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rna干扰技术用于抗乙型肝炎病毒的实验研究

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中华肝脏病杂志 2004年第9期12卷 519-521页

作者：蔡大川曾彦李用国任红重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆400010

目的构建针对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和核心抗原的小干扰rna(sirna)表达载体pSuper-C,观察其对HepG2 2.2.15细胞(简称2.2.15细胞)中HBV DNA转录和翻译相应蛋白的影响。方法根据rna干扰(rnai)作用原理设计针对HBV核心区的相应序... 详细信息

目的构建针对乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和核心抗原的小干扰rna(sirna)表达载体pSuper-C,观察其对HepG2 2.2.15细胞(简称2.2.15细胞)中HBV DNA转录和翻译相应蛋白的影响。方法根据rna干扰(rnai)作用原理设计针对HBV核心区的相应序列,再将其克隆人含聚合酶ⅢH 1-rna启动子的真核表达载体pSuper,将此重组质粒以电转染法转入2.2.1 5细胞中,用酶联免疫吸附法(Abbott试剂)检测培养上清液中HBsAg和e抗原(HBeAg)的表达。结果经酶切鉴定、电泳和测序分析证明,成功构建了含作用序列的重组质粒pSuper-C;但以电穿孔法转染2.2.15细胞后未能发现其对2.2.15细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg的表达有影响。结论 rnai在2.2.1 5细胞中的作用还需进一步的实验来证实。

关键词： 2.2.15细胞 HBV 抗乙型肝炎病毒 rna干扰技术转染培养上清液表达载体小干扰rna 转录重组质粒

rna干扰技术降低黑曲霉细胞工厂的内源蛋白背景

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现代食品科技 2014年第5期30卷 178-184页

作者：银超王云艳何攀陈婧王斌潘力华南理工大学生物科学与工程学院广东省发酵与酶工程重点实验室广东广州510006

利用rna干扰技术(rna interference,rnai)改造黑曲霉细胞工厂,减少其内源蛋白表达背景。研究rnai载体中反向互补片段特异性对rna干扰的影响,同步干扰糖化酶基因glaA、淀粉酶基因amyA及蛋白酶调控因子基因prtT,并利用经rna干扰改造的黑... 详细信息

利用rna干扰技术(rna interference,rnai)改造黑曲霉细胞工厂,减少其内源蛋白表达背景。研究rnai载体中反向互补片段特异性对rna干扰的影响,同步干扰糖化酶基因glaA、淀粉酶基因amyA及蛋白酶调控因子基因prtT,并利用经rna干扰改造的黑曲霉宿主SH-2表达异源脂肪酶基因tll。研究结果表明,不同长度的靶基因反向互补片段表现出不同程度的rna干扰效应,载体pAMDS-rnai-glaA388对糖化酶的干扰效果(94.40%)比载体pAMDS-rnai-glaA784(70.60%)好;经三基因rnai载体pAMDS-multi-rnai改造的黑曲霉菌株中glaA、amyA、prtT的表达量仅为原始菌株的5.30%、17.10%和34.60%;利用经三基因rnai载体改造的黑曲霉菌株表达脂肪酶tll,最高酶活达到97.27 U/mL,比利用原始菌株表达tll的最高酶活(73.05 U/mL)提高33.16%。因此,rnai技术可以有效降低黑曲霉宿主内源蛋白的表达背景,有利于提高外源基因在黑曲霉细胞工厂中的表达水平和稳定性。

关键词： rna干扰技术黑曲霉细胞工厂糖化酶淀粉酶

rna干扰技术抑制非小细胞肺癌表皮生长因子受体的表达

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中华内科杂志 2004年第5期43卷 345-348页

作者：张敏张新白春学陈杰 MinQ. Wei 复旦大学附属中山医院呼吸疾病研究所上海200032 澳大利亚布里斯班昆士兰大学药物研究室

目的　观察rna干扰技术是否能有效抑制非小细胞肺癌 (NSCLC)细胞株SPC A 1细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达。方法　体外化学合成EGFR序列特异性双链rna(dsrna) ,与Lipofectamine 2 0 0 0结合后转染细胞 (分 4个组 ,A组 :加入无血清D... 详细信息

