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5′tRF-LysCTT对小鼠心肌细胞铁死亡的调控作用及其机制

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精准医学杂志 2024年第4期39卷 289-294页

作者：赵炎王凯程雪丽王昆青岛大学转化医学研究院山东青岛266021

目的探究trna衍生的小rna(tsrna)对小鼠心肌细胞铁死亡的调控作用及其机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测8周龄C57BL/6J小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏、大脑、肌肉中5′tRF-LysCTT的相对表达水平。将原代心肌细胞分为A~D组,A组... 详细信息

目的探究trna衍生的小rna(tsrna)对小鼠心肌细胞铁死亡的调控作用及其机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测8周龄C57BL/6J小鼠心脏、肝脏、脾脏、肾脏、大脑、肌肉中5′tRF-LysCTT的相对表达水平。将原代心肌细胞分为A~D组,A组细胞使用完全培养基培养60 h,B组先使用完全培养基培养24 h,再依次进行饥饿处理12 h,H/R处理24 h,C组和D组细胞分别转染antagomir-NC和antagomir-5′tRF-LysCTT,并于转染24 h后再依次进行饥饿(12 h)和H/R处理(12 h);将原代心肌细胞分为E~G组,E组细胞使用完全培养基培养24 h,F组细胞转染agomir-NC 24 h,G组心肌细胞转染agomir-5′tRF-LysCTT 24 h。采用RT-qPCR检测A~G组小鼠心肌细胞中5′tRF-LysCTT和Ptgs2、Gpx4、Slc7a11的相对表达水平,分别采用亚铁离子比色法测试盒、脂质活性氧(ROS)染色、CCK8试剂盒检测A~G组小鼠心肌细胞内亚铁离子相对水平、ROS水平及心肌细胞的存活率,采用普鲁士蓝染色试剂盒观察A~G组小鼠心肌细胞内铁离子沉积情况。结果RT-qPCR检测结果显示,与肝脏、脾脏、肾脏、大脑、肌肉中相比较,小鼠心脏中5′tRF-LysCTT表达水平最高(F=16.21,t=3.81~7.93,P0.05)。G组与E组相比,心肌细胞内5′tRF-LysCTT和Ptgs2相对表达水平升高、Gpx4和Slc7a11相对表达水平降低、亚铁离子相对水平和ROS水平升高,心肌细胞的细胞存活率降低(t=3.57~91.84,P0.05)。结论5′tRF-LysCTT对于小鼠心肌细胞铁死亡具有调控作用,敲低细胞内5′tRF-LysCTT可以抑制H/R诱导的心肌细胞铁死亡,而过表达5′tRF-LysCTT可促进心肌细胞铁死亡的发生。

关键词： rna,转移 rna,非翻译小片段低氧心肌再灌注损伤肌细胞,心脏铁死亡

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VEGF121体外转染大鼠骨骼肌成肌细胞的实验研究

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中华胸心血管外科杂志 2007年第1期23卷 43-45页

作者：徐磊夏家红张凯伦谢艾妮华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430022

目的研究血管内皮生长因子基因（VEGF121）在原代培养大鼠骨骼肌成肌细胞中的转染表达。方法通过脂质体介导将VEGF121基因转染到原代培养的大鼠骨骼肌成肌细胞中。经RT-PCR、Weaterrv Blot及免疫荧光检测转基因成肌细胞的基因表达情况... 详细信息

目的研究血管内皮生长因子基因（VEGF121）在原代培养大鼠骨骼肌成肌细胞中的转染表达。方法通过脂质体介导将VEGF121基因转染到原代培养的大鼠骨骼肌成肌细胞中。经RT-PCR、Weaterrv Blot及免疫荧光检测转基因成肌细胞的基因表达情况。结果成肌细胞在基因转染后24h即出现VEGF121的表达，于48～72h达表达高峰，以后逐渐下调，维持表达2周左右。转染后的成肌细胞表达VEGF121蛋白质产物明显增加。结论经脂质体介导转染VEGF121基因的大鼠骨骼肌成肌细胞在体外有良好的因基表达，为VEGF基因修饰成肌细胞移植奠定基础。

关键词：内皮,血管内皮生长因子 rna,转移肌,骨骼

Poly(A)加尾-rnase H消化-RT-PCR法分析应激诱导生成5'端trna半分子

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军事医学 2015年第6期39卷 460-463页

作者：刘荻付汉江刘继来朱捷郑晓飞安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京100850

目的建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5'端转移rna(trna)半分子的方法。方法提取应激诱导细胞rna,用poly(A)加尾酶在rna分子3'端加尾后,加入与待测trna的3'端部分序列互补的简并DNA探针杂交,经rnase H消化与DNA探针互补的trna... 详细信息

目的建立一种简便、快速检测应激诱导细胞生成的5'端转移rna(trna)半分子的方法。方法提取应激诱导细胞rna,用poly(A)加尾酶在rna分子3'端加尾后,加入与待测trna的3'端部分序列互补的简并DNA探针杂交,经rnase H消化与DNA探针互补的trna序列,再由oligo(d T)n锚定引物进行逆转录获得互补DNA(c DNA),以5'端trna半分子和锚定引物的序列为PCR反应的上下游引物,PCR扩增检测5'端trna半分子。结果经poly(A)加尾-rnase H消化-RT-PCR-电泳等步骤,可以实现对5'端trna半分子的检测分析。结论 poly(A)加尾-rnase H消化-RT-PCR法的建立实现了5'端trna半分子的简便、快速检测分析,为trna半分子生物学功能研究和检测分析提供了工具。

关键词： rna,转移 trna半分子 poly(A)加尾酶逆转录聚合酶链反应内切核酸酶类 rnase H 分析

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精子tsrna在父系遗传中的作用

国际生殖健康／计划生育杂志 2022年第1期41卷 37-41页

作者：许钰薇李文婧茅欣怡马梲铫丁之德(审校) 上海交通大学医学院上海-渥太华联合医学院临床医学系200025 上海交通大学医学院上海-渥太华联合医学院组织胚胎学与遗传发育学系200025

tsrna(trna-derived small rna)是来源于成熟转运rna(transfer rna,trna)或trna前体的一种小非编码rna(small non-coding rna,sncrna)。研究表明tsrna是一种重要的rna调控因子,有望作为疾病预防、诊断和治疗的生物标志物。不同tsrna表达可能参与蛋白质合成、信使rna(messenger rna,mrna)的翻译转录以及代谢性疾病等多种疾病的发生、发展,并且在精子成熟与代谢性疾病的代际遗传中也扮演了关键角色。阐述tsrna的分类和生物学功能,尤其是在雄性生殖即精子成熟过程中的表达以及在父系相关代际遗传中的作用,对子代健康的保护具有重要意义。

关键词： rna,转移精子精子成熟父系遗传营养和代谢性疾病 tsrna