多糖和蛋白质等杂质的污染。分离的总rna经甲醛变性凝胶电泳和紫外光检测，可见28S和18Srrna的2条清晰的带型，完整无降解，其A260／A280在1．8～2．0之间。研究结果证明，利用本方法提取的油菜种子总rna具有很高的质量和纯度，且得率高，完全能满足后续的RT-PCR、全长基因的克隆和Northern blotting分析等分子生物学研究。

关键词：油菜种子 rna提取多酚多糖方法

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一种适合于红藻的总rna提取方法

海洋湖沼通报 2012年第4期 64-71页

作者：李天勇任磊周冠刘翠迟珊刘涛中国海洋大学海洋生命学院山东青岛266003

以5种红藻(条斑紫菜(Porphyra yezoensis),日本多管藻(Polysiphonia japonica),长心卡帕藻(Kappaphycus alvarezii),扇形叉枝藻(Gymnogongrus ftabelliformis),带形蜈蚣藻(Grate-loupia turuturu))为实验材料,为了获得高质量的总rna,比较了Trizol法、试剂盒法、CTAB法和Trizol+纯化柱法。结果显示:Trizol+纯化柱法对5种红藻总rna的提取均取得了良好的效果。经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总rna 28S、18S条带清晰明亮,无降解;A260/A280、A260/A230值均符合要求,表明提取的总rna质量较好;利用提取的总rna进行RT-PCR扩增actin基因的保守片段,能够获得约550bp的目的片段,进一步表明Trizol+纯化柱法是适合于红藻总rna提取的方法。

关键词：红藻 rna提取 RT—PCR actin

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毛竹不同组织总rna提取质量的比较

中南林业科技大学学报 2021年第9期41卷 157-165页

作者：方婷徐倩金爱武邓莹骆争荣朱强根浙江农林大学省部共建亚热带森林培育国家重点实验室浙江杭州311300 丽水学院生态学院浙江丽水323000

【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总rna提取的最优方法,获得高质量rna样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根... 详细信息

【目的】探讨适合于毛竹不同组织尤其是毛竹根系以及种子等总rna提取的最优方法,获得高质量rna样品,为今后开展毛竹的分子生物学研究奠定理论基础。【方法】分别采用柱式Trizol法、Trizol法、SDS法、改良CTAB法提取毛竹的细根、气雾根、成熟叶、幼叶、枝、种子、笋等不同组织的rna,通过NanoDrop 2000微量分光光度计检测浓度、1.5%琼脂糖凝胶电泳检测样品完整度以及RT-PCR检测是否存在目标条带,采用Excel和SPSS软件对提取结果进行统计学分析。【结果】4种方法均能从毛竹不同组织中提取到总rna,其中SDS法提取的rna浓度较高,但提取时间过长且步骤繁琐,rna容易发生降解,其质量不适合用于后续的分子生物学试验;柱式Trizol法和Trizol法用时短且提取方法简单便捷,除了对毛竹细根和种子的提取效果不佳外,其余组织的rna纯度和质量都可以满足后续的试验开展;改良CTAB法适用于各组织,包括木质化程度较高的毛竹细根以及富含淀粉的毛竹种子,缺点是DNA残留明显。除SDS法所获得的浓度较高并与其他3种方法有显著性差异外,其余3种rna抽提方法对样品总rna浓度无统计学差异,且各组织rna反转录为cDNA,以内参基因PhPP2A为目的基因进行RT-PCR扩增,均可在目标位置获得明亮单一条带,约为150 bp。【结论】改良CTAB法最适合毛竹细根以及种子的rna提取,柱式Trizol法和Trizol法适合毛竹气雾根、叶、枝和笋总rna的提取。

关键词：毛竹组织 rna提取 RT-PCR

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绵羊精子rna提取方案的优化

黑龙江畜牧兽医 2022年第18期 62-67,141页

作者：任秀美奥姚旭东蒙亚琦郭延华唐红张译元王立民周平石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆石河子832000

为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子rna回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法... 详细信息

为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子rna回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子rna,检测rna的浓度、纯度和完整性,将rna反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的rna是否受体细胞rna和基因组污染。结果表明:用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低。Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的rna较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子rna较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低。两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子rna提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子rna均能检测到PRM1基因,未检测出CDH1基因。说明Percoll密度梯度离心法纯化精子结合TRIzol(65℃)+试剂盒法提取精子rna效果较好,无体细胞污染,且纯度较高。

关键词：绵羊精液 rna提取 Percoll溶液 PBS溶液鱼精蛋白1 上皮细胞钙黏蛋白 TRIzol

烟草rna提取方法的优化及冰盒储存时间的探讨

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江西农业大学学报 2014年第3期36卷 495-500页

作者：徐航刘仁祥徐如宏聂琼段兴友陈绍凯王国琴袁富蔡琳贵州大学贵州省烟草品质研究重点实验室贵州贵阳550025

烟草作为一个模式植物在分子生物学研究中发挥着重要的作用，其总rna的提取是后续分子生物学研究的前提和关键之一。针对过柱型的rna提取试剂盒在有效的清除烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的同时，影响了rna产量和浓度，以及远距离携... 详细信息

烟草作为一个模式植物在分子生物学研究中发挥着重要的作用，其总rna的提取是后续分子生物学研究的前提和关键之一。针对过柱型的rna提取试剂盒在有效的清除烟草中糖类、蛋白质及次生代谢物的同时，影响了rna产量和浓度，以及远距离携带液氮取材困难的问题，设置不同提取方法和冰盒不同储运时间处理，对天根rna simple总rna提取试剂盒进行了优化，并对冰盒贮存烟叶时间与rna提取质量的关系进行了探讨。结果表明：优化试剂盒法获得了高浓度高质量的烟草总rna。经琼脂糖电泳检测，利用该方法提取的烟草总rna，条带清晰、无拖尾现象，28S与18S 的比例约为2∶1。紫外吸收值的测定表明，所提取的烟草总rna的A 260/A 280的值在1．8～1．9，浓度显著高于原方法；而冰盒能在5 h内保证所取样品rna 的完整性，适宜于短途运输储存。

关键词：烟草 rna提取优化试剂盒法冰盒储存 RT-PCR