目的　观察rna干扰技术是否能有效抑制非小细胞肺癌 (NSCLC)细胞株SPC A 1细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达。方法　体外化学合成EGFR序列特异性双链rna(dsrna) ,与Lipofectamine 2 0 0 0结合后转染细胞 (分 4个组 ,A组 :加入无血清DMEM 5 0 0 μl;B组 :加入Lipofectamine2 0 0 0稀释液 2 5 0 μl及无血清DMEM 2 5 0 μl;C组 :加入非特异性dsrna/Lipofectamine复合物 5 0 0 μl;D组 :加入dsrna EGFR/Lipofectamine复合物 5 0 0 μl) ,用Westernblot和流式细胞仪检测EGFR表达。流式细胞仪测细胞周期 ,结合集落形成、化疗敏感性分析观察SPC A 1细胞生物学特性的改变。结果　与A组比较 ,D组EGFR数量减少了 71 31% (P 0 0 5 )。与A组比较 ,D组细胞生长抑制了 78 3% ,集落形成抑制了 6 6 8%。D组G0 G1期细胞百分数较A组增加了 17 4 8% ,D组进入S期的细胞百分数较A组减少了 19 2 0 %。据Origin 6 0计算的IC50 ,dsrna EGFR可将细胞对顺铂的敏感性提高约 7倍。结论　dsrna EGFR可有效抑制SPC A 1细胞EGFR表达 ,将更多的细胞阻滞在G0 G1期 ,抑制细胞增生 ,提高细胞对顺铂的敏感性 ,rna干扰技术为NSCLC基因治疗提供了新策略。

关键词： rna干扰技术非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因表达肿瘤 NSCLC

rna干扰技术裸鼠体内沉默缺氧诱导因子1α的表达对宫颈癌的抑瘤效应

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中华肿瘤杂志 2009年第11期31卷 820-825页

作者：江敬红王卓然蒋丽鲍燕程艳香武汉大学人民医院妇科 430060

目的观察体内沉默缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达后对宫颈癌的抑瘤效应，并探讨其可能的机制。方法将实验用宫颈癌Siha细胞分为李白对照组（转染空载体）、无关对照组（转染尤关对照质粒）和实验组（稳定转染pU-HIF-1α-shrna的真核... 详细信息

目的观察体内沉默缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达后对宫颈癌的抑瘤效应，并探讨其可能的机制。方法将实验用宫颈癌Siha细胞分为李白对照组（转染空载体）、无关对照组（转染尤关对照质粒）和实验组（稳定转染pU-HIF-1α-shrna的真核表达载体），接种裸鼠，建立裸鼠荷瘤模型，观测HIF-1α-shrna对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用。采用免疫组化SP法和Western blot法，检测HIF-1α和葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）蛋白在肿瘤组织中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，检测HIF-1α、GLUT1和己糖激酶Ⅱ（HKⅡ）mrna的表达。采用酶显色法，检测肿瘤组织中的乳酸含量。采用原位末端标记（TUNEL）法，检测细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组和无关对照组明显减慢（P〈0．05）。接种50d后处死裸鼠，实验组裸鼠的肿瘤重量为（1．90±0．28）g，也明显轻于窄白对照组[（2．95±0．77）g]和无关对照组[（2．54±0．56）g，P〈0．01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmrna和蛋白的相对表达量分别为0．45±0．04和1．25±0．92，GLUT1 mrna和蛋白的相对表达量分别为0．32±0．02和1．25±0．48，均明显低于空白对照组和无关对照组（均P〈0．05）。实验组中HKⅡ mrna和乳酸的含量均明显低于空白对照组和无关对照组（均P〈0．05），但凋亡细胞数较空白对照组和无关对照组明显增多（均P〈0．01）。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗，可通过下调靶基因GLUT1和HKⅡ的表达来降低宫颈癌Siha细胞的糖酵解水平，促进肿瘤细胞凋亡，从而发挥抑制宫颈癌生长的作用。

关键词：宫颈肿瘤缺氧诱导因子1α 葡萄糖转运蛋白1 rna干扰技术裸鼠

rna干扰技术抑制A549细胞表皮生长因子受体表达的研究

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中华肿瘤杂志 2004年第12期26卷 713-717页

作者：张敏张新白春学陈杰 MinQ.Wei 复旦大学附属中山医院呼吸病研究所上海200032 澳大利亚昆士兰大学医学系基因治疗研究室

目的探讨rna干扰(rnai)技术抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达后,对A549细胞生物学特性的影响。方法体外化学合成EGFR序列特异性双链rna(dsrna),用Lipofectamine2000转染A549细胞,采用Westernblot技术... 详细信息

目的探讨rna干扰(rnai)技术抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达后,对A549细胞生物学特性的影响。方法体外化学合成EGFR序列特异性双链rna(dsrna),用Lipofectamine2000转染A549细胞,采用Westernblot技术和流式细胞仪检测EGFR的表达,并观察A549细胞周期、集落形成、化疗敏感性等生物学特性的改变。结果序列特异性dsrnaEGFR可显著抑制A549细胞EGFR表达;dsrnaEGFR组细胞生长抑制率为85.0%,集落形成抑制率63.3%;细胞周期分析结果表明,dsrnaEGFR组G0～G1期细胞数较对照组增加了12.7%,进入S期的细胞数较对照组减少了6.6%。转染dsrnaEGFR后,可将A549细胞对顺铂的敏感性提高约4倍。结论dsrnaEGFR可有效抑制A549细胞EGFR的表达,并将更多的细胞阻滞在G0～G1期,抑制细胞增生,显著增加细胞对顺铂的敏感性。rnai可能为NSCLC的基因治疗提供新策略。

关键词： rna干扰技术 A549细胞表皮生长因子受体表达上皮源性肿瘤非小细胞肺癌

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rna干扰技术在药物研究中的应用

中国药理学通报 2005年第4期21卷 400-403页

作者：李新平苏州大学生命科学学院生化与分子生物学教研室江苏苏州215006

rna干扰是由双链rna引发的转录后基因沉默。双链rna经Dicer酶降解成21 23nt的小干扰rna,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mrna。随着rna干扰机制的深入研究与广泛应用,rnai已用在药物研究中的各个领域,尤其在药物开发... 详细信息

rna干扰是由双链rna引发的转录后基因沉默。双链rna经Dicer酶降解成21 23nt的小干扰rna,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mrna。随着rna干扰机制的深入研究与广泛应用,rnai已用在药物研究中的各个领域,尤其在药物开发上,能够解决临床前药物开发的一些瓶颈问题,如药靶鉴定,优化药靶,从而节省时间和资金,并提高成功率,加速药物的临床研究。同时rna在药物研究的其他领域都也显示了卓越的作用,为药物研究提供了强大的工具。

关键词： rna干扰技术药物研究

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rna干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状

重庆医学 2013年第7期42卷 811-814页

作者：田瑞敏鄢佳程王含彦易芳陈建业川北医学院应用技术研究所四川南充637000 川北医学院生物化学教研室四川南充637000

rna干扰（rnainterference，rnai）技术是利用双链rna（double-strandedrna，dsrna），高效、特异性降解细胞内同源信使rna（messengerrna，mrna），从而阻断特定基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。1998年Fire等[1]首次应用rnai技... 详细信息

rna干扰（rnainterference，rnai）技术是利用双链rna（double-strandedrna，dsrna），高效、特异性降解细胞内同源信使rna（messengerrna，mrna），从而阻断特定基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。1998年Fire等[1]首次应用rnai技术将dsrna正义链与反义链的混合物注入线虫体内，结果发现注入dsrna比单独注入单链rna引起的基因沉默要强得多，并可导致子一代同源基因的沉默。

关键词： rna干扰技术肿瘤基因基因功能沉默基因功能抑制肿瘤耐药

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rna干扰技术在器官移植免疫中的研究进展

上海医学 2008年第7期31卷 513-517页

作者：薛利军尹路上海交通大学医学院附属瑞金医院外科 200025

人们早就发现随着细胞内转入基因拷贝数目的增加，其表达水平随之降低，同时内源性同源基因也被转入的基因所抑制。目前已阐明这种抑制的主要机制就是rna干扰（rna interference，rnai），现在认为rnai是一种原始的细胞免疫机制和基因... 详细信息

人们早就发现随着细胞内转入基因拷贝数目的增加，其表达水平随之降低，同时内源性同源基因也被转入的基因所抑制。目前已阐明这种抑制的主要机制就是rna干扰（rna interference，rnai），现在认为rnai是一种原始的细胞免疫机制和基因表达的调控机制，对于维持生物体基因组稳定性非常重要。rnai是由双链rna（double—stranded rna，dsrna）介导的转录后和翻译水平的基因沉默机制，这种dsrna诱发的选择性降解靶基因turna作用，抑制基因表达效应非常迅速，可在数小时内降低其表达，而在24h内完全抑制其表达。rnai很像细胞生物基因组用于抵抗、清除“不想要的”外源遗传元件，维持基因组的稳定性保护机制。

关键词： rna干扰技术器官移植免疫基因组稳定性抑制基因表达基因拷贝数细胞免疫机制 rnai 基因沉默机制

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rna干扰技术在普通外科的应用及发展前景

中华普通外科杂志 2005年第7期20卷 462-464页

作者：孟凡强姜洪池哈尔滨医科大学第一临床医学院肝脾外科中心 150001

分子医学理论的延伸和实验技术的创新极大地促进了外科学的发展,外科学界普遍认为外科手段辅以基因表达干预是治疗复杂性外科疾患的理想方案.rna干扰(rna interference,rnai)技术正是作为一种有效的基因表达干预手段在生物学及基础医学... 详细信息

分子医学理论的延伸和实验技术的创新极大地促进了外科学的发展,外科学界普遍认为外科手段辅以基因表达干预是治疗复杂性外科疾患的理想方案.rna干扰(rna interference,rnai)技术正是作为一种有效的基因表达干预手段在生物学及基础医学中脱颖而出,杂志将其列为2002年度科技突破之首,肯定了其用于基因治疗的有效性,由此推动了rnai技术向普通外科的渗透.目前,科研人员已经将rnai技术应用于抗病毒、抗肿瘤、器官移植方面研究,取得了可喜的成果,现综述如下。

关键词： rna干扰技术普通外科基因压制 rnai技